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1、微生物学实验微生物学实验 微生物的分离纯化微生物的分离纯化及培养及培养吉林大学生物基础实验吉林大学生物基础实验教学中心教学中心吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 分分离离与与纯纯化化：从从混混杂杂的的微微生生物物群群体体中中获获得得只含某一种或某一株微生物的过程。只含某一种或某一株微生物的过程。为为什什么么要要进进行行纯纯培培养养：平平板板上上的的单单一一菌菌落并不一定保证是一种菌。落并不一定保证是一种菌。常用的分离、纯化方法：常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法、稀释涂布平板法单细胞挑取法、稀释涂布平板法 稀释混合平板法、平板划线法稀释混合平板法、平板划线法 微生物的分离
2、、纯化及培养技术微生物的分离、纯化及培养技术吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心一一.目的要求目的要求二二.实验原理实验原理三三.微生物培养技术微生物培养技术四四.结果观察结果观察吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心1.实验目的实验目的 ：1.11.1了解微生物分离和纯化的原理了解微生物分离和纯化的原理 。1.21.2掌握常用的分离纯化微生物的方法。掌握常用的分离纯化微生物的方法。吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 2.2.实验原理实验原理 :从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过
3、程称为微生物分离与纯化。平板一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原分离法普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常微生物在
4、固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。值得指出的是，从微涂布平板或平板划线等技术完成。值得指出的是，从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微还要结合显微镜检测个体形态特征后
5、才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。鉴定才能得到。土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。本实验将采用不同分离、纯化得到许多有价值的菌株。本实验将采用不同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。吉林
6、大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心稀释涂布平板法稀释涂布平板法 ：步步骤骤：1 1、倒倒平平板板：牛牛肉肉膏膏蛋蛋白白胨胨培培养养基基，高高氏氏I I号号培培养养基基，查查氏氏培培养养基基冷冷却却至至55-6055-60时时，混混匀匀后后倒倒平平板板，牛牛肉肉膏膏蛋蛋白胨培养基倒白胨培养基倒4 4皿，高氏皿，高氏I I号培养基和查氏培养基各倒号培养基和查氏培养基各倒3 3皿。皿。2 2、制制备备污污水水稀稀释释液液：10g10g土土样样，加加入入90ml90ml无无菌菌水水中中，在在三三角角瓶瓶中中振振摇摇20min20min。取取0.5ml 0.5ml 加加入入盛盛有有4.
7、5ml4.5ml无无菌菌水水的的试管中，以此类推，制成不同稀释度。试管中，以此类推，制成不同稀释度。3 3、涂涂布布：将将上上述述每每种种培培养养基基平平板板底底面面标标记记稀稀释释度度，然然后后用用无无菌菌吸吸管管从从最最后后三三种种稀稀释释度度，即即1010-4-4、1010-5-5和和1010-6-6的的试管中吸取试管中吸取0.1ml0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。对号放入平板上，用玻棒涂布。4 4、培培养养：高高氏氏I I号号和和查查氏氏倒倒置置培培养养于于2828培培养养箱箱中中培培养养3-5days3-5days，牛牛肉肉膏膏蛋蛋白白胨胨琼琼脂脂培培养养基基在在3737培培养
8、养1-1-2days2days。5 5、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心倒平板倒平板吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心菌悬液的配制菌悬液的配制吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心菌液的稀释菌液的稀释吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心接种接种吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心培养培养吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心微生物的纯化培养微生物的纯化培养吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基
9、础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 平板划线法：平板划线法：1 1、倒倒平平板板，标标记记培培养养基基名名称称，编编号号和和实验日期。实验日期。2 2、划线方法、划线方法 稀释混合平板法稀释混合平板法 ：1 1、先加菌、先加菌2 2、倒平板时注意培养基温度、倒平板时注意培养基温度3 3、混合均匀、混合均匀吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 微生物培养技术：微生物培养技术：1 1、斜面接种、斜面接种2 2、液体培养基接种、液体培养基接种3 3、穿刺接种、穿刺接种 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心（一）斜面接种：由已
10、长好微生物的斜面中挑取少量菌种（一）斜面接种：由已长好微生物的斜面中挑取少量菌种接种至另一空白斜面培养基上。接种至另一空白斜面培养基上。（1 1）接种前用记号笔在距试管口）接种前用记号笔在距试管口23cm23cm位置上，注明菌名、位置上，注明菌名、接种日期等。接种日期等。（2 2）将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈）将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈“V”V”字形。字形。（3 3）用火焰将接种环烧红，然后将接种环来回通过火焰数）用火焰将接种环烧红，然后将接种环来回通过火焰数次。次。（4 4）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于
11、手中。（5 5）将试管口在火焰上微烧一周。）将试管口在火焰上微烧一周。（6 6）将烧过的接种环伸入菌种管内，先将环接触一下没有）将烧过的接种环伸入菌种管内，先将环接触一下没有长菌的培养基部分，使其冷却，长菌的培养基部分，使其冷却，以免烫死菌体，然后用以免烫死菌体，然后用环在菌苔上轻轻地接触，刮下少许培养物，并将接种环慢环在菌苔上轻轻地接触，刮下少许培养物，并将接种环慢慢的从试管中抽出，并迅速地伸入另一试管中，在斜面上慢的从试管中抽出，并迅速地伸入另一试管中，在斜面上划线（波浪或直线），使菌体沾附在培养基上。划线（波浪或直线），使菌体沾附在培养基上。（7 7）将接种环抽出，灼烧管口。）将接种环抽
12、出，灼烧管口。（8 8）塞上棉塞。）塞上棉塞。（9 9）将接种环经火焰灼烧灭菌。）将接种环经火焰灼烧灭菌。吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心（二）液体接种：由斜面菌种接种在液体培养基中（二）液体接种：由斜面菌种接种在液体培养基中 （1 1）接种前用记号笔在距试管口）接种前用记号笔在距试管口23cm23cm位置上，注明菌名、位置上，注明菌名、接种日期等。接种日期等。（2 2）将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈）将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈“V”V”字形。字形。（3 3）用火焰将接种环烧红，然后将接种环来回通过火焰）用火焰将接种环烧红，然后将接种环来
13、回通过火焰数次。数次。（4 4）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。（5 5）将试管口在火焰上微烧一周。）将试管口在火焰上微烧一周。（6 6）参照图（）参照图（7-17-1）（7 7）将接种环抽出，灼烧管口。）将接种环抽出，灼烧管口。（8 8）塞上棉塞。）塞上棉塞。（9 9）将接种环经火焰灼烧灭菌。）将接种环经火焰灼烧灭菌。吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心（三）穿刺接种：这是常用来接种厌氧菌，检查细菌运动（三）穿刺接种：这是常用来接种厌氧菌，检查细菌运动性，或保藏菌种的一种接种方法，接种工具用接种针。性，或保藏菌种的
14、一种接种方法，接种工具用接种针。（1 1）接种前用记号笔在距试管口）接种前用记号笔在距试管口23cm23cm位置上，注明菌名、位置上，注明菌名、接种日期等。接种日期等。（2 2）将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈）将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈“V”V”字形。字形。（3 3）用火焰将接种环烧红，然后将接种环来回通过火焰数）用火焰将接种环烧红，然后将接种环来回通过火焰数次。次。（4 4）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。（5 5）将试管口在火焰上微烧一周。）将试管口在火焰上微烧一周。（6 6）参照图（）参照图（7-1
15、7-1）（7 7）将接种环抽出，灼烧管口。）将接种环抽出，灼烧管口。（8 8）塞上棉塞。）塞上棉塞。（9 9）将接种环经火焰灼烧灭菌。）将接种环经火焰灼烧灭菌。吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 将已接种的斜面、半固体和液体将已接种的斜面、半固体和液体培养基放置培养箱中培养将生长好的培养基放置培养箱中培养将生长好的菌种用牛皮纸包好，置菌种用牛皮纸包好，置44冰箱中保冰箱中保存。存。吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 结果与观察：结果与观察：1.1.检查接种后培养物的生长情况和染菌情况。检查接种后
16、培养物的生长情况和染菌情况。2.2.将实验结果填入下表将实验结果填入下表 3.3.绘出平板上出现的菌落的生长和分布情况。绘出平板上出现的菌落的生长和分布情况。4.4.观察与记录以下内容：观察与记录以下内容：序号序号 来源来源 大小大小 形状形状 边缘边缘 颜色颜色 表面表面 代谢物代谢物 种类种类吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心思考题思考题1、如何确定平板上某个单菌落是否是纯培养、如何确定平板上某个单菌落是否是纯培养？请写出主要的实验步骤。？请写出主要的实验步骤。2、分离单孢子前为什么先使孢子萌发？、分离单孢子前为什么先使孢子萌发？3、如果要分离得到极端嗜盐细菌，在什么地、如果要分离得到极端嗜盐细菌，在什么地方取样品为宜？并说明理由。方取样品为宜？并说明理由。4、如果一项科学研究内容需从自然界中筛选、如果一项科学研究内容需从自然界中筛选到能产高温蛋白酶的菌株，你将如何完成？请到能产高温蛋白酶的菌株，你将如何完成？请写出简明的实验方案。写出简明的实验方案。5、为什么高氏一号培养基和马丁氏培养基中、为什么高氏一号培养基和马丁氏培养基中要分别加入要分别加入