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1、原生质体的制备第1页，共10页，编辑于2022年，星期五目的要求目的要求掌掌握握植植物物原原生生质质体体的的分分离离制制备备技技术，观察原生质体的形态。术，观察原生质体的形态。第2页，共10页，编辑于2022年，星期五实验原理实验原理 分离原生质体常采用酶解法。其原理是根据由纤维素分离原生质体常采用酶解法。其原理是根据由纤维素酶、果胶酶和半纤维素酶配制而成的溶液对细胞壁成分的酶、果胶酶和半纤维素酶配制而成的溶液对细胞壁成分的降解作用，而使原生质体释放出来。原生质体的产率和活降解作用，而使原生质体释放出来。原生质体的产率和活力与材料来源、生理状态、酶液的组成、以及原生质体收力与材料来源、生理状态
2、、酶液的组成、以及原生质体收集方法有关。酶液通常需要保持较高的渗透压，以使原生集方法有关。酶液通常需要保持较高的渗透压，以使原生质体在分离前细胞处于质壁分离状态，分离后不致膨胀破质体在分离前细胞处于质壁分离状态，分离后不致膨胀破裂。渗透剂常用甘露醇，山梨醇，葡萄糖或蔗糖。酶液中裂。渗透剂常用甘露醇，山梨醇，葡萄糖或蔗糖。酶液中还应含一定量的钙离子，来稳定原生质膜。游离出来的原还应含一定量的钙离子，来稳定原生质膜。游离出来的原生质体可用过筛法收集。生质体可用过筛法收集。第3页，共10页，编辑于2022年，星期五实验用品实验用品一、一、材料材料菠菜菠菜二、器材二、器材显显微微镜镜，擦擦镜镜纸纸，剪
3、剪子子，镊镊子子，小小平平皿皿，吸吸管管四四支支，直直式漏斗，式漏斗，300300目尼龙网，目尼龙网，10ml10ml离心管，载玻片，盖玻片。离心管，载玻片，盖玻片。三、试剂三、试剂1.1.洗涤液：甘露醇洗涤液：甘露醇 0.6 M0.6 M；CaClCaCl2 22H2H2 2O 8 mM O 8 mM NaH NaH2 2POPO4 4H H2 2O 2 MmO 2 Mm，pH 5.6pH 5.62.2.酶液：酶液：第4页，共10页，编辑于2022年，星期五实验方法实验方法1 1、酶液的制备、酶液的制备 2 2、材料准备、材料准备 3 3、酶解、酶解4 4、洗涤、洗涤 第5页，共10页，编辑于2022年，星期五观观 察察纯纯化化后后的的原原生生质质体体第6页，共10页，编辑于2022年，星期五胚性愈伤组织亦是原生质胚性愈伤组织亦是原生质体分离的主要材料体分离的主要材料第7页，共10页，编辑于2022年，星期五思考题思考题1 1、何为原生质体、何为原生质体2 2、分离得到的原生质体可有哪些用途？、分离得到的原生质体可有哪些用途？3 3、为为什什么么酶酶解解材材料料时时，酶酶解解液液要要保保持持较较高高的的渗透压？渗透压？第8页，共10页，编辑于2022年，星期五淘宝网夏靴，网格http:/