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1、医学细胞生物学实验医学细胞生物学实验教教 师：李学英、杨明理师：李学英、杨明理联系方式：联系方式：86096928609692实验课要求实验课要求 预习预习 穿白大衣并扣好穿白大衣并扣好 认真操作认真操作 爱护仪器爱护仪器 保持卫生保持卫生 保持安静保持安静实验完成后：实验完成后：1、将动物尸体扔到门口动物垃圾桶中；集中、将动物尸体扔到门口动物垃圾桶中；集中 送到动物中心焚烧；送到动物中心焚烧；2、清洗并检查自己桌面上的器材（弯盘、镊、清洗并检查自己桌面上的器材（弯盘、镊 子等）；子等）；3、做好显微镜使用登记，盖好防尘罩；、做好显微镜使用登记，盖好防尘罩；4、将用过的载玻片刷洗干净后放入回收
2、盆中、将用过的载玻片刷洗干净后放入回收盆中;5、盖玻片、吸水纸等扔到垃圾桶中。、盖玻片、吸水纸等扔到垃圾桶中。本学期实验进度安排本学期实验进度安排细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示细胞内细胞内DNADNA和和RNARNA的原位显示的原位显示线粒体的观察线粒体的观察细胞膜的通透性观察细胞膜的通透性观察小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察细胞内过氧化物酶的原位显示细胞内过氧化物酶的原位显示细胞有丝分裂的观察细胞有丝分裂的观察设计型实验报告指导设计型实验报告指导动物细胞融合动物细胞融合细胞核的分离与鉴定细胞核的分离与鉴定小白鼠骨髓细胞染色
3、体标本的制备小白鼠骨髓细胞染色体标本的制备第一次第一次(验证型验证型)第二次第二次(验证型验证型)第三次第三次 (验证型验证型)第四次第四次 (设计型设计型)第五次第五次（设计型）（设计型）第六次第六次 (验证型验证型)P28P28P23P42P46P28P56P34P38P78第一次实验第一次实验 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 细胞内细胞内DNADNA和和RNARNA的原位显示的原位显示 线粒体的观察线粒体的观察显示细胞内化学组分和细胞器应选用什么技术显示细胞内化学组分和细胞器应选用什么技术显示细胞内化学组分和细胞器应选用什么技术显示细胞内化学组分和细
4、胞器应选用什么技术 细胞化学法细胞化学法(cytochemical methods)(cytochemical methods)在保持细胞结构的基础上，利用某些化学物质与在保持细胞结构的基础上，利用某些化学物质与细胞内某种成分发生化学反应，在局部范围形成有色细胞内某种成分发生化学反应，在局部范围形成有色沉淀的原理，对细胞的化学成分进行定性、定位和定沉淀的原理，对细胞的化学成分进行定性、定位和定量的研究。量的研究。细胞结构细胞结构化学反应化学反应有色有色沉淀沉淀定性、定位和定定性、定位和定量量 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 实验目的实验目的 1 1、掌握酸
5、、碱性蛋白在细胞内的分布情况；、掌握酸、碱性蛋白在细胞内的分布情况；2 2、了解酸、碱性蛋白显色反应的一般原理和方法。、了解酸、碱性蛋白显色反应的一般原理和方法。实验原理实验原理 v由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱性基团数量不由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱性基团数量不同，生理条件下，整个蛋白质带负电荷多则为酸性蛋同，生理条件下，整个蛋白质带负电荷多则为酸性蛋白，带正电荷多则为碱性蛋白。可用不同白，带正电荷多则为碱性蛋白。可用不同pHpH值的固绿值的固绿染色，即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。染色，即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。v三氯醋酸三氯醋酸可抽提掉核酸，避免影响实验结果可抽提掉核
6、酸，避免影响实验结果 操作流程操作流程 制血涂片制血涂片晾干晾干5min 95%乙醇乙醇固定固定晾干晾干 90三氯醋酸三氯醋酸20min抽提抽提流水冲洗流水冲洗晾干晾干染色染色冲洗、晾干冲洗、晾干镜检镜检蟾蜍蟾蜍双毁髓法双毁髓法处死处死 20min0.1%碱碱性性固固绿绿心心脏脏血血5min0.1%酸酸性性固固绿绿染色染色冲洗、晾干冲洗、晾干镜检镜检 注意事项注意事项 1 1、处死蟾蜍的过程要注意安全；、处死蟾蜍的过程要注意安全；2 2、血涂片制作不宜过厚，切勿反复推片；、血涂片制作不宜过厚，切勿反复推片；3 3、三氯醋酸要冲洗彻底。、三氯醋酸要冲洗彻底。细胞内细胞内DNADNA和和RNARN
7、A的原位显示的原位显示1 1、掌握、掌握DNADNA和和RNARNA在细胞内的分布情况；在细胞内的分布情况；2 2、了解、了解DNADNA和和RNARNA显色反应的一般原理和方法。显色反应的一般原理和方法。实验目的实验目的 实验原理实验原理 甲基绿和派洛宁是互不混淆、互不影响的两甲基绿和派洛宁是互不混淆、互不影响的两种染色剂，由于其自身分子结构的特点，它们可种染色剂，由于其自身分子结构的特点，它们可与两种聚合程度不同的核酸竞争性结合，从而同与两种聚合程度不同的核酸竞争性结合，从而同时显示细胞内时显示细胞内DNADNA和和RNARNA的分布部位。的分布部位。操作流程操作流程 制血涂片制血涂片晾干
8、晾干10min 95%乙醇乙醇固定固定晾干晾干甲基绿甲基绿-派洛宁液派洛宁液15min染色染色冲洗、晾干冲洗、晾干镜检镜检蟾蜍蟾蜍双毁髓法双毁髓法处死处死心心脏脏血血 注意事项注意事项 v禁止用三氯醋酸处理禁止用三氯醋酸处理v每人制三张血涂片每人制三张血涂片 线粒体的观察线粒体的观察v线粒体（线粒体（mitochondrion）v活体染色（活体染色（vital stainning）显示活细胞内显示活细胞内显示活细胞内显示活细胞内细胞组分、细细胞组分、细细胞组分、细细胞组分、细胞器应采用什胞器应采用什胞器应采用什胞器应采用什么方法？么方法？么方法？么方法？实验目的实验目的 了解线粒体的了解线粒体
9、的活体染色活体染色方法。方法。活体染色：活体染色：应用无毒或毒性较小的染色剂显示活细应用无毒或毒性较小的染色剂显示活细胞内某些天然结构存在的真实性，同时对细胞生命胞内某些天然结构存在的真实性，同时对细胞生命活动影响较小的一种染色方法。活动影响较小的一种染色方法。无毒或毒性较小无毒或毒性较小天然结构天然结构影响较小影响较小 实验原理实验原理 线粒体上的细胞色素氧化酶系可保持詹纳斯线粒体上的细胞色素氧化酶系可保持詹纳斯绿绿B B染料始终处于氧化状态而呈绿色，因此詹纳斯染料始终处于氧化状态而呈绿色，因此詹纳斯绿绿B B可专一性地对线粒体进行活体染色。可专一性地对线粒体进行活体染色。实验步骤实验步骤
10、口腔粘膜口腔粘膜上皮细胞上皮细胞盖片、盖片、镜检镜检取清洁载玻片取清洁载玻片詹詹纳纳斯斯绿绿B液液 1-2滴滴染染色色20min 注意事项注意事项 1 1、取材部位及力度、取材部位及力度2 2、盖片的技巧、盖片的技巧3 3、染液干后的处理、染液干后的处理内容安排内容安排一、实验操作：一、实验操作：完成三个实验内容完成三个实验内容 两人一组，每人一套器械（弯盘、镊子）两人一组，每人一套器械（弯盘、镊子）8 8人一只蟾蜍人一只蟾蜍二、示教二、示教三、完成三、完成作业：作业：1 1、通过本次实验学到了哪些基本操作技能？、通过本次实验学到了哪些基本操作技能？2 2、结合本次实验请阐述细胞化学技术的原理和应用？、结合本次实验请阐述细胞化学技术的原理和应用？3 3、请描述本次实验的镜检结果。、请描述本次实验的镜检结果。本次实验需要学生巩固的概念本次实验需要学生巩固的概念 细胞化学法细胞化学法 本次实验需要学生掌握的实验技能本次实验需要学生掌握的实验技能 1 1、双毁髓处死蟾蜍法、双毁髓处死蟾蜍法 2 2、血涂片制作方法、血涂片制作方法 3 3、流水冲洗方法、流水冲洗方法 4 4、正确的镜检方法（显微观察技术）、正确的镜检方法（显微观察技术）小结小结