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1、动物染色体标本的制备与观察动物染色体标本的制备与观察一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理三、实验步骤三、实验步骤四、作业四、作业一、实验目的一、实验目的1.掌掌握握动动物物骨骨髓髓细细胞胞染染色色体体标标本本制制备备基基本本过过程程，了了解解各各个个操操作作步步骤骤的原理。的原理。2.了了解解常常用用实实验验动动物物染染色色体体的的数数目目及特点。及特点。二、实验原理二、实验原理u凡凡处处于于增增殖殖状状态态的的细细胞胞，或或者者经经过过处处理理进进入入分分裂裂的的细细胞胞即即可可用用于于染染色色体体分分析析。在在动动物物的的各各种种组组织织中中，骨骨髓髓是是不不断断分分裂裂的的组
2、组织织之之一一，是是细细胞胞遗遗传传学学研研究究的的好好材材料。料。u进进行行染染色色体体观观察察、分分析析，需需要要选选择择处处于于分分裂裂中中期期的的细细胞胞。给给动动物物注注射射一一定定量量的的秋秋水水仙仙素素即即可可使使许许多多处处于于早早期期分分裂裂相相的的细胞停滞于中期。细胞停滞于中期。三、实验步骤三、实验步骤1.动动物物按按30g/g体体重重的的剂剂量量经经腹腹腔腔注注射射秋秋水水仙仙素素，78小小时时后后杀杀死死蛙蛙，取取后后肢肢股股骨骨和和胫胫骨骨，剥剥掉掉全全部部肌肌肉肉，剪剪去去股骨和胫骨两端。股骨和胫骨两端。2.用用注注射射器器将将 6ml 1%柠柠檬檬酸酸钠钠溶溶液液
3、通通过过针针头头注注入入骨骨髓髓腔腔，冲冲出出骨骨髓髓细细胞胞至至小小碟碟内内，直直至至股股骨骨变变为为白白色色为为止止。摘摘掉掉针针头头，用用注注射射器器轻轻轻轻反反复复吸吸打打，使分散成单个细胞。使分散成单个细胞。3.将将骨骨髓髓细细胞胞转转入入离离心心管管，以以1500r/min离离心心8 min，弃，弃上清。上清。4.在在离离心心管管中中加加入入事事先先预预热热至至30的的0.4%KCL溶溶液液5ml，将将沉沉淀淀轻轻轻轻吹吹散散，置置30水水浴浴中中低低渗渗30min。5.以以1500r/min离离心心8 min。弃弃上上清清液液，沿沿离离心心管管壁壁缓缓慢慢加加入入新新配配制制的的
4、甲甲醇醇:冰冰醋醋酸酸(3:1)固固定定液液5ml，加固定液时注意不要冲动细胞团块。加固定液时注意不要冲动细胞团块。6.加加完完固固定定液液后后，立立即即用用吸吸管管将将细细胞胞轻轻轻轻吸吸打打均均匀匀,静静置置固固定定10min，1500r/min离离心心10 min，弃弃上清液上清液。如此反复固定。如此反复固定1次次，离心，离心10 min。7.固固定定的的细细胞胞经经离离心心后后，吸吸去去上上层层固固定定液液，视视管管底底细细胞胞多多寡寡加加入入1-2ml新新配配制制的的固固定定液液，将将细细胞胞团团块轻轻吸打成悬液。块轻轻吸打成悬液。8.在在干干净净、湿湿、冷冷的的载载玻玻片片上上滴滴
5、2-3滴滴上上层层细细胞胞悬液悬液，自然干燥自然干燥（滴片滴片）。9.将玻片标本插入吉姆萨染液中将玻片标本插入吉姆萨染液中，染色染色5 min。10.用用小小烧烧杯杯盛盛蒸蒸馏馏水水略略洗洗，再再用用吸吸水水纸纸擦擦干干玻玻片片标标本底面和四周本底面和四周，显微镜观察和分析。显微镜观察和分析。青蛙骨髓细胞染色体核型（2n=26）四、作业四、作业 绘制染色体图并作简要分析绘制染色体图并作简要分析。例例如如：细细胞胞密密度度是是否否适适中中，分分裂裂细细胞胞的的比比例例如如何何，处处于于分分裂裂中中期期相相的的细细胞胞数数量量情情况况，染色体形态染色体形态、数目数目、有否、有否重叠重叠等。等。滴片的制作滴片的制作1m