课程名称药学生物化学实验教案.doc

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1、四四 川川 大大 学学 教教 案案【首页首页】课程名称药学生物化学实验授课专业药学班级2003级课程编号50501920课程类型必修课校级公共课（）；基础或专业基础课（）；专业课（）选修课限选课（）；任选课（）授课方式课堂讲授（）；实践课（）考核方式考试（）；考查（）课程教学总学时数51学 分 数2学时分配课堂讲授学时；实践课51学时教材名称现代药学实验教程作 者吴勇成丽出版社及出版时间四川大学出版社2005.3指定参考书授课教师彭先凤职 称副教授单 位生物制药教研室授课时间2005.8 2005.12注：表中（）选项请打“”四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第2周，第 1

2、 次课2005 年 9 月 5-9 日备注章节名称酚标准曲线制作授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数3教学目的及要求1熟悉标准曲线的制作。2掌握酚显色原理。教学主要内容时间分配1了解实验室规则及要求。2明确实验记录、实验报告的要求。3熟悉移液管的正确使用及精确加量的规范操作。4熟悉 72 型分光光度计的正确使用。5正确绘制标准曲线。第1页教学重点与难点1悉移液管的正确使用及精确加量的规范操作。2正确绘制标准曲线。3实验注意事项。备注启发提问1 加入酚及水后，37水浴保温 5 分钟的意义？2 碱性溶液的作用？3 为什么要在 10 分钟之后、30 分钟之内比色？4 此次实验意义何在？为

3、什么要记录显色时间及比色计编号？外语要求教学手段课堂提问；思考题启示；密切观察并规范操作。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第2页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第3周，第2次课2005年 9 月12-16日备注章节名称蛋白质化学授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数4教学目的及要求1掌握蛋白质的肽键结构，了解用双缩脲反应检查蛋白质水解程度的意义。2了解颜色反应原理及意义。3掌握沉淀反应原理。加深对蛋白质胶体稳定因素的认识。教学主要内容时间分配（1）蛋白质的的水解；酸水解的优缺点及基本操作。（2）肽键的重要作用及水解

4、的涵义。（3）双缩脲反应原理及应用意义。（4）颜色反应原理及应用意义。（5）沉淀反应：盐析沉淀、分段盐析、重金属沉淀、有机酸植物碱试剂沉淀原理及实际用途。（6）沉淀、变性、凝固三者之间的关系。第3页教学重点与难点（1）蛋白质的的水解；酸水解基本操作。（2）肽键的重要作用及水解的涵义。（3）沉淀反应：盐析沉淀、分段盐析、重金属沉淀、有机酸植物碱试剂沉淀原理及实际用途。（4）沉淀、变性、凝固三者之间的关系。备注启发提问1 区别蛋白质水解和变性的异同。2 双缩脲反应阴性，水解液中是否全部为氨基酸？为什么？3 可否用双缩脲反应判断蛋白质的存在？为什么？4 颜色反应的显现说明了什么？应用于哪些方面？5

5、颜色反应中，对照管的颜色比实验管深，为什么？6 用哪些方法可使蛋白质沉淀？原理如何？7 变性沉淀、不变性沉淀分别应用于哪些方面？8 分段盐析实验，为何加蛋白质氯化钠溶液？9 重金属、有机酸沉淀蛋白质时。均未调节 pH，两类试剂沉淀的是否同类蛋白质？是哪类蛋白质？10区别变性、沉淀、凝固之间的异同。外语要求Hydrolysispeptide unitprecipitationdenaturationsalting insalting out教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每

6、次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第4页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第 4 周，第3次课2005 年 9 月 19-23 日备注章节名称酪蛋白的制备及含量测定授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数5教学目的及要求1学习从牛乳中制备酪蛋白的原理及方法。2掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理及方法。教学主要内容时间分配1酪蛋白的制备（1）调节 pH，pI 沉淀酪蛋白，离心。（2）沉淀加水洗去水溶性杂质（盐、糖、氨基酸、少量蛋白质、多肽、核苷酸等），离心。（3）沉淀加醇除脂并部分脱水。离心。（4）沉淀加乙醚脱水除脂。离心。2蛋白质含量测定双缩脲法（1）正确

7、使用移液管并精确加量。（2）正确使用 72 型分光光度计。第 5 页教学重点与难点1 酪蛋白的制备（1）醋酸与牛乳分别预热后，再滴加混匀。（2）离心分组、平衡、开机、关机。（3）乙醇洗涤时，一定要先搅散沉淀。（4）加牛乳、水、醇、醚时，只需以离心管刻度为准。（5）离心后的上清夜可直接倾倒。（6）醚洗涤沉淀后，搅散沉淀并放置数分钟，尽量让醚挥发。（7）加 NaOH 溶解沉淀后，再准确加水稀释。2 蛋白质含量测定双缩脲法（1）防止碱性条件下 CuOH 沉淀生成。（2）20 分钟后，4 小时内，显色稳定。备注启发提问1 调 pH4.8 的作用？2 沉淀加水洗涤的作用？3 加 95%乙醇前，为何要先搅

8、散沉淀？95%乙醇的作用？4 乙醚的作用？5 0.1N NaOH 的作用？6 提取时，加水、醇、醚是否需要精确？为什么？7 双缩脲法测定蛋白质含量，为什么需碱性条件？8 碱性条件下，可能发生何种反应干扰测定，如何防止？9 如显色溶液浑浊，有哪些可能的原因？外语要求教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第6页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第5周，第 4 次课2005 年 9 月 26-30 日备注章节名称胎盘

9、球蛋白的含量测定授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数4教学目的及要求掌握用纳氏试剂定氮法测定总氮和非蛋白氮含量的原理和方法教学主要内容时间分配1非蛋白氮滤液制备胎盘球蛋白加入硫酸和钨酸钠使蛋白质沉淀除去，而得到非蛋白氮滤液2氮量测定胎盘球蛋白及非蛋白氮滤液均加入亚硒酸消化液加热消化成硫酸胺，再加入钠氏试剂生成黄色化合物可比色测定其含氮量而计算出蛋白质含量第7页教学重点与难点氮量测定：胎盘球蛋白及非蛋白氮滤液均加入亚硒酸消化液加热消化成硫酸胺，再加入钠氏试剂生成黄色化合物可比色测定其含氮量而计算出蛋白质含量。（1）正确掌握消化终点。未消化完全，加入钠氏试剂可产生浑浊；消化时间过长，酸

10、逸散过多显色 pH 高，也可产生浑浊。（2）消化后，冷至室温再加蒸馏水，否则可产生浑浊。（3）加钠氏试剂前后未摇匀，生成产物浓度过高，也可产生浑浊。（4）30 分钟内完成，久置可产生浑浊。（5）正确估计样品量，稍多可产生浑浊。（6）保证钠氏试剂酸碱度，否则可产生浑浊。备注启发提问1实验中，加 H2SO4和 NaWO4的作用？2加 H2SO4加热的目的？3消化液中亚硒酸的作用？410%酒师酸钾钠的作用？5除测定蛋白质含量外，钠氏试剂还可应用于哪些方面？外语要求教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教

11、案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第 8 页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第 7周，第5 次课2005 年 10 月 10-14 日备注章节名称酶化学授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数4教学目的及要求1验证酶的作用、专一性及高效率。2通过温度、pH、激动剂和抑制剂对酶活性的影响，掌握影响酶活性的因素。教学主要内容时间分配1唾液淀粉酶的作用及专一性。2过氧化氢酶的高效率及分布。3温度对唾液淀粉酶活性的影响。4pH 对唾液淀粉酶活性的影响。5激动剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。第9页教学重点与难点1液淀粉酶的作用及专一性。2过

12、氧化氢酶的高效率及分布。3温度对唾液淀粉酶活性的影响。4pH 对唾液淀粉酶活性的影响。5激动剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响备注启发提问1 如何检测唾液淀粉酶的专一性？2 在何种条件下，才能确定过氧化氢酶在各组织的含量多少？3 底物和酶是否一定需要在 37保温 10 分钟？4 低温和高温对酶活性影响有何不同？5 pH5.0 和 10.0 条件下，水解产物碘反应颜色是否相同？6 pH10.0 条件下，加入碘液后兰色消失，可能发生什么反应，该怎么处理？7 激动剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响实验中加入 NaSO4说明了什么？该有怎样的颜色反应？外语要求教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学

13、独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第10页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第 8 周，第6次课2005 年 10 月 17-21 日备注章节名称底物浓度对酶活性的影响碱性磷酸酶米氏常数的测定授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数4教学目的及要求1掌握碱性磷酸酶米氏常数的测定原理和方法。2掌握底物底物浓度对酶促反应速度的影响。教学主要内容时间分配1酶浓度恒定的条件下，底物浓度的增加所导致的单位时间内产物的增加。2使酶催化产物生成有色物比色测定

14、其含量，以确定反应速度。3以S对 V 作图，观察该图的形状，求近似 Km并说明S对 V 的影响。4以S对 V 的倒数作图，求准确 Km。第11页教学重点与难点1酶浓度恒定的条件下，底物浓度的增加所导致的单位时间内产物的增加。2使酶催化产物生成有色物比色测定其含量，以确定反应速度。3以S对V作图，观察该图的形状，求近似Km并说明S对 V 的影响。4以S对 V 的倒数作图，求准确 Km。备注启发提问1加入底物液后保温 5 分钟是否需精确控制？为什么？2酶液是否需与底物液同时保温？为什么？3加入酶液后，必须在 37精确保温 15 分钟，为什么？怎样精确控制？4保温后，加入的碱性溶液有何作用？外语要求

15、教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第12页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第 9 周，第 7 次课2005年 10 月24-28 日备注章节名称醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数4教学目的及要求掌握醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的原理和方法。教学主要内容时间分配1醋酸纤维薄膜的浸泡2点样3电泳4染色5洗脱6根据 pI 和分子量鉴别各成分第13页教学重点与难点1点

16、样（1）吸取浸泡后的醋酸纤维薄膜上多余的缓冲液，要求不能出现大片白班。（2）点样量非常关键，只能为玻片截面积大小，太少，不能显现斑点，太多，引起严重的区带拖尾和扩散。2电泳（1）注意薄膜无光泽面向下，防止水分蒸发，影响电泳。（2）点样端防止与纱布接触，防止样品损失。（3）点样端接负极，调节电压、电流。备注启发提问1酸纤维薄膜光泽面和无光泽面有和区别及作用。2为什么浸泡和电泳都要求无光泽面向下？3点样时虚架空薄膜且样品点在无光泽面，为什么？4电泳时点样端为何接负极？如果接反，可能出现什么情况？5可否点样端接正极，需改变何种条件？6样品蛋白质在 pI 相同的情况下，电泳迁移率的差别原因何在？外语要

17、求教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第14页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第 10周，第 8 次课2005 年 10 月 31 日备注章节名称聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数8教学目的及要求掌握 PAGE 分离血清蛋白的原理和方法。教学主要内容时间分配1聚丙烯酰胺凝胶的制备2加样3电泳4剥胶5染色6漂洗第15页教学重点与难点1聚丙烯酰胺凝胶的制备（1）丙烯

18、酰胺和甲撑双丙烯酰胺浓度合适（2）TEMED 及过硫酸胺加量合适，且过硫酸胺必须新鲜配制（3）加胶时防止胶液泄漏及排除气泡（4）小心于胶面封水，防止震动胶面2加样加样后封上极液，防止样品与上极液混合3电泳点样端接负极；防止上极液泄漏4剥胶注水润滑剥胶，防止凝胶断裂备注启发提问1加入胶液后，胶柱放入下电泳槽中时，要求排除气泡，为什么？2加入胶液后，为什么要小心封水？3封水的目的？4点样后，又需小心加入上极液，为什么？5电泳时点样端为何接负极？如果接反，可能出现什么情况？6可否点样端接正极，需改变何种条件？7为何聚丙烯酰胺凝胶电泳比醋酸纤维薄膜电泳分辨率高？8聚丙烯酰胺凝胶电泳还可应用于哪些方面？

19、9聚丙烯酰胺凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶层析分离混合物的原理有何不同？外语要求教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第16页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第 11 周，第9次课2005 年 11 月 7-11 日备注章节名称1血糖测定2激素对血糖含量的影响授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数4教学目的及要求1掌握激素对血糖含量的影响。2掌握血糖含量测定的原理和方法。教学主要内容时间分配1动物准备2取

20、血3注射激素后取血4无蛋白血滤液的制备5血糖含量测定第17页教学重点与难点1取血（1）动物耳缘静脉处去毛、消毒、扩张血管及正确获得足量的血液（2）吸血管的使用，洗涤2注射激素后取血3无蛋白血滤液的制备认清移液管刻度，放置足够的时间，获得澄清滤液4血糖含量测定（1）沸水浴取出试管后切忌摇动（3）加磷钼酸后充分震摇备注启发提问1制备无蛋白血滤液时，为什么要先加入蒸馏水后再加血液？2注射激素前、后血滤液为何要平行操作？3测定血糖时，为何要事先除去蛋白质？4从沸水浴取出试管后，为什么切忌摇动？5加磷钼酸后为何要充分震摇？产生了何种物质？外语要求教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作

21、能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第18页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第12周，第 10 次课2005年 11 月14-18 日备注章节名称血清 GPT 活性测定授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数4教学目的及要求掌握血清 GPT 活性测定的原理与方法。教学主要内容时间分配1丙酮酸标准曲线制作2谷丙转氨酶活性测定第 19页教学重点与难点谷丙转氨酶活性测定备注启发提问1 什么选择丙氨酸、-酮戊二酸做底物？2 底物是否过量？为什么？3 三次保温意义？

22、何次需精确保温？怎样控制精确？4 本次实验是如何保证酶活性测定的必要条件？5 血清为什么在保温 60 分钟的前、后加入？6 2，4-二硝基苯肼有何作用？7 可否不用蒸馏水，而用对照及标准的第 1 管调节零点？二者之间有何区别？8 可否不做标准曲线？其方法如何？二者之间有何区别？外语要求transaminationtransaminaseglutamination pyruvic transaminase GPTalanine transaminase ALT教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教

23、案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第20页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周 次第13周，第 11 次课2005年 11 月21-25 日备注章 节名 称浓盐法制备 DNA授 课方 式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数讲 4教学目的及要求学习和掌握浓盐法制备 DNA 的原理和方法。教学主要内容时间分配猪肝40g冰冷的0.05M柠檬酸钠 0.14MNaCl80ml组织捣碎器捣碎，离心沉淀420ml6%NaCl,0.5%SDS低温提取2小时，离心上层粘稠液氯仿-异戊醇震荡10分钟，离心上层粘稠液重复上操作等量95%乙醇DNA纤维6%NaCl溶

24、解等量95%乙醇DNA纤维丙酮乙醚洗DNA第 21 页教学重点与难点1组织捣碎器捣碎时转速高于 10000 转，注意安全。2离心时一定要平衡，每组要有协调观念，一起离心。3冰浴搅拌提取，注意搅拌器转速不能太快，观察冰的溶化情况，防止损坏烧杯，导致实验半途而废。4氯仿-异戊醇震荡反复两次，上下用力震荡。5最好是上层液往乙醇缓慢倾倒，边倾倒边搅拌。6丙酮、乙醚分别洗涤，且一定要将沉淀撕拉疏松。备注启发提问1冰冷的 0.05M 柠檬酸钠的作用？20.14NaCl 的作用？36%NaCl 的作用？40.5%SDS 的作用？5搅拌提取时，为何要在冰浴中进行？6搅拌提取时，如何观察 DNA 是否溶出？7氯

25、仿-异戊醇的作用？8加等量 95%乙醇的作用？9丙酮、乙醚的作用？外语要求教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第22页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第 14 周，第12次课2005 年 12 月 2 日备注章节名称转氨基作用授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数4教学目的及要求1验证转氨基作用的存在。2熟悉纸层析分离氨基酸的原理和方法。教学主要内容时间分配1肝匀浆制备2制备样品对照煮沸肝匀浆Al

26、a-酮戊二酸37、pH7.4测定肝匀浆Ala-酮戊二酸保温 1 小时离心上清液3层析（1）取层析滤纸一张，点样。（2）取培养皿加入展开剂：水饱和酚显色剂：茚三酮（3）于培养皿中放入已点样滤纸，层析至展开剂离滤纸上沿 2cm，取出滤纸。（4）烘干，显色。第23页教学重点与难点层析:（1）点样点样斑点大小是纸层析分离氨基酸的关键操作，要求点样斑点直径不超过 5cm,过大，样品不断的在两相间分配的过程中扩散，难于分开。（2）点样滤纸缝合过程中，防止缝合处滤纸重叠，展开剂上行时形成边沿效应，而影响分辨率。备注启发提问1测定、对照中各有哪些物质？为什么？2纸层析时，为何只能检测出氨基酸？3在 pH5.0

27、 时用阳离子交换树脂分离测定管中的氨基酸，请写写出交换反应式。4如何洗脱，写出洗脱反应式。5怎样判别并收集含氨基酸的溶液？外语要求教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第24页四四 川川 大大 学学 教教 案案【首页首页】课程名称药学生物化学实验授课专业药学班级2003级课程编号50501920课程类型必修课校级公共课（）；基础或专业基础课（）；专业课（）选修课限选课（）；任选课（）授课方式课堂讲授（）；实践课（）考核方式考试（）

28、；考查（）课程教学总学时数51学 分 数2学时分配课堂讲授学时；实践课51学时教材名称现代药学实验教程作 者吴勇成丽出版社及出版时间四川大学出版社2005.3指定参考书授课教师李晓红职 称讲师单 位生物制药教研室授课时间2005.8 2005.12注：表中（）选项请打“”四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第2周，第 1 次课2005 年 9 月 5-9 日备注章节名称酚标准曲线制作授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数3教学目的及要求4熟悉标准曲线的制作。5掌握酚显色原理。教学主要内容时间分配6了解实验室规则及要求。7明确实验记录、实验报告的要求。8熟悉移液管的正

29、确使用及精确加量的规范操作。9熟悉 72 型分光光度计的正确使用。10 正确绘制标准曲线。第1页教学重点与难点4悉移液管的正确使用及精确加量的规范操作。5正确绘制标准曲线。6实验注意事项。备注启发提问5 加入酚及水后，37水浴保温 5 分钟的意义？6 碱性溶液的作用？7 为什么要在 10 分钟之后、30 分钟之内比色？8 此次实验意义何在？为什么要记录显色时间及比色计编号？外语要求教学手段课堂提问；思考题启示；密切观察并规范操作。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第2页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第3周，第2次课2005

30、年 9 月 12-16 日备注章节名称蛋白质化学授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数4教学目的及要求3掌握蛋白质的肽键结构，了解用双缩脲反应检查蛋白质水解程度的意义。4了解颜色反应原理及意义。6掌握沉淀反应原理。加深对蛋白质胶体稳定因素的认识。教学主要内容时间分配（1）蛋白质的的水解；酸水解的优缺点及基本操作。（2）肽键的重要作用及水解的涵义。（3）双缩脲反应原理及应用意义。（4）颜色反应原理及应用意义。（5）沉淀反应：盐析沉淀、分段盐析、重金属沉淀、有机酸植物碱试剂沉淀原理及实际用途。（6）沉淀、变性、凝固三者之间的关系。第3页教学重点与难点（1）蛋白质的的水解；酸水解基本操作。

31、（2）肽键的重要作用及水解的涵义。（3）沉淀反应：盐析沉淀、分段盐析、重金属沉淀、有机酸植物碱试剂沉淀原理及实际用途。（4）沉淀、变性、凝固三者之间的关系。备注启发提问10区别蛋白质水解和变性的异同。11双缩脲反应阴性，水解液中是否全部为氨基酸？为什么？12可否用双缩脲反应判断蛋白质的存在？为什么？13颜色反应的显现说明了什么？应用于哪些方面？14颜色反应中，对照管的颜色比实验管深，为什么？15用哪些方法可使蛋白质沉淀？原理如何？16变性沉淀、不变性沉淀分别应用于哪些方面？17分段盐析实验，为何加蛋白质氯化钠溶液？18重金属、有机酸沉淀蛋白质时。均未调节 pH，两类试剂沉淀的是否同类蛋白质？是

32、哪类蛋白质？10区别变性、沉淀、凝固之间的异同。外语要求Hydrolysispeptide unitprecipitationdenaturationsalting insalting out教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第4页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第 4 周，第3次课2005 年 9 月 19-23 日备注章节名称酪蛋白的制备及含量测定授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数5教学

33、目的及要求3学习从牛乳中制备酪蛋白的原理及方法。4掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理及方法。教学主要内容时间分配1酪蛋白的制备（3）调节 pH，pI 沉淀酪蛋白，离心。（4）沉淀加水洗去水溶性杂质（盐、糖、氨基酸、少量蛋白质、多肽、核苷酸等），离心。（5）沉淀加醇除脂并部分脱水。离心。（6）沉淀加乙醚脱水除脂。离心。3蛋白质含量测定双缩脲法（1）正确使用移液管并精确加量。（2）正确使用 72 型分光光度计。第 5 页教学重点与难点3 酪蛋白的制备（1）醋酸与牛乳分别预热后，再滴加混匀。（2）离心分组、平衡、开机、关机。（3）乙醇洗涤时，一定要先搅散沉淀。（4）加牛乳、水、醇、醚时，只需以离心管刻

34、度为准。（5）离心后的上清夜可直接倾倒。（6）醚洗涤沉淀后，搅散沉淀并放置数分钟，尽量让醚挥发。（7）加 NaOH 溶解沉淀后，再准确加水稀释。4 蛋白质含量测定双缩脲法（1）防止碱性条件下 CuOH 沉淀生成。（2）20 分钟后，4 小时内，显色稳定。备注启发提问10调 pH4.8 的作用？11沉淀加水洗涤的作用？12加 95%乙醇前，为何要先搅散沉淀？95%乙醇的作用？13乙醚的作用？140.1N NaOH 的作用？15提取时，加水、醇、醚是否需要精确？为什么？16双缩脲法测定蛋白质含量，为什么需碱性条件？17碱性条件下，可能发生何种反应干扰测定，如何防止？18如显色溶液浑浊，有哪些可能的

35、原因？外语要求教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第6页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第5周，第 4 次课2005 年 9 月 26-30 日备注章节名称胎盘球蛋白的含量测定授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数4教学目的及要求掌握用纳氏试剂定氮法测定总氮和非蛋白氮含量的原理和方法教学主要内容时间分配3非蛋白氮滤液制备胎盘球蛋白加入硫酸和钨酸钠使蛋白质沉淀除去，而得到非蛋白氮滤液4氮量测定胎盘球

36、蛋白及非蛋白氮滤液均加入亚硒酸消化液加热消化成硫酸胺，再加入钠氏试剂生成黄色化合物可比色测定其含氮量而计算出蛋白质含量第7页教学重点与难点氮量测定：胎盘球蛋白及非蛋白氮滤液均加入亚硒酸消化液加热消化成硫酸胺，再加入钠氏试剂生成黄色化合物可比色测定其含氮量而计算出蛋白质含量。（1）正确掌握消化终点。未消化完全，加入钠氏试剂可产生浑浊；消化时间过长，酸逸散过多显色 pH 高，也可产生浑浊。（2）消化后，冷至室温再加蒸馏水，否则可产生浑浊。（3）加钠氏试剂前后未摇匀，生成产物浓度过高，也可产生浑浊。（4）30 分钟内完成，久置可产生浑浊。（5）正确估计样品量，稍多可产生浑浊。（6）保证钠氏试剂酸碱度

37、，否则可产生浑浊。备注启发提问5实验中，加 H2SO4和 NaWO4的作用？6加 H2SO4加热的目的？7消化液中亚硒酸的作用？810%酒师酸钾钠的作用？5除测定蛋白质含量外，钠氏试剂还可应用于哪些方面？外语要求教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第 8 页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第 7周，第 5 次课2005 年 10 月 10-14 日备注章节名称酶化学授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教

38、学时数4教学目的及要求3验证酶的作用、专一性及高效率。4通过温度、pH、激动剂和抑制剂对酶活性的影响，掌握影响酶活性的因素。教学主要内容时间分配6唾液淀粉酶的作用及专一性。7过氧化氢酶的高效率及分布。8温度对唾液淀粉酶活性的影响。9pH 对唾液淀粉酶活性的影响。10激动剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。第9页教学重点与难点6液淀粉酶的作用及专一性。7过氧化氢酶的高效率及分布。8温度对唾液淀粉酶活性的影响。9pH 对唾液淀粉酶活性的影响。10激动剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响备注启发提问7 如何检测唾液淀粉酶的专一性？8 在何种条件下，才能确定过氧化氢酶在各组织的含量多少？9 底物和酶是否一定

39、需要在 37保温 10 分钟？10低温和高温对酶活性影响有何不同？11pH5.0 和 10.0 条件下，水解产物碘反应颜色是否相同？12pH10.0 条件下，加入碘液后兰色消失，可能发生什么反应，该怎么处理？7 激动剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响实验中加入 NaSO4说明了什么？该有怎样的颜色反应？外语要求教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第10页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第 8 周，第6次课20

40、05 年 10月 17-21 日备注章节名称底物浓度对酶活性的影响碱性磷酸酶米氏常数的测定授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数4教学目的及要求3掌握碱性磷酸酶米氏常数的测定原理和方法。4掌握底物底物浓度对酶促反应速度的影响。教学主要内容时间分配5酶浓度恒定的条件下，底物浓度的增加所导致的单位时间内产物的增加。6使酶催化产物生成有色物比色测定其含量，以确定反应速度。7以S对 V 作图，观察该图的形状，求近似 Km并说明S对 V 的影响。8以S对 V 的倒数作图，求准确 Km。第11页教学重点与难点5酶浓度恒定的条件下，底物浓度的增加所导致的单位时间内产物的增加。6使酶催化产物生成有色

41、物比色测定其含量，以确定反应速度。7以S对V作图，观察该图的形状，求近似Km并说明S对 V 的影响。8以S对 V 的倒数作图，求准确 Km。备注启发提问5加入底物液后保温 5 分钟是否需精确控制？为什么？6酶液是否需与底物液同时保温？为什么？7加入酶液后，必须在 37精确保温 15 分钟，为什么？怎样精确控制？8保温后，加入的碱性溶液有何作用？外语要求教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第12页四四 川川 大大 学学 教教 案案

42、【药学】【药学】周次第 9 周，第 7次课2005年 10 月24-28 日备注章节名称醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数4教学目的及要求掌握醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的原理和方法。教学主要内容时间分配7醋酸纤维薄膜的浸泡8点样9电泳10染色11洗脱12根据 pI 和分子量鉴别各成分第13页教学重点与难点3点样（1）吸取浸泡后的醋酸纤维薄膜上多余的缓冲液，要求不能出现大片白班。（2）点样量非常关键，只能为玻片截面积大小，太少，不能显现斑点，太多，引起严重的区带拖尾和扩散。4电泳（1）注意薄膜无光泽面向下，防止水分蒸发，影响电泳。（2）点样端防止与

43、纱布接触，防止样品损失。（3）点样端接负极，调节电压、电流。备注启发提问7酸纤维薄膜光泽面和无光泽面有和区别及作用。8为什么浸泡和电泳都要求无光泽面向下？9点样时虚架空薄膜且样品点在无光泽面，为什么？10电泳时点样端为何接负极？如果接反，可能出现什么情况？11可否点样端接正极，需改变何种条件？12样品蛋白质在 pI 相同的情况下，电泳迁移率的差别原因何在？外语要求教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第14页四四 川川 大大 学学

44、 教教 案案【药学】【药学】周次第 10 周，第8 次课2005 年 10 月 31 日备注章节名称聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数8教学目的及要求掌握 PAGE 分离血清蛋白的原理和方法。教学主要内容时间分配7聚丙烯酰胺凝胶的制备8加样9电泳10剥胶11染色12漂洗第15页教学重点与难点2聚丙烯酰胺凝胶的制备（1）丙烯酰胺和甲撑双丙烯酰胺浓度合适（2）TEMED 及过硫酸胺加量合适，且过硫酸胺必须新鲜配制（3）加胶时防止胶液泄漏及排除气泡（4）小心于胶面封水，防止震动胶面2加样加样后封上极液，防止样品与上极液混合3电泳点样端接负极；防止上极液泄

45、漏4剥胶注水润滑剥胶，防止凝胶断裂备注启发提问9加入胶液后，胶柱放入下电泳槽中时，要求排除气泡，为什么？10加入胶液后，为什么要小心封水？11封水的目的？12点样后，又需小心加入上极液，为什么？13电泳时点样端为何接负极？如果接反，可能出现什么情况？14可否点样端接正极，需改变何种条件？15为何聚丙烯酰胺凝胶电泳比醋酸纤维薄膜电泳分辨率高？16聚丙烯酰胺凝胶电泳还可应用于哪些方面？9聚丙烯酰胺凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶层析分离混合物的原理有何不同？外语要求教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按

46、授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第16页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第 11周，第9次课2005 年 11 月 7-11 日备注章节名称3血糖测定4激素对血糖含量的影响授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数4教学目的及要求3掌握激素对血糖含量的影响。4掌握血糖含量测定的原理和方法。教学主要内容时间分配6动物准备7取血8注射激素后取血9无蛋白血滤液的制备10血糖含量测定第17页教学重点与难点5取血（1）动物耳缘静脉处去毛、消毒、扩张血管及正确获得足量的血液（2）吸血管的使用，洗涤6注射激素后取血7无蛋白血滤液的制备认清移液管刻度，

47、放置足够的时间，获得澄清滤液8血糖含量测定（1）沸水浴取出试管后切忌摇动（3）加磷钼酸后充分震摇备注启发提问6制备无蛋白血滤液时，为什么要先加入蒸馏水后再加血液？7注射激素前、后血滤液为何要平行操作？8测定血糖时，为何要事先除去蛋白质？9从沸水浴取出试管后，为什么切忌摇动？10加磷钼酸后为何要充分震摇？产生了何种物质？外语要求教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第18页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周次第12

48、周，第 10次课2005 年 11 月 14-18 日备注章节名称血清 GPT 活性测定授课方式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数4教学目的及要求掌握血清 GPT 活性测定的原理与方法。教学主要内容时间分配1丙酮酸标准曲线制作2谷丙转氨酶活性测定第 19页教学重点与难点谷丙转氨酶活性测定备注启发提问9 什么选择丙氨酸、-酮戊二酸做底物？10底物是否过量？为什么？11三次保温意义？何次需精确保温？怎样控制精确？12本次实验是如何保证酶活性测定的必要条件？13血清为什么在保温 60 分钟的前、后加入？142，4-二硝基苯肼有何作用？15可否不用蒸馏水，而用对照及标准的第 1 管调节零点？二者

49、之间有何区别？16可否不做标准曲线？其方法如何？二者之间有何区别？外语要求transaminationtransaminaseglutamination pyruvic transaminase GPTalanine transaminase ALT教学手段1讲评上次实验中存在的问题；2观察同学独立动手操作能力，纠正违规操作；3提出思考题，促进同学独立动手操作时动脑思考。参考资料注：教案按授课次数填写，每次授课均应填写一份。重复班授课可不另填写教案。第20页四四 川川 大大 学学 教教 案案【药学】【药学】周 次第13周，第11次课2005年 11 月21-25 日备注章 节名 称浓盐法制备

50、DNA授 课方 式理论课（）；实践课（）；实习（）教学时数讲 4教学目的及要求学习和掌握浓盐法制备 DNA 的原理和方法。教学主要内容时间分配猪肝40g冰冷的0.05M柠檬酸钠 0.14MNaCl80ml组织捣碎器捣碎，离心沉淀420ml6%NaCl,0.5%SDS低温提取2小时，离心上层粘稠液氯仿-异戊醇震荡10分钟，离心上层粘稠液重复上操作等量95%乙醇DNA纤维6%NaCl溶解等量95%乙醇DNA纤维丙酮乙醚洗DNA第 21 页教学重点与难点7组织捣碎器捣碎时转速高于 10000 转，注意安全。8离心时一定要平衡，每组要有协调观念，一起离心。9冰浴搅拌提取，注意搅拌器转速不能太快，观察冰