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1、第三章 消毒与灭菌 消毒灭菌有关概念消毒灭菌有关概念 1 1 消毒：指杀死病原菌，但不包括芽胞。用以消消毒：指杀死病原菌，但不包括芽胞。用以消 毒的化学药物称为消毒剂。毒的化学药物称为消毒剂。2 2 灭菌：是指杀灭物体上所有微生物灭菌：是指杀灭物体上所有微生物3 3 无菌：物品中没有活的微生物存在，称无菌。无菌：物品中没有活的微生物存在，称无菌。4 4 防腐：是指防止或抑制微生物生长繁殖的方法。防腐：是指防止或抑制微生物生长繁殖的方法。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度为防腐剂低浓度为防腐剂第一节 物理消毒灭菌法 消毒、灭菌的方法一般可分为：热力灭菌法
2、辐射杀菌法 物理学方法 滤过除菌法 超声波杀菌法 干燥和低温抑菌法等 化学方法 一 热力灭菌法分类：干热和湿热灭菌法两类1 干热灭菌法 A 焚烧：B 烧灼：C 干烤：D 红外线：2.湿热灭菌法 A 巴氏消毒法：61.1-62.8经30min，或 71.7经15-30秒钟，常用于 消毒牛乳和酒类等 B 煮沸法：水温100C经5min能杀死一般细菌 的繁殖体。芽胞要煮沸1-2h。C 流通蒸气法：10OC，蒸15-30min，可杀死 细菌的繁殖体，但不能杀死芽胞 D 间歇灭菌法：10OC，蒸15-30min，或75-80 30-60min，每日一次，连续三日，也可达到灭菌的目的 E 高压蒸气灭菌法:
3、是最有效的灭菌法。通常在 1.05kgcm锅内温度可达1213C，维持15-30min，即可达灭菌目的 湿热与干热灭菌效果的比较热型热型 温度（温度（）时间）时间 布层内的温度（布层内的温度（）灭菌效果）灭菌效果 （h h）20 20层层 40 40层层 100 100层层湿热湿热 90-105.3 3 101 101 101.5 90-105.3 3 101 101 101.5 完完 全全干热干热 130-140 4 86 72 70.5 130-140 4 86 72 70.5 不不 完完 全全 湿热比干热灭菌好的原因：1 细菌蛋白质在有水的情况下易于 凝固变性2 湿热穿透力强3 湿热蒸气
4、有潜热存在，水蒸气凝固 成水释放潜热，迅速提高被灭菌物 体的温度二辐射杀菌法1 紫外线：机理：其波长在200-300nm有杀菌作用，其中以265-266nm最强，这与细菌 DNA吸收光谱一致。细菌DNA吸收紫外线后，使一DNA条链上两个相邻胸腺嘧啶共价结合成二聚体，改变了DNA的分子构型，干扰了DNA的复制和转录，导致细菌变异或死亡 作用：用于不耐热物体表面和空气消毒。对人体皮肤、眼睛有损伤作用，使用时应注意防护 2 电离辐射：包括X射线和射线 机制：这些射线可将原子或分子放出电 子变成离子。如水分子电离可产生H+和OH，这些离子有很强的还原与氧化作用，能直接 杀伤细菌；也可与液体中的氧分子结
5、合形 成H2O2，从而使细菌损伤或死亡 用途：一次性塑料制品消毒；食品消毒，不破坏营养成分 3 滤过除菌法 机制：是用滤菌器机械过滤的方法将液 体中或空气中的细菌除去 作用：主要用于一些不耐热的血清、毒 素、抗生素，以及空气的除菌4 超声波杀菌法超声波：是不被人耳感受高于20千周/秒的声 波作用：可裂解多细菌，尤其对G+更敏感 目前主要用于粉碎细胞，提取细胞组 分或制备抗原等5 干燥与低温抑菌法 作用：干燥法常用于保存食物，浓盐或糖渍食品可使细菌脱水，造成生理干燥，使细菌生命活动停止。低温可使细菌新陈代谢减慢，故常用于保存细菌菌种。第二节 化学消毒灭菌法 化学消毒灭菌法：定义：是用化学药品进行
6、消毒的方法。作用机制；使菌体蛋白质变性或凝固，破坏细菌的酶系统 改变细菌细胞壁或胞浆 膜的通 透性，导致细菌死亡。一消毒剂的主要种类、浓度及用途1 酚类：作用：高浓度使菌体蛋白凝固，低浓度破坏 细菌的细胞膜，使胞质内容物渗出浓度：石炭酸为2%-5%、来苏为2%用途：地面、器具表面和皮肤的消毒2 醇类：作用机制：损伤细胞膜，使菌体蛋白变性，灭活酶类浓度：乙醇70%-75%用途：主要用于皮肤的消毒和体温计等的 浸泡3 重金属盐类：作用机制：（1）使细菌发生变性和沉淀（2）使细菌的酶活性丧失种类、浓度与用途：（1）1%硝酸银新生儿滴眼，预防淋球菌感染（2）2%红汞用于皮肤、粘膜和小创伤的消毒（3）0
7、.05-0.01%升汞，非金属器皿的消毒 4 氧化剂：机制：（1）靠氧化作用，灭活酶类 （2）使蛋白质变性 种类和用途：（1）0.1%高锰酸钾，皮肤、尿道、水果等 （2）3%过氧化氢，创伤、皮肤粘膜消毒 （3）2%-2.5%碘酒,皮肤消毒 （4）0.2ppm-0.5ppm氯，饮水和游泳池消毒 （5）10%-20%漂白粉，地面、厕所与排泄物 消毒5表面活性剂：机制：（1）损伤细胞 （2）灭活酶类 （3）蛋白质沉淀种类和用途：（1）0.05%-0.1%新洁尔灭，皮肤粘膜消毒、浸泡手术器械 （2）0.05%-0.1%杜灭芬，伤口冲洗，金属 器械、塑料、橡皮类消毒6 烷化剂：机制：使菌体蛋白和核酸的烷
8、基化 种类、浓度及作用：（1）10%甲醛，物品表面、空气消毒 （2）2%戊二醛，精密仪器、内窥镜等消毒缺点：对人体有一定的毒性，且有的有致癌 作用，如-内脂 二 消毒剂的应用 1病人的排泄物：等量的20%漂白粉、5%石 炭酸或2%来苏、搅拌均匀，作用2小时 2皮肤：2.5%碘酒、70%酒精、2%红汞 3粘膜：1%硝酸银、3%过氧化氢、0.1%高锰酸钾等 4饮水:氯气、漂白粉 5厕所：生石灰 6空气：甲醛熏蒸 7手：2%来苏、2%碘酊、70%酒精 第三节 影响消毒灭菌的因素n n消毒剂的性质、浓度与作用时间n n微生物的种类与数量n n温度n n酸碱度n n有机物第四章 噬菌体 第一节 噬菌体的
9、生物学性状 概念：噬菌体是感染细菌、真菌、放线 菌或螺旋体的病毒 特点：（1）个体微小、可通过细滤菌器 （2）结构简单，由蛋白质和核酸组成 （3）专性细胞内寄生 （4）复制的方式繁殖 （5）分布广泛 一 形态与结构1 1形态基本有三种形态基本有三种 蝌蚪形蝌蚪形 微球形微球形 丝形丝形 2 2结构结构 头部：头部：尾部包括尾髓、尾部包括尾髓、尾板、尾鞘、尾尾板、尾鞘、尾刺和尾丝刺和尾丝 二二 化学组成化学组成1 1核酸：为核酸：为DNADNA或或RNARNA，DNADNA多多 为双链的，为双链的，RNARNA多为单链多为单链 作用：噬菌体的遗传物质作用：噬菌体的遗传物质 2 2蛋白质：构成头部
10、的衣壳和尾部蛋白质：构成头部的衣壳和尾部 作用：保护核酸作用：保护核酸 构成衣壳和尾部构成衣壳和尾部 决定外型和表面特性决定外型和表面特性 三三 抗原性抗原性 噬菌体具有抗原性，可刺激机体产生抗体，噬菌体具有抗原性，可刺激机体产生抗体，此抗体能抑制感染，但对以进入细菌内的噬此抗体能抑制感染，但对以进入细菌内的噬 菌体无效菌体无效 四四 抵抗力抵抗力 比一般细菌繁殖体强，加热比一般细菌繁殖体强，加热7530 7530 分分 灭活，耐低温和冰冻，对紫外线和射线敏感灭活，耐低温和冰冻，对紫外线和射线敏感 第 二节 毒性噬菌体1 1概念：能在宿主菌细胞内复制增殖，产概念：能在宿主菌细胞内复制增殖，产
11、生许多子代噬菌体，并最终将细菌生许多子代噬菌体，并最终将细菌 裂解的噬菌体称毒性噬菌体裂解的噬菌体称毒性噬菌体 2 噬菌体的复制周期（溶菌周期）概念：从噬菌吸附至细菌上，到细菌溶 解，释放出子代噬菌体的过程 过程：分四个阶段 （1 1）吸附）吸附 （2 2）穿入）穿入 （3 3）生物合成）生物合成 （4 4）成熟与释放）成熟与释放 第三节 温和噬菌体 概念：（1）温和噬菌体（溶原性噬菌体）（2）前噬菌体 （3）溶原性细菌 （4）溶原性转换 2 温和噬菌体的三种可能存在状态（1）游离的具有感染性的噬菌体颗粒（2）宿主菌胞质内类似质粒形式的噬菌 体核酸（3）前噬菌体 另外，温和噬菌体可有溶原性周期和溶菌性周期，毒性噬菌体只有一个溶菌性周期 第四节 噬菌体的应用 一一 细菌的鉴定与分型细菌的鉴定与分型 二二 分子生物学研究的重要工具分子生物学研究的重要工具 三三 细菌感染的诊断与治疗细菌感染的诊断与治疗