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1、实验一 染色体玻片标本的制作与染色体观察辽宁师范大学生命科学学院张剑锋精 1一、实验原理 植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间(am9,pm3)，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。精 2二、实验目的 根尖染色体压片法是观察植物染色体最常用的方法，也是研究染色体组型、染色体分带、染色体畸变和姊妹染色单体交换的基础。精 3三、实验材料 大蒜(Aillum sativum)(2n=16)的鳞基。精 4四、实验器具和药品1.用具：染色板、载玻片、盖玻片、指管、温度计、试剂瓶、滴瓶、镊子、解剖针和毛边纸等。2.药品：无水酒精
2、、70酒精、冰醋酸、对二氯苯或秋水仙素、醋酸钠、碱性品红、石碳酸、甲醛、山梨醇、纤维素酶、果胶酶、中性树胶或油派胶(Euparal)和二甲苯。卡诺固定液的配制：卡诺固定液的配制：3 3 份无水酒精，加份无水酒精，加1 1 份冰醋酸份冰醋酸(现配现现配现用用)。酶液的配制：酶液的配制：以以0.1mol/L 0.1mol/L 醋酸钠为溶剂，配成纤维素酶醋酸钠为溶剂，配成纤维素酶(2(2)和果胶酶和果胶酶(0.5(0.5)的混和液。的混和液。精 5染色液的配制：染色液的配制：配方 配方：石碳酸品红 石碳酸品红(Carbol.fuchsin)(Carbol.fuchsin)染色液，先配母液 染色液，先
3、配母液A A 和 和B B。母液 母液A A：称取 称取3 3 克碱性品红，溶解于 克碱性品红，溶解于100 100 毫升的 毫升的70 70 酒精中 酒精中(此液可 此液可长期保存 长期保存)。母液 母液B B：取母液 取母液A 10 A 10 毫升，加入 毫升，加入90 90 毫升的 毫升的5 5 石碳酸水溶液 石碳酸水溶液(2(2 周内 周内使用 使用)。石碳酸品红染色液：石碳酸品红染色液：取母液 取母液B 45 B 45 毫升，加入 毫升，加入6 6 毫升冰醋酸和 毫升冰醋酸和6 6 毫升 毫升37 37 的甲醛。此染色液含有较多的甲醛，在植物原生质体培养过 的甲醛。此染色液含有较多的
4、甲醛，在植物原生质体培养过程中，观察核分裂比较适宜，后来在此基础上，加以改良的配方 程中，观察核分裂比较适宜，后来在此基础上，加以改良的配方，称改良石碳酸品红，可以普遍应用于植物染色体的压片技术。，称改良石碳酸品红，可以普遍应用于植物染色体的压片技术。配方 配方：改良石碳酸品红 改良石碳酸品红取配方 取配方 石碳酸品红染色液 石碳酸品红染色液2-10 2-10 毫升，加入 毫升，加入90-98 90-98 毫升 毫升45 45 的醋酸 的醋酸和 和1.8 1.8 克山梨醇 克山梨醇(sorbitol)(sorbitol)。此染色液初配好时颜色较浅，放置二周。此染色液初配好时颜色较浅，放置二周后
5、，染色能力显著增强，在室温下不产生沉淀而较稳定。后，染色能力显著增强，在室温下不产生沉淀而较稳定。精 6五、实验说明1.根尖取材方便，是观察植物染色体最常用的材料，也可以用茎尖作为材料。2.植物细胞分裂周期的长短不同，在十到几十小时之间，温度影响分裂周期，对于一个不太熟悉的实验材料，最好在特定温度下长根，掌握有丝分裂高峰期，以便得到更多的有丝分裂的细胞。3.前处理的目的是降低细胞质的粘度，使染色体缩短分散，防止纺锤体形成，让更多的细胞处于分裂中期，一般在分裂高峰前，把根尖放到药剂中处理3-4 小时。可处理的药剂很多，如秋水仙素、对二氯苯、8-羟基喹啉等。4.解离的目的是使分生组织细胞间的果胶质
6、分解，细胞壁软化或部分分解，使细胞和染色体容易分散压平，解离方法有酸解法和酶解法。精 7六、实验步骤（一）培养及前处理：将大蒜鳞基置于盛水的小烧杯上，放在25温箱中，待根长到2cm 左右时（见图1-1），在上午九时摘下根尖，放到对二氯苯饱或0.02秋水仙素溶液中，浸泡处理3-4 小时。精 8图1-1 大蒜的培养精 9（二）（二）固定及保存：固定及保存：经过前处理的根尖，再放到经过前处理的根尖，再放到卡诺固定液中固定卡诺固定液中固定2424小时。固定材料可以转入小时。固定材料可以转入7070酒精中，在酒精中，在44冰箱中保存，保存时间最好不超冰箱中保存，保存时间最好不超过二个月。过二个月。（三）
7、（三）解离解离(酸解酸解)：从固定液中取出大蒜根尖，用从固定液中取出大蒜根尖，用蒸馏水漂洗，再放到蒸馏水漂洗，再放到0.1mol/LHCl0.1mol/LHCl中，在中，在6060水浴水浴中解离中解离8-108-10分钟，用蒸馏水漂洗后，放在染色板分钟，用蒸馏水漂洗后，放在染色板上，加上几滴改良石碳酸品红染色液，根尖着色上，加上几滴改良石碳酸品红染色液，根尖着色后即可压片观察。后即可压片观察。精 10（四）（四）压片：压片：把染色后的根尖放在清洁的载玻片上，用解剖针 把染色后的根尖放在清洁的载玻片上，用解剖针把根冠及延长区部分截去，加上少量染色液，并盖上盖玻片。把根冠及延长区部分截去，加上少量
8、染色液，并盖上盖玻片。一个解离良好的材料，只要用镊子尖轻轻的敲打盖玻片，分生 一个解离良好的材料，只要用镊子尖轻轻的敲打盖玻片，分生组织细胞就可铺展成薄薄的一层，再用毛边纸把多余的染色液 组织细胞就可铺展成薄薄的一层，再用毛边纸把多余的染色液吸干，经显微镜检查后，选择理想的分裂细胞，再在这个细胞 吸干，经显微镜检查后，选择理想的分裂细胞，再在这个细胞附近轻轻敲打，使重叠的染色体渐渐分散，就能得到理想的分 附近轻轻敲打，使重叠的染色体渐渐分散，就能得到理想的分裂相，要达到这个目的，必需掌握以下几点：裂相，要达到这个目的，必需掌握以下几点：1.1.压片材料要少，避免细胞紧贴在一起，细胞和染色体没有
9、伸 压片材料要少，避免细胞紧贴在一起，细胞和染色体没有伸展的余地。展的余地。2.2.用镊子敲打盖玻片时，用力要均匀，若在压片时稍不留意，用镊子敲打盖玻片时，用力要均匀，若在压片时稍不留意，使个别染色体丢失，而被迫放弃一个良好的分裂相的细胞。使个别染色体丢失，而被迫放弃一个良好的分裂相的细胞。（五）（五）封片：封片：把压好的玻片标本，放在干冰或冰箱结冰器里冻结。把压好的玻片标本，放在干冰或冰箱结冰器里冻结。然后用刀片迅速把盖玻片和载玻片分开，用电吹风把玻片吹干 然后用刀片迅速把盖玻片和载玻片分开，用电吹风把玻片吹干后，滴上油派胶加上盖玻片封片，或经二甲苯透明后，滴中性 后，滴上油派胶加上盖玻片封片，或经二甲苯透明后，滴中性树胶，加盖玻片封片，做成永久封片。树胶，加盖玻片封片，做成永久封片。精 1 1七、结果拍摄并绘制根尖染色体的各分裂相。精 12图1-2 有丝分裂模式图精 13图图1-3 1-3 低倍镜下低倍镜下大蒜根尖细胞大蒜根尖细胞有丝分裂各期有丝分裂各期精 14 图图1-4 1-4 大蒜根尖细胞有丝分裂后、末期大蒜根尖细胞有丝分裂后、末期精 15八、作业1.绘制大蒜根尖细胞有丝分裂各时期图象。2.说明某一影响制片效果因素的方法、目的和原理。精 16