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1、病原学诊断与防治 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望OutlineLaboratory diagnosis for bacterial infectionslMorphological-microscopic lMolecularlSerologicalLaboratory diagnosis for viral infectionslMorphological-electron microscopic lIsolation lMolecular:nu
2、cleic acids and proteins lSerologicalLaboratory diagnosis for fungal infectionslMorphological-microscopiclIsolation11/16/2022211/16/20223AssaysMorphological assayslLight or electron microscopiesIsolation and differentiationSerological assayslAntigen-antibody assays Molecular assayslMicroorganisms ge
3、ne(DNA&RNA)11/16/20224Principles for Specimen CollectionSterile manipulation,avoid contaminationObtain a specimen lfrom the infected sitelaccording to the disease phaselbefore administrating antibioticsDouble sera for antibody detections,acute and recovery phase eachlPositive if the titer of the lat
4、er specimen is above 4X to the first specimenTransport,and store correctlylas soon as possiblelStore at-4oC for most bacterial specimens,but keep warm for Neisseria meningitidis and Neisseria gonorrhoeaelStore at-4oC -70oC for viral specimens11/16/20225Laboratory Diagnosis for Bacterial InfectionsMo
5、rphological Protein and Nucleic acidsAntibody11/16/20226标本的采集和送检六原则标本的采集和送检六原则l无菌取材无菌取材,避免杂菌污染避免杂菌污染l不同期不同标本不同期不同标本l用抗生素以前用抗生素以前l采集病变明显部位采集病变明显部位l运送注意保存运送注意保存l标本必须新鲜标本必须新鲜11/16/20227病原菌的检查程序病原菌的检查程序药物敏感试验药物敏感试验药物敏感试验药物敏感试验直接涂片镜检直接涂片镜检直接涂片镜检直接涂片镜检分离培养分离培养分离培养分离培养生化试验生化试验生化试验生化试验血清学试验血清学试验血清学试验血清学试验动物
6、试验动物试验动物试验动物试验明明明明确确确确诊诊诊诊断断断断初步诊断初步诊断初步诊断初步诊断分子生物学技术分子生物学技术分子生物学技术分子生物学技术其他检测技术其他检测技术其他检测技术其他检测技术11/16/20228Bacteriological DiagnosisIdentifying the organismMorphological Isolation&cultureBiochemical reaction Serological assaysPathogenesis&antibiotics susceptibilityAnimal experimentVirulence testan
7、tibiotics susceptibility 11/16/20229MorphologicalNon-stained microscopic observationlDark-field microscopylObserving the movement of live bacteriaStained microscopic observationslGram stainlAcid-fast stainlFluorescence stain 11/16/20221011/16/20221111/16/20221211/16/20221311/16/20221411/16/20221511/
8、16/202216Isolation&Culture:ColonySizeShapeColorSurface featureslSmooth-RoughTransparencyHemolysis11/16/20221711/16/20221811/16/202219分离培养分离培养isolation and cultivation 分离培养是微生分离培养是微生物学诊断的金标准，物学诊断的金标准，是最可靠的传统诊断是最可靠的传统诊断技术。技术。（图为普通培养箱）（图为普通培养箱）11/16/202220 厌氧罐厌氧罐 厌氧袋厌氧袋11/16/202221Biochemical Reactions
9、 Sugar Fermentation H2S Test Citrate utilization11/16/202222Serological AssaysDetection antibody in the patients serumA current infection should belIgM positivelA 4-fold or greater rise on antibody titer between the acute serum sample and the convalescent serum sampleMajor drawbackslA single IgG ant
10、ibody titer is difficult to interpret because it is unclear whether it represents a current or a previous infectionlthe convalescent sample is usually taken 10-14 days after the acute sample.By this time,the patient has often recovered and the diagnosis becomes a retrospective oneSome exceptionslIn
11、certain diseases,a single titer of sufficient magnitude can be used as presumptive evidence of a current infection11/16/202223基本原则基本原则用已知抗体检测未知抗原；用已知抗体检测未知抗原；用已知抗原检测未知抗体。用已知抗原检测未知抗体。最简易的方法有玻片凝集等试最简易的方法有玻片凝集等试验。验。常用的方法有：凝集试常用的方法有：凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、验、沉淀试验、补体结合试验、ELISA、免疫荧光等。、免疫荧光等。免疫学试验免疫学试验11/16/20222
12、4Animal experimentlAnimalsMouseGuinea Pig Rabbit Dog MonkeylInoculation routesIntradermal SubcutaneousIntraperitoneal IntravenousIntracranial/intracerebral IntraspinalIntranasal Lavage11/16/202225Virulence TestMedian lethal dose,LD50Median infective dose,ID50Elek PlatelDiphtherotoxin Corynebacterium
13、 diphtheriaelEnterotoxinenterotoxigenic E.coli11/16/202226Antibiotic Susceptibility TestMethod11/16/202227MIC&MBCMinimum Inhibitory Concentration，MICMinimum Bactericidal Concentration，MBCBactericidal drugs usually have an MBC equal or very similar to the MICBacteriostatic drugs usually have an MBC s
14、ignificantly higher than the MIC 11/16/20222811/16/202229Bacterial Proteins,DNA&RNAAntigens(Proteins)lKnown antibodieslAgglutination,coagulation,precipitation,ELISA,Immunofluorescence,radioimmunoassayDNA&RNAlPCRlNucleic acid hybridization11/16/202230Detection of Bacterial AntigensPrecipitation testC
15、oagglutination testImmunoflorecence,IFMcAb technique11/16/20223111/16/20223211/16/202233Bacterial DNA&RNA PCRDNA probe&hybridizationlDNA hybridization(southern blot)Plasmid fingerprint analysislRestrict multimorphologic analysis11/16/20223411/16/20223511/16/202236PCR11/16/202237分子生物学技术分子生物学技术 molecu
16、lar biological techniques 核酸杂交核酸杂交 nucleotide hybridization 原位杂交原位杂交 in situ hybridization 斑点杂交斑点杂交 dot blot Southern blot Northern blot PCR 技术：多聚酶链反应技术：多聚酶链反应 (polymerase chain reaction，PCR)11/16/202238 PCR 是一种无细胞是一种无细胞的分子克隆的分子克隆 技术，能技术，能在体外将一个基因或在体外将一个基因或 一段一段DNA 序列经过多序列经过多次循次循 环的环的DNA复制，复制，在数小时内扩
17、在数小时内扩 增上百增上百万倍。既便于基因诊万倍。既便于基因诊断，又利于断，又利于 研究。研究。11/16/20223911/16/202240Gene Chip/microarray11/16/202241Diagnosis Strategy for Bacterial Infection11/16/202242第第25章章 病毒感染的诊断病毒感染的诊断 P238Laboratory Diagnosis for Viral Infection Morphological Isolation&Culture Protein&Nucleic acids Serological11/16/2022
18、43 病毒感染的检测病毒感染的检测一、标本的采集与运送一、标本的采集与运送 急性期标本；急性期标本；根据感染性质取不同的标本；根据感染性质取不同的标本；标本置于转运液中；标本置于转运液中；冷藏快运。冷藏快运。11/16/202244Morphological Electron microscopy,EM lImmunoelectron microscopy,IEMLight MicroscopylInclusion bodyNegri body11/16/20224511/16/202246二、病毒分离培养二、病毒分离培养 病毒分离的一般程序是病毒分离的一般程序是 接种易感动物接种易感动物 出
19、现症状出现症状 血清学血清学检测标本检测标本 杀灭杂菌杀灭杂菌 鸡胚鸡胚 病变或死亡病变或死亡 鉴定鉴定 细胞培养细胞培养 细胞病变细胞病变11/16/202247Isolation and CultureAnimal inoculationChicken egg culture:914 daysTissue culturelOrgan culturelTissue culturelCell culture11/16/202248Cell culture11/16/20224911/16/202250Type of Cultured CellsPrimary cell culturelPass
20、age 2-3 generationsDiploid cell culturel2-fold chromosomes,Passage 50100 generations,safe,can be used for vaccine manufactureContinuous cell line culture lMutant diploid cells,mostly tumor cells,easy to passage and maintainlNot sensitive as diploid cells,may have endogenous viruses,can not be used f
21、or vaccine manufacture 11/16/202251Indications of Viral PropagationCytopathic effect,CPE HemadsorptionHemagglutinationViral interferenceNeutralization test,NT11/16/20225211/16/20225311/16/202254（1）原代细胞培养：）原代细胞培养：动物或人组织直接用蛋白酶消化所得的细胞动物或人组织直接用蛋白酶消化所得的细胞经体外培养后可贴壁或悬浮生长经体外培养后可贴壁或悬浮生长。（2）二倍体细胞株：）二倍体细胞株：在体外
22、连续培养在体外连续培养5060代仍保持其二倍染色代仍保持其二倍染色体数目的单型细胞。体数目的单型细胞。为生产人用疫苗的首选细胞株。为生产人用疫苗的首选细胞株。（3）传代细胞系）传代细胞系 能在体外连续传代、来自癌细胞或发生自发转能在体外连续传代、来自癌细胞或发生自发转化、突变的原代细胞或二倍体细胞株。化、突变的原代细胞或二倍体细胞株。11/16/202255 临床病毒实验室常用的细胞培养临床病毒实验室常用的细胞培养 细胞培养细胞培养常用的名称常用的名称组织来源组织来源 传代数传代数原代原代 HEKPMKRKGPE/CE 人胚肾人胚肾恒河猴肾恒河猴肾兔肾兔肾豚鼠胚豚鼠胚 或鸡胚或鸡胚12 二倍体
23、二倍体 HEL(MRC-5)HDF 人胚肺人胚肺人新生儿包皮人新生儿包皮 2050 异倍体异倍体 Hep-2HeLaA549Vero 人喉癌人喉癌人子宫颈癌人子宫颈癌人肺癌人肺癌非洲绿猴肾非洲绿猴肾 无限无限 11/16/202256识别病毒增殖的方法识别病毒增殖的方法（1）细胞病变效应（细胞病变效应（CPE）：溶细胞型病毒：溶细胞型病毒感染细胞后，可出现细胞团缩、裂解或细胞肿感染细胞后，可出现细胞团缩、裂解或细胞肿大、数个细胞融合成多核巨细胞或细胞聚集成大、数个细胞融合成多核巨细胞或细胞聚集成葡萄串状、脱落或死亡等。葡萄串状、脱落或死亡等。11/16/202257epithelial cel
24、ls-adenovirusuninfectedearly infectionlate infection11/16/202258Negri Body11/16/202259（2）红细胞吸附：流感病毒和某些副粘病毒感）红细胞吸附：流感病毒和某些副粘病毒感染细胞后染细胞后2448小时，细胞膜上出现病毒的血凝小时，细胞膜上出现病毒的血凝素，能吸附豚鼠、鸡等动物及人的红细胞，发生素，能吸附豚鼠、鸡等动物及人的红细胞，发生红细胞吸附现象。红细胞吸附现象。（3）干扰现象）干扰现象11/16/202260 病毒量测定病毒量测定（1）测定病毒数量可用空斑形成单位）测定病毒数量可用空斑形成单位（PFU）表示。一
25、个空斑是标本中一个病毒）表示。一个空斑是标本中一个病毒大量复制所致，有感染性的病毒经适当稀释大量复制所致，有感染性的病毒经适当稀释后接种于单层细胞，由于单个病毒的复制增后接种于单层细胞，由于单个病毒的复制增殖使局部单层细胞脱落，此即空斑。经染色殖使局部单层细胞脱落，此即空斑。经染色后空斑可用肉眼观察，计算空斑数即可计数后空斑可用肉眼观察，计算空斑数即可计数病毒数量。病毒数量。11/16/202261PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY11/16/202262PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY11/16/202263PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY11/
26、16/202264三、光学显微镜和电子显微镜三、光学显微镜和电子显微镜1 1、光学显微镜：观察病毒的包涵体、光学显微镜：观察病毒的包涵体11/16/2022652 2、电子显微镜：直接观察病毒、电子显微镜：直接观察病毒11/16/202266Viral Quantity DeterminationTCID50l50%tissue culture infectious doselDetermine the infectivity of the examined virusesPFUlPlaque formationlpfu/mllPrecisely quantitate the number o
27、f the living viral particles11/16/20226711/16/202268Plaque11/16/202269Differences between viral particle(VP),plaque formation unit(PFU)Viral particles(VPs)lrepresent the total number of viral particles(live and dead combined).Due to variations in virus preparations the ratio of live/dead varies sign
28、ificantly and therefore,VP does not reflect the amount of active virus in the preparation PFU(plaque formation unit)lrepresents the number of infectious or live viruses.It reflects the amount of working viruses in the preparation lFor most virus preps,the VP/PFU ratio is 20:1 to 50:1 Which one bette
29、r reflects the amount of active virus used?lUsing VP(viral particles)as the unit will result in significant variations in the amount of actual live viruses used,and using IFU or PFU as the viral unit will give more consistent outcomes.11/16/202270Proteins and Nucleic AcidsProteins(antigens)lFluorese
30、ce-labeled,enzyme-labeled(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)and radio-labeled anitbodiesViral DNA or RNAGene chiplDNA chip/cDNA Microarray11/16/202271Virus-specific AntibodiesNeutralization test,NTHemagglutination inhibition test,HIComplement fixation,CFELISAWestern blot11/16/202272三、三、病毒感染的血清
31、学诊断方法病毒感染的血清学诊断方法 P240 P2401 1、中和试验、中和试验 2 2、补体结合试验、补体结合试验 3 3、红细胞凝集和凝集抑制试验、红细胞凝集和凝集抑制试验 病毒抗体病毒抗体 失去感染性失去感染性恢复期恢复期/早期早期 4:1，有诊断意义。，有诊断意义。11/16/202273ELISA for HIV antibodyMicroplate ELISA for HIV antibody:coloured wells indicate reactivity11/16/20227411/16/202275Diagnosis Strategy for Viral Infectio
32、n 11/16/202276Rapid Diagnosis for Viral InfectionMorphologicallEM&IEM,occasionallylLight Microscopy:inclusion bodyViral antigenslImmunofluorescencelRadioimmunoassayslELISA Specific antibodies:IgMNucleic acids:PCR11/16/202277小小 结结细菌感染的微生物学检查法细菌感染的微生物学检查法病原体检查病原体检查 核酸的检测核酸的检测 抗原、抗体的检测抗原、抗体的检测病毒感染的微生物学
33、检查法病毒感染的微生物学检查法电镜及免疫电镜电镜及免疫电镜 病毒的分离培养和鉴定病毒的分离培养和鉴定 核酸的检测核酸的检测 抗原、抗体的检测抗原、抗体的检测真菌感染的微生物学检查法真菌感染的微生物学检查法直接镜检直接镜检 真菌的分离培养真菌的分离培养11/16/202278第四节第四节 特异性预防与治疗特异性预防与治疗Prevention Principles11/16/202279特异性免疫的分类特异性免疫的分类自然免疫自然免疫Natural Immunizationl自然主动免疫：隐性或显性感染自然主动免疫：隐性或显性感染l自然被动免疫：通过胎盘或初乳获得母体抗体自然被动免疫：通过胎盘或初
34、乳获得母体抗体人工免疫人工免疫 Artificial Immunizationl人工主动免疫：接种疫苗或类毒素等人工主动免疫：接种疫苗或类毒素等l人工被动免疫：注射抗毒素或丙种球蛋白等人工被动免疫：注射抗毒素或丙种球蛋白等11/16/202280一、人工免疫一、人工免疫(artificial immunization)用人工的方法给机体输入抗原性物质（如疫苗、用人工的方法给机体输入抗原性物质（如疫苗、类毒素等）或直接输入免疫效应分子（如抗体、类毒素等）或直接输入免疫效应分子（如抗体、细胞因子等），使机体获得特异性免疫力的方细胞因子等），使机体获得特异性免疫力的方法。法。人工主动免疫人工主动免疫
35、 artificial active immunization人工被动免疫人工被动免疫 artificial passive immunization11/16/202281人工免疫：人工免疫：采用人工方法将疫苗、类毒素等或含采用人工方法将疫苗、类毒素等或含有某种特异性抗体、细胞免疫制剂等接种于人体，有某种特异性抗体、细胞免疫制剂等接种于人体，以增强宿主体的抗病能力。以增强宿主体的抗病能力。人工自动免疫人工自动免疫 artificial active immunizationl疫苗疫苗（vaccine）l类毒素类毒素人工被动免疫人工被动免疫 artificial passive immuniz
36、ationl抗毒素抗毒素l抗菌血清抗菌血清l血清丙种球蛋白血清丙种球蛋白11/16/202282人工自动与被动免疫比较人工自动与被动免疫比较区区 别别 点点人工自动免疫人工自动免疫人工被动免疫人工被动免疫免疫物质免疫物质接种次数接种次数免疫力出现时间免疫力出现时间免疫力维持时间免疫力维持时间用途用途抗原抗原1 3 次次慢慢(2 4 周周)长长(数月数月数年数年)多用于预防多用于预防抗体或细胞因子抗体或细胞因子1 次次快快(立即出现立即出现)短短(2 3 周周)用于治疗或应急预防用于治疗或应急预防11/16/202283生物制品生物制品(biological products)：人工免疫：人工免
37、疫的免疫原、免疫血清、细胞制剂及诊断制剂的免疫原、免疫血清、细胞制剂及诊断制剂的生物性制剂。的生物性制剂。人工主动免疫生物制品人工主动免疫生物制品l疫苗疫苗l类毒素类毒素人工被动免疫生物制品人工被动免疫生物制品l抗毒素抗毒素l丙种球蛋白丙种球蛋白11/16/202284疫苗（疫苗（vaccine）减毒活疫苗（减毒活疫苗（attenuated live vaccine）l卡介苗（卡介苗（BCG）灭活疫苗（灭活疫苗（inactivated vaccine）l伤寒沙门菌与甲、乙型副伤寒沙门菌混合的三伤寒沙门菌与甲、乙型副伤寒沙门菌混合的三联疫苗联疫苗亚单位疫苗（亚单位疫苗（subunit vacci
38、ne）基因工程疫苗（基因工程疫苗（gene engineered vaccine）核酸疫苗（核酸疫苗（nucleic acid vaccine）11/16/20228511/16/20228611/16/202287类毒素（类毒素（toxoid）细菌外毒素经细菌外毒素经0.4甲醛液处理后，甲醛液处理后，其毒性消失而仍保留抗原性的生物其毒性消失而仍保留抗原性的生物制品制品常用的类毒素常用的类毒素l白喉类毒素白喉类毒素l破伤风类毒素等破伤风类毒素等l白、百、破三联疫苗白、百、破三联疫苗11/16/202288人工被动免疫生物制品人工被动免疫生物制品抗毒素（抗毒素（antitoxin）l通常是用细菌
39、类毒素给马多次注射后，通常是用细菌类毒素给马多次注射后，取其免疫血清提取免疫球蛋白精制而成取其免疫血清提取免疫球蛋白精制而成常用常用l破伤风抗毒素破伤风抗毒素l白喉抗毒素白喉抗毒素免疫球蛋白（免疫球蛋白（immunoglobulin）11/16/202289人工主动免疫病毒疫苗人工主动免疫病毒疫苗 减毒活疫苗（减毒活疫苗（attenuated live vaccine）灭活疫苗（灭活疫苗（inactivated vaccine）亚单位疫苗（亚单位疫苗（subunit vaccine）基因工程疫苗（基因工程疫苗（gene engineered vaccine）l基因工程亚单位疫苗（基因工程亚单位
40、疫苗（gene engineered subunit vaccine）l基因工程载体疫苗（基因工程载体疫苗（gene engineered vectored vaccine）l基因缺失活疫苗（基因缺失活疫苗（gene deleted live vaccine）l核酸疫苗（核酸疫苗（nucleic acid vaccine）。）。合成肽疫苗（合成肽疫苗（synthetic peptide vaccine）抗独特型疫苗（抗独特型疫苗（anti-idiotype vaccine）11/16/202290活疫苗（活疫苗（Living vaccine）减毒活疫苗减毒活疫苗基于基因工程技术的新型活疫苗基于
41、基因工程技术的新型活疫苗l遗传重组活疫苗遗传重组活疫苗l基因缺失活疫苗基因缺失活疫苗l载体活疫苗载体活疫苗11/16/202291减毒活疫苗减毒活疫苗(Attenuated vaccine)自然或人工选择法（如自然或人工选择法（如Ts株）对人低毒或无毒的变异株）对人低毒或无毒的变异株，如脊灰、流感、麻疹的减毒株。株，如脊灰、流感、麻疹的减毒株。优点：模拟自然感染，免疫效果好，局部优点：模拟自然感染，免疫效果好，局部IgA。理论上的缺点，实际工作中少见理论上的缺点，实际工作中少见l变异株可能回复到有毒力的野生株变异株可能回复到有毒力的野生株l如果机体免疫缺陷，减毒株仍可能引起感染或并发症如果机体
42、免疫缺陷，减毒株仍可能引起感染或并发症l可能激活机体内其他病毒的感染可能激活机体内其他病毒的感染l减毒活苗可能引起持续感染减毒活苗可能引起持续感染成功的范例：成功的范例：1961年我国应用脊灰疫苗，脊灰发病率年我国应用脊灰疫苗，脊灰发病率大幅度下降。大幅度下降。1980年天花病毒灭绝。年天花病毒灭绝。11/16/202292遗传重组疫苗遗传重组疫苗将野毒株表面抗原基因与弱毒株其将野毒株表面抗原基因与弱毒株其他基因组合而获得减毒活病毒。他基因组合而获得减毒活病毒。适用于基因组分节段双链适用于基因组分节段双链RNA病毒，病毒，如流感病毒、轮状病毒等。如流感病毒、轮状病毒等。11/16/202293
43、基因缺失活疫苗基因缺失活疫苗利用利用DNA重组技术，定向缺失病毒基重组技术，定向缺失病毒基因组的某一区段，使病毒丧失毒力而因组的某一区段，使病毒丧失毒力而保留增殖能力和免疫原性。保留增殖能力和免疫原性。优点：疫苗株的遗传背景清楚，不易优点：疫苗株的遗传背景清楚，不易突变回到野毒株。突变回到野毒株。11/16/202294载体活疫苗载体活疫苗利用利用DNA重组技术，将编码病毒抗原重组技术，将编码病毒抗原的基因插入到另一无毒力的载体病毒，的基因插入到另一无毒力的载体病毒，使之高效表达使之高效表达易建立多价疫苗易建立多价疫苗载体病毒常用的有痘苗病毒、腺病毒、载体病毒常用的有痘苗病毒、腺病毒、HSV-
44、111/16/202295灭活疫菌（灭活疫菌（Killed vaccine）灭活全病毒疫苗灭活全病毒疫苗亚单位疫苗亚单位疫苗合成肽病毒疫苗合成肽病毒疫苗基因工程疫苗基因工程疫苗独特型病毒疫苗独特型病毒疫苗核酸疫苗核酸疫苗11/16/202296灭活全病毒疫苗灭活全病毒疫苗物理或化学方法灭活病毒。适用烈性或易变异病物理或化学方法灭活病毒。适用烈性或易变异病毒如乙脑病毒、狂犬病病毒、流感病毒。毒如乙脑病毒、狂犬病病毒、流感病毒。优点：生产简单、易保存运输优点：生产简单、易保存运输缺点缺点l需要大量培养病毒，成本高需要大量培养病毒，成本高l无局部抗体，不激活无局部抗体，不激活CTL，可激活，可激活T
45、DTHl甲醛灭活的麻疹病毒和甲醛灭活的麻疹病毒和RSV疫苗可加重疾病，疫苗可加重疾病，机制不详机制不详11/16/202297亚单位疫苗（亚单位疫苗（Subunit）种类种类l化学方法制备：如化学方法制备：如HBsAg和流感和流感HAl基因工程亚单位疫苗基因工程亚单位疫苗优点优点l不含病毒核酸，仅有能诱导中和抗体的不含病毒核酸，仅有能诱导中和抗体的衣壳蛋白或包膜表面抗原。免除了回复衣壳蛋白或包膜表面抗原。免除了回复突变和交叉复活的可能。突变和交叉复活的可能。l消除肿瘤病毒的潜在的致癌作用。消除肿瘤病毒的潜在的致癌作用。11/16/202298合成肽病毒疫苗合成肽病毒疫苗人工合成病毒保护性抗原决
46、定簇肽段。人工合成病毒保护性抗原决定簇肽段。优点优点l制备容易，可大量生产，易保存，副作用少制备容易，可大量生产，易保存，副作用少理论与实践上的缺点理论与实践上的缺点l免疫原性弱，使用时需要加佐剂。免疫原性弱，使用时需要加佐剂。l不同肽免疫活性有差异。不同肽免疫活性有差异。l部分肽只激发部分肽只激发B细胞表位，缺乏激发细胞表位，缺乏激发TH细胞细胞的表位。的表位。11/16/202299基因工程疫苗基因工程疫苗利用利用DNA重组技术制备的生物制品。如将重组技术制备的生物制品。如将编码病毒特异抗原的基因用适当的载体将编码病毒特异抗原的基因用适当的载体将此基因带入大肠杆菌或真核细胞，使之表此基因带
47、入大肠杆菌或真核细胞，使之表达。达。研发成本高，生产成本低，下游工程复杂。研发成本高，生产成本低，下游工程复杂。11/16/2022100核酸疫苗核酸疫苗将病毒基因导入将病毒基因导入DNA载体（通常是带有真核载体（通常是带有真核表达调控基因的质粒或病毒），将重组表达调控基因的质粒或病毒），将重组DNA导入机体，重组导入机体，重组DNA可以在细胞的转录和翻可以在细胞的转录和翻译系统表达出目的蛋白。译系统表达出目的蛋白。优点：同时刺激产生体液和细胞免疫，能诱优点：同时刺激产生体液和细胞免疫，能诱导导CTL活性，易生产，易保存。活性，易生产，易保存。理论上缺点：安全性尚待考察。理论上缺点：安全性尚待
48、考察。目前仅在实验研究中，尚未投放市场。目前仅在实验研究中，尚未投放市场。11/16/2022101独特型病毒疫苗（独特型病毒疫苗（Idiotype）基于基于Jerne的免疫网络学说，内影像组抗体中含的免疫网络学说，内影像组抗体中含有与抗原一致的表位序列，又称抗独特型抗体有与抗原一致的表位序列，又称抗独特型抗体疫苗疫苗特别适合于特别适合于l不能培养或培养困难、产量极低的病原体不能培养或培养困难、产量极低的病原体l直接用病病制备有潜在危险的，如直接用病病制备有潜在危险的，如Retrovirusl免疫原性弱，且不能用重组技术生产的抗原免疫原性弱，且不能用重组技术生产的抗原11/16/2022102
49、11/16/2022103人工被动免疫预防人工被动免疫预防胎盘丙种球蛋白胎盘丙种球蛋白人血清丙种球蛋白人血清丙种球蛋白特异性免疫球蛋白特异性免疫球蛋白l乙型肝炎免疫球蛋白乙型肝炎免疫球蛋白11/16/2022104第三节第三节 病毒感染的治疗病毒感染的治疗 P243化学药物化学药物基因制剂基因制剂天然药物天然药物11/16/2022105抗病毒化学药物机制抗病毒化学药物机制阻断病毒脱壳阻断病毒脱壳阻断病毒核酸合成阻断病毒核酸合成 l核苷类似物核苷类似物(nucleoside analogue)、核苷酸类、核苷酸类似物似物(nucleotide analogue)和非核苷类似物。和非核苷类似物。
50、l主要应用于疱疹病毒、逆转录病毒主要应用于疱疹病毒、逆转录病毒阻断病毒蛋白质合成阻断病毒蛋白质合成阻断病毒释放阻断病毒释放11/16/2022106抗病毒化学药物作用的靶位点抗病毒化学药物作用的靶位点作用靶点作用靶点药物药物复制早期复制早期由病毒由病毒DNA或或RNA聚合酶介导的核酸合聚合酶介导的核酸合成成病毒前体蛋白切割病毒前体蛋白切割病毒病毒mRNA翻译蛋翻译蛋白白病毒释放病毒释放金刚烷胺甲基金刚烷胺金刚烷胺甲基金刚烷胺无环鸟苷丙氧鸟苷脱氧鸟苷无环鸟苷丙氧鸟苷脱氧鸟苷penciclovirfamciclovircidofovir阿糖腺苷阿糖腺苷idoxuridine3氟胸腺嘧啶氟胸腺嘧啶甲