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1、 发酵工程第第1章章第2节 微生物的培养技术及应用 微生物的基本培养技术本节聚焦什么是培养基?如何配制?什么是无菌技术?怎样进行酵母菌的纯培养?Copyright 2018 芃苇_PengV.All Rights Reserved.食用自制酸奶导致肠胃不适屡见不鲜从社会中来P9主要原因是在制作过程中有杂菌混入防止杂菌污染,获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提,也是发酵工程的重要基础那么,怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢?在在实验室实验室培养微生物的培养微生物的基本思路基本思路:培养基为微生物提供合适的营养为微生物提供合适的环境条件培养环境确保其他微生物无法混入无菌技术将需要
2、的微生物分离出来分离培养Copyright 2018 芃苇_PengV.All Rights Reserved.天然培养基、合成培养基选择培养基、鉴别培养基一 培养基的配置1.概念:人们按照微生物对 的不同需求,配制出供其_的营养基质。2.作用:用以 微生物或 。3.类型:长有酵母菌菌落的固体培养基(加凝固剂琼脂)营养物质生长繁殖培养、分离、鉴定、保存积累其代谢物P9液体培养基按功能分类:按成分组成:按物理性质:工业生产工业生产微生物分离、鉴定、微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种活菌计数、保藏菌种观察微生物的运动、分类鉴定观察微生物的运动、分类鉴定工业生产工业生产分类、鉴定分类、鉴定培养、分
3、离培养、分离鉴定鉴定液体培养基、固体培养基、半固体培养基微生物在固体培养基表面或内部生长,可以形成肉眼可见的菌落Copyright 2018 芃苇_PengV.All Rights Reserved.一 培养基的配置P104.培养基的营养构成碳源:无机碳源有机碳源例如CO2、CO32-、HCO3-等例如葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等无机氮源有机氮源例如N2、NO3-、NH3、NH4等例如牛肉膏、蛋白胨、尿素等提供碳元素的物质提供氮元素的物质氮源:培养固氮微生物,不需要添加氮源(1)基本营养物质:碳源、氮源、水、无机盐自养微生物异养微生物各种有机物各种有机物是是微生物合成微生物合成蛋白质、核酸蛋白质、
4、核酸等物质所必需的等物质所必需的(培养(培养自养型自养型微生物,微生物,不需要不需要添加碳源)添加碳源)Copyright 2018 芃苇_PengV.All Rights Reserved.(2)还需满足微生物对 pH、特殊营养物质、氧气的需求一 培养基的配置4.培养基的营养构成培养培养厌氧微生物厌氧微生物时,需要时,需要提供提供_的条件。培养培养乳酸杆菌乳酸杆菌时,需要在培养基中添加时,需要在培养基中添加_;培养培养霉菌霉菌时,需要将培养基调至时,需要将培养基调至_;培养培养细菌细菌时,需要将培养基时,需要将培养基调至调至 ;维生素维生素酸性中性或弱碱性无氧表表1-1 1000ml牛肉膏蛋
5、白胨培养基的营养组成牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成组分组分含量含量提供的主要营养提供的主要营养牛肉膏牛肉膏5g5g碳源碳源、氮源、氮源、磷酸盐和维生素等磷酸盐和维生素等蛋白胨蛋白胨10g10g碳源、碳源、氮源氮源和维生素等和维生素等NaClNaCl5g5g无机盐无机盐H2OH2O定容至定容至1000ml1000ml水水P10主要指生长因子:维生素、氨基酸、碱基等Copyright 2018 芃苇_PengV.All Rights Reserved.1.下表是某微生物培养基成分,据表分析:成分KH2PO4NaHPO4MgSO47H2O 葡萄糖尿素琼脂水含量1.4g2.1g0.2g10.0g1.0g
6、15.0g适量(1)该培养基是液体培养基还是固体培养基?。为什么?。(2)表中的KH2PO4、NaHPO4和MgSO47H2O主要为微生物提供 ,葡萄糖为微生物提供 ,尿素为微生物提供 。(3)该培养基培养的微生物同化作用类型是 。理由是什么 。(4)不同微生物所需的pH不同,培养细菌时需要将pH调至 ;培养乳酸杆菌时要在培养基中添加 。【随堂练习】该微生物的碳源和氮源是有机物该微生物的碳源和氮源是有机物异养型微生物异养型微生物固体培养基固体培养基该培养基成分中含有凝固剂琼脂该培养基成分中含有凝固剂琼脂无机盐无机盐氮源氮源碳源碳源中性或弱碱性维生素Copyright 2018 芃苇_PengV
7、.All Rights Reserved.二 无菌技术1.获得纯净的微生物培养物的关键是 。2.无菌技术应围绕着如何避免杂菌的污染展开,主要包括 。防止杂菌污染消毒和灭菌 培养皿培养皿接种环接种环培养基培养基对操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒。对用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。做好消毒和灭菌工作后,要注意:避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品接触。为了避免周围环境中微生物的污染,接下来的许多操作应在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行。P103.消毒和灭菌工作主要包括两个方面:消毒Copyright 2018 芃苇_PengV.All Rights Reserved.
8、类型条件结果常用方法应用范围消毒灭菌4.常用的消毒和灭菌方法:仅杀死物体表面或内部的部分微生物较为温和的物理、化学或生物等方法强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂消毒法紫外线消毒法灼烧灭菌法干热灭菌法(高压蒸汽灭菌法)日常用品,如筷子、碗等不耐高温的液体,如牛奶酒精擦拭双手氯气消毒水源接种室(箱)、超净工作台接种工具玻璃器皿、金属工具培养基、容器湿热灭菌P11接种室、接种箱或超净工作台在使用前可用紫外线(破坏微生物的DNA结构)照射30min。在照射前,适量喷洒石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液,可以加强消毒效果Copyright 2018 芃苇_Peng
9、V.All Rights Reserved.常用的灭菌方法:湿热灭菌利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方法。高压蒸汽灭菌效果最好,100 kPa、121下维持1530min,常用于培养基、无菌水等的灭菌。原理:高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性。优点:操作简便,效果可靠,可以杀灭所有的生物,包括最耐热的某些微生物的休眠体。基本保持培养基的营养成分不被破坏。注:(1)使用后的培养基必须灭菌后才能丢弃,以免污染环境。P11(2)使用高压蒸汽灭菌锅时,一定要将锅内冷空气彻底排出,才能密封升温,否则,可能引起锅内压力达到设定值而温度不能达到要求;Copyright 2018 芃苇_PengV.
10、All Rights Reserved.干热灭菌:干热灭菌箱内160170 下加热23h。对象:耐高温,需保持干燥的物品,适用于玻璃器皿(如试管、培养皿、吸管、注射器)、金属器具(如针头、镊子、剪刀等)的灭菌。干热灭菌箱干热灭菌箱常用的灭菌方法:灼烧灭菌常用于涂布器、接种环、接种针、试管口或其它金属用具等的灭菌。以及接种过程中的试管口或瓶口等易被污染部位直接在酒精灯火焰的充分燃烧层(外焰)灼烧P11Copyright 2018 芃苇_PengV.All Rights Reserved.2.无菌技术的方法、类型和对象连一连【随堂练习】Copyright 2018 芃苇_PengV.All Rights Reserved.3.在生产、生活和科研实践中,经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题:(1)在实验室中,玻璃和金属材质的实验器具_(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法,与煮沸消毒法相比,这种方法的优点是_。可以在达到消毒目的的同时,营养物质损失较少(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒,其原因是紫外线能_ _。在照射前,适量喷洒_,可强化消毒效果。(4)水厂供应的自来水通常是经过_(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。破坏微生物DNA结构消毒液氯气【随堂练习】