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1、原生质体的制备原生质体的制备原生质体的制备原生质体的制备目的要求目的要求掌掌握握植植物物原原生生质质体体的的分分离离制制备备技术，观察原生质体的形态。技术，观察原生质体的形态。实验原理实验原理 分离原生质体常采用酶解法。其原理是根据由分离原生质体常采用酶解法。其原理是根据由纤维素酶、果胶酶和半纤维素酶配制而成的溶液对纤维素酶、果胶酶和半纤维素酶配制而成的溶液对细胞壁成分的降解作用，而使原生质体释放出来。细胞壁成分的降解作用，而使原生质体释放出来。原生质体的产率和活力与材料来源、生理状态、酶原生质体的产率和活力与材料来源、生理状态、酶液的组成、以及原生质体收集方法有关。酶液通常液的组成、以及原生
2、质体收集方法有关。酶液通常需要保持较高的渗透压，以使原生质体在分离前细需要保持较高的渗透压，以使原生质体在分离前细胞处于质壁分离状态，分离后不致膨胀破裂。渗透胞处于质壁分离状态，分离后不致膨胀破裂。渗透剂常用甘露醇，山梨醇，葡萄糖或蔗糖。酶液中还剂常用甘露醇，山梨醇，葡萄糖或蔗糖。酶液中还应含一定量的钙离子，来稳定原生质膜。游离出来应含一定量的钙离子，来稳定原生质膜。游离出来的原生质体可用过筛法收集。的原生质体可用过筛法收集。实验用品实验用品一、一、材料材料菠菜菠菜二、器材二、器材显显微微镜镜，擦擦镜镜纸纸，剪剪子子，镊镊子子，小小平平皿皿，吸吸管管四四支支，直直式式漏漏斗斗，300300目目
3、尼尼龙龙网网，10ml10ml离离心心管管，载载玻片，盖玻片。玻片，盖玻片。三、试剂三、试剂1.1.洗涤液：甘露醇洗涤液：甘露醇 0.6 M 0.6 M；CaClCaCl2 22H2H2 2O 8 mM O 8 mM NaH NaH2 2POPO4 4HH2 2O 2 MmO 2 Mm，pH 5.6pH 5.62.2.酶液：酶液：实验方法实验方法1 1、酶液的制备、酶液的制备 2 2、材料准备、材料准备 3 3、酶解、酶解4 4、洗涤、洗涤 观观 察察纯纯化化后后的的原原生生质质体体胚性愈伤组织亦是原生胚性愈伤组织亦是原生质体分离的主要材料质体分离的主要材料思考题思考题1 1、何为原生质体、何为原生质体2 2、分离得到的原生质体可有哪些用途？、分离得到的原生质体可有哪些用途？3 3、为为什什么么酶酶解解材材料料时时，酶酶解解液液要要保保持持较较高的渗透压？高的渗透压？