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1、细胞生物学实验心得细胞生物学实验心得一、关于动植物细胞染色体标本一、关于动植物细胞染色体标本的制备的制备（一）取材有丝分裂：植物根尖、茎尖；动物骨髓细胞、羽髓细胞、培养的血细胞等减数分裂：植物花粉、动物精巢等 （二）材料固定目的：（1）迅速杀死细胞，防治细胞自溶、腐败；（2）使细胞中的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持生前的形态。（3）利于染色。常用固定液：卡诺氏固定液，用于固定染色体标本的配方为Carnoy（甲醇：冰醋酸1：1）使用方法：1520倍于固定材料的固定液固定数小时至过夜（三）材料保存固定好的组织可长期保存于70酒精中（四）染色组织压片染色体制备常用染液：醋酸洋红染
2、液、改良苯酚（石碳酸）品红染液、龙胆紫染液细胞悬液滴片常用染液：吉姆萨（Giemsa）染液组织整染技巧：切碎染染液配制注意1、注意配方。龙胆紫用2的醋酸配制和用水配制使用效果不同，前者较好2、注意染液成熟。醋酸洋红染液、改良苯酚（石碳酸）品红染液、吉姆萨（Giemsa）染液配好后均需成熟一段时间，当时染色效果不好染液使用注意龙胆紫染染色体时染色时间要短（不超过1分钟），并且最好加水分色吉姆萨染液只能用于干燥的滴片标本，染色时加液要多或扣染，染色结束冲洗时要带染液一起冲洗（五）压片技巧三步曲：切、敲、压二、关于细胞膜选择通透性的实验细胞膜选择通透性的实验常做实验：植物细胞质壁分离实验、死活细胞染
3、色鉴定实验常用材料：紫皮洋葱、水绵其它可用材料?带叶肉细胞的叶下表皮、0.03%中性红水溶液中泡过的洋葱内表皮常用试剂：30蔗糖、0.4台盼蓝染液 水绵（一种藻类）涉及问题1、选择性透性是活细胞的特性2、造成质壁分离的机制？3、质壁分离实验可用葡萄糖或氯化钠做吗？4、与质壁分离程度有关的主要因素？不透膜的溶质分子数三、关于细胞计数 （一）细胞计数板的结构（一）细胞计数板的结构第一种：5大方格，中间大方格组成为1625（16个中方格，每个中方格内25个小方格）400第二种：5大方格，中间大方格组成为2516（25个中方格，每个中方格内16个小方格）400（二）计数板上标识数目含义1/400mm2
4、：中间大方格共有400个小方格，每小格面积为1/400mm20.1mm：计数板底部到盖玻片的高度（三）计数板使用方法（三）计数板使用方法 清洁盖片加样计数清洁盖片加样计数清洁：先用水，再用药棉蘸取75%酒精加样：液滴接触盖玻片的边缘，使悬液通过毛细作用渗入计数室计数范围压线细胞计数原则（四）细胞悬液密度计算计两大格的计算方式：细胞密度（个/ml）（2大格细胞总数/2）104 稀释倍数16格25格的血球计数板计算公式：细胞数ml=4中格内细胞个数和/416104稀释倍数25格x16格的血球计数板计算公式：细胞数ml=5中格内细胞个数和/525104稀释倍数四、关于细胞涂片制备材料：单细胞悬液涂片
5、易出现问题：太厚或太薄不便观察；动物细胞带水太多缓慢干燥引起失水解决方法：用样减少；用固定液；用抗凝剂后离心血涂片染色用的瑞氏（Wright）染液染色方法先用蜡笔对选定的区域划线（用作堤防，阻止染液扩散）；然后滴加适量染液覆盖选定区域，染1分钟（液面应浮现一层金黄色金属物质，表示染液起了染色作用）；再滴加等量蒸馏水或pH6.4的磷酸盐缓冲液稀释染液，轻摇混匀，染色5min；不要倒掉染液，流水或滴加蒸馏水直接洗去浮液 五、关于淀粉染色染液：碘-碘化钾染液。配法：取碘化钾3克，溶于100毫升蒸馏水，加热使之溶解,然后加 入1克结晶碘溶解后，放于棕色瓶中保存。使用：用于淀粉的鉴定时，将其稀释35倍；观察淀粉粒上轮纹，需稀释100倍以上马铃薯淀粉上的轮纹花生淀粉花生脂肪