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1、脲酶活性的测定脲酶活性的测定本讲稿第一页，共十二页一、实验目的一、实验目的1 1、掌握大豆制品中脲酶活性的测定、掌握大豆制品中脲酶活性的测定原理原理2 2、熟悉掌握用、熟悉掌握用PHPH增值法测定大豆增值法测定大豆制品中脲酶活性制品中脲酶活性本讲稿第二页，共十二页二、二、测定原理测定原理 将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在混合，在3030保持保持3030分钟，尿素酶催化尿分钟，尿素酶催化尿素水解产生氨，由于尿素水解释放的氨是素水解产生氨，由于尿素水解释放的氨是碱性的，可使溶液碱性的，可使溶液PHPH值升高，试样溶液与值升高，试样溶液与空白溶液的空白溶液
2、的PHPH值之差，即可间接表示出氨值之差，即可间接表示出氨量的多少。量的多少。NHNH2 2CONHCONH2 2+尿素酶尿素酶 2NH 2NH3 3 +CO+CO2 2本讲稿第三页，共十二页三、仪器及试剂三、仪器及试剂1 1、仪器、仪器u分析天平、样品粉碎机、样品分析分析天平、样品粉碎机、样品分析筛、恒温水浴、酸度计、称量瓶、筛、恒温水浴、酸度计、称量瓶、移液管、角匙等移液管、角匙等本讲稿第四页，共十二页u0.05mol/L磷酸盐缓冲液、尿素缓冲溶磷酸盐缓冲液、尿素缓冲溶液等液等2 2、试剂、试剂四、试样的选取和制备四、试样的选取和制备 选取具有代表性的试样，粉碎至选取具有代表性的试样，粉碎
3、至4040目，用目，用“四分法四分法”缩减至缩减至200200300g300g，密，密闭保存，以防试样组分变化或变质。闭保存，以防试样组分变化或变质。本讲稿第五页，共十二页五、测定步骤五、测定步骤1 1、样品试验：、样品试验：准确称取准确称取0.2000.001g0.2000.001g样品于样品于称量瓶中，加入称量瓶中，加入10ml10ml尿素缓冲溶液，尿素缓冲溶液，加塞混合，然后置于加塞混合，然后置于3030水浴中，水浴中，在混合操作时称量瓶切勿倒置。在混合操作时称量瓶切勿倒置。本讲稿第六页，共十二页2 2、空白试验：、空白试验：准确称取准确称取0.2000.001g0.2000.001g样
4、品于称样品于称量瓶中，加入量瓶中，加入10ml0.05mol/L10ml0.05mol/L磷酸盐磷酸盐缓冲溶液，加塞混合，置于缓冲溶液，加塞混合，置于3030水浴水浴中。中。3 3、样品试验与空白试验的制备应相、样品试验与空白试验的制备应相隔隔5 5分钟，并且每隔分钟，并且每隔5 5分钟搅拌内容分钟搅拌内容物一次。物一次。本讲稿第七页，共十二页4 4、3030分钟后，相隔分钟后，相隔5 5分钟将样品与空白分钟将样品与空白试验的称量瓶从水浴中取出，将上层液试验的称量瓶从水浴中取出，将上层液体移入体移入5ml5ml烧杯中，在从水浴中取出刚烧杯中，在从水浴中取出刚达达5 5分钟时，分别测定此种上层液
5、体的分钟时，分别测定此种上层液体的PHPH值。值。本讲稿第八页，共十二页 1、计算公式：、计算公式：六、结果的计算六、结果的计算 样品试验的样品试验的PHPH值与空白试验的值与空白试验的PHPH值两者值两者之间的差异，则为脲酶活性的指数，即：之间的差异，则为脲酶活性的指数，即：脲酶活性脲酶活性=试样的试样的PHPH测定值测定值-空白的空白的PHPH测定值测定值本讲稿第九页，共十二页 每个样品应取两个平行样测定，以其算每个样品应取两个平行样测定，以其算术平均值为结果。术平均值为结果。2、重复性：、重复性：七、注意事项七、注意事项1 1、关于酸度计的使用、关于酸度计的使用本讲稿第十页，共十二页BACK2 2、称量瓶应塞紧、称量瓶应塞紧3 3、关于固定质量称量法、关于固定质量称量法4 4、通常：、通常：0.02PH0.3 0.02PH0.3 加工适度加工适度 PH0.02 PH0.3 PH0.3 加工不够加工不够本讲稿第十一页，共十二页本讲稿第十二页，共十二页