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1、微生物第八章病原学诊断与防治第一页，讲稿共三十二页哦n诊断诊断n病原学检测病原学检测n血清学检测血清学检测n防治防治n特异性防治：人工主动免疫、人工被动免疫特异性防治：人工主动免疫、人工被动免疫n非特异性防治：非特异性防治：抗生素、抗病毒药物、抗真菌药物抗生素、抗病毒药物、抗真菌药物第二页，讲稿共三十二页哦第一节第一节 细菌学诊断细菌学诊断细菌学诊断细菌学诊断检测病原菌及其抗原，产物或核酸检测病原菌及其抗原，产物或核酸血清学诊断血清学诊断检测患者血清中特异性抗体检测患者血清中特异性抗体第三页，讲稿共三十二页哦一、病原菌检测一、病原菌检测标本采集与送检原则：标本采集与送检原则：v根据不同疾病和不
2、同病期，采取不同标本。根据不同疾病和不同病期，采取不同标本。v无菌操作，避免杂菌污染。无菌操作，避免杂菌污染。v应在使用抗菌药物前采集标本。应在使用抗菌药物前采集标本。v尽可能采集病变明显部位的材料。尽可能采集病变明显部位的材料。v标本必须新鲜，采集后尽快送检。标本必须新鲜，采集后尽快送检。v送检过程中要采取适当的保存方式。送检过程中要采取适当的保存方式。v做好标记，详细填写化验单，保证各环节准确无误。做好标记，详细填写化验单，保证各环节准确无误。第四页，讲稿共三十二页哦致病菌的检验程序致病菌的检验程序标本标本形态结构检查形态结构检查分离培养与鉴定分离培养与鉴定病原菌抗原检测病原菌抗原检测其它
3、检测其它检测光镜、电镜、染色法光镜、电镜、染色法形态形态特征特征培养培养特征特征生化反生化反应应药敏试药敏试验验血清学反血清学反应应沉淀反应沉淀反应协同凝集协同凝集免疫荧光免疫荧光对流免疫电泳对流免疫电泳酶免疫测定酶免疫测定免疫印迹免疫印迹细菌代谢产物细菌代谢产物（气相（气相色谱）色谱）PCR查细菌核酸查细菌核酸噬菌体分型噬菌体分型细菌素测定细菌素测定分子生物学技术分子生物学技术动物动物试验试验第五页，讲稿共三十二页哦人体受致病菌感染后，免疫系统产生特异性抗体。抗体的量人体受致病菌感染后，免疫系统产生特异性抗体。抗体的量常随病程而增加，表现为效价（滴度）升高。常随病程而增加，表现为效价（滴度）
4、升高。用已知的细菌或抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的用已知的细菌或抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为感染性疾病的辅助诊断。由于一般采取病人血清进动态变化，可作为感染性疾病的辅助诊断。由于一般采取病人血清进行试验，故称为行试验，故称为血清学诊断血清学诊断(serological diagnosis)。血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清，当后血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清，当后者的抗体效价比前者者的抗体效价比前者升高大于等于升高大于等于4倍倍时方有意义。时方有意义。常用方法：直接凝集试验、乳胶凝集试验、沉淀试验、补体常用方法：直
5、接凝集试验、乳胶凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、结合试验、中和试验、ELISA。二、血清学诊断二、血清学诊断第六页，讲稿共三十二页哦第二节第二节 病毒学诊断病毒学诊断 一、标本的采集与送检一、标本的采集与送检n早期（前驱期、急性期、发病前早期（前驱期、急性期、发病前12天）天）n根据不同病毒感染，采集不同部位标本根据不同病毒感染，采集不同部位标本n病毒室温易失活，应低温保存，快速送检病毒室温易失活，应低温保存，快速送检n无菌采集与抗生素处理（防止细菌污染）无菌采集与抗生素处理（防止细菌污染）n血清学实验检查抗体应采集双份血清血清学实验检查抗体应采集双份血清第七页，讲稿共三十二页哦二
6、、病毒的分离培养与鉴定二、病毒的分离培养与鉴定（一）病毒的分离（一）病毒的分离n动物接种：动物接种：选择易感动物及适宜接种部位，观察发病情况选择易感动物及适宜接种部位，观察发病情况n鸡胚培养：鸡胚培养：不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。n细胞培养细胞培养：分离病毒最常用的方法分离病毒最常用的方法（1）原代细胞）原代细胞来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传但只能传2-3代。代。（2）二倍体细胞）二
7、倍体细胞在体外分裂在体外分裂50-100代后仍保持代后仍保持2倍体染色体数目的单倍体染色体数目的单层细胞，可用于病毒分离和疫苗生产。层细胞，可用于病毒分离和疫苗生产。（3）传代细胞传代细胞能在体外无限传代的细胞，多由癌细胞或二倍体细胞能在体外无限传代的细胞，多由癌细胞或二倍体细胞突变而来，不能用于疫苗生产。突变而来，不能用于疫苗生产。第八页，讲稿共三十二页哦病毒在培养细胞中增殖的指标病毒在培养细胞中增殖的指标n细胞的变化细胞的变化n细胞病变效应细胞病变效应（CPE）：即某些病毒在细胞内增殖引起的特即某些病毒在细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、聚集、坏死、溶解、脱落等）有的细胞病变（细胞
8、变圆、聚集、坏死、溶解、脱落等）n细胞融合细胞融合：形成多巨核细胞：形成多巨核细胞n包涵体包涵体：某些病毒在培养细胞胞浆或核内形成的嗜酸或嗜碱性：某些病毒在培养细胞胞浆或核内形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。的团块状结构。n红细胞吸附红细胞吸附n干扰现象干扰现象n细胞代谢改变细胞代谢改变（pH）第九页，讲稿共三十二页哦正常细胞正常细胞病变细胞病变细胞第十页，讲稿共三十二页哦（二）病毒的数量与感染性测定（二）病毒的数量与感染性测定滴定：滴定：测定单位体积中感染性病毒的数量测定单位体积中感染性病毒的数量n 蚀斑测定法蚀斑测定法病毒感染单层细胞后，产生的局限性病灶，称蚀斑。蚀斑是由病毒感染单层细胞后，
9、产生的局限性病灶，称蚀斑。蚀斑是由一个感染性病毒体复制形成的，称蚀斑形成单位，病毒悬液中一个感染性病毒体复制形成的，称蚀斑形成单位，病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升的蚀斑形成单位来表示。的感染性病毒量以每毫升的蚀斑形成单位来表示。n 50%组织细胞感染量组织细胞感染量 鸡胚动物或细胞后，引起鸡胚动物或细胞后，引起 50%发生死亡或病变的最小量。发生死亡或病变的最小量。第十一页，讲稿共三十二页哦（三）新分离病毒的鉴定（三）新分离病毒的鉴定n核酸类型的测定核酸类型的测定n理化性状的检测理化性状的检测n形态学观察形态学观察n血清学鉴定血清学鉴定n基因测序和生物对比基因测序和生物对比第十二页，讲稿共三
10、十二页哦三、病毒感染的血清学诊断三、病毒感染的血清学诊断 用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体以诊断病毒用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体以诊断病毒性疾病。性疾病。n中和试验中和试验n补体结合试验补体结合试验n血凝抑制试验血凝抑制试验n凝胶免疫扩散试验凝胶免疫扩散试验第十三页，讲稿共三十二页哦 四、四、病毒感染的快速诊断病毒感染的快速诊断（一）形态学检查（一）形态学检查n电镜和免疫电镜电镜和免疫电镜直接观察病毒直接观察病毒n普通光镜普通光镜观察包涵体观察包涵体第十四页，讲稿共三十二页哦第十五页，讲稿共三十二页哦第十六页，讲稿共三十二页哦第十七页，讲稿共三十二页哦第十八页，讲稿共三十二页哦第十
11、九页，讲稿共三十二页哦（二）检测病毒蛋白抗原（二）检测病毒蛋白抗原用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原（简便、用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原（简便、敏感、特异）敏感、特异）常用方法：常用方法：n免疫荧光技术（免疫荧光技术（IF）n固相放射免疫测定（固相放射免疫测定（SPRIT）n酶免疫技术（酶免疫技术（EIA）等。等。（三）检测病毒特异性（三）检测病毒特异性IgMIgM抗体抗体检测病毒特异性检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染。抗体可诊断急性感染。第二十页，讲稿共三十二页哦（四）（四）检测病毒核酸检测病毒核酸 1 核酸杂交核酸杂交n 斑点杂交（斑点杂交（dot hybridizatio
12、n）n 原位杂交（原位杂交（in site hybridization）n DNA印迹杂交（印迹杂交（Southern blot）n RNA印迹杂交印迹杂交（Northern blot）2 核酸扩增核酸扩增n聚合酶链反应聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）n连接酶链反应（连接酶链反应（ligase chain reaction，LCR）n反转录反转录PCR（Reverse transcrptase PCR，RT-PCR）3 基因芯片技术（基因芯片技术（gene chip）第二十一页，讲稿共三十二页哦第三节第三节 真菌学诊断真菌学诊断标本标本直接镜检直接镜检
13、深部标本深部标本染色标本染色标本G染色染色G+圆形圆形大小不均大小不均有芽生孢子有芽生孢子分离培养分离培养沙氏培养基沙氏培养基菌落观察菌落观察角质标本角质标本不染色不染色10%KOH观察菌丝、观察菌丝、孢子孢子类型类型大小大小颜色颜色皱摺皱摺鉴定鉴定动物实验动物实验（致病性真菌）（致病性真菌）接种接种观察发病情况观察发病情况死亡后取标本进一死亡后取标本进一步鉴定步鉴定皮肤超敏反应皮肤超敏反应快速诊断快速诊断血清学实验血清学实验核酸检测核酸检测真菌毒素检测真菌毒素检测第二十二页，讲稿共三十二页哦第二十三页，讲稿共三十二页哦新生隐球菌脑脊液涂片第二十四页，讲稿共三十二页哦假菌丝第二十五页，讲稿共三
14、十二页哦第四节第四节 特异性预防与治疗特异性预防与治疗一、人工主动免疫一、人工主动免疫(artificial active immunity)将疫苗将疫苗(vaccine)或类毒素接种于人体，或类毒素接种于人体，使机体主动产生获得性免疫力的一种防治微使机体主动产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要用于预防。生物感染的措施，主要用于预防。第二十六页，讲稿共三十二页哦n疫苗疫苗n死疫苗死疫苗n活疫苗活疫苗n新型活疫苗新型活疫苗n基因工程疫苗基因工程疫苗n重组载体疫苗重组载体疫苗n合成疫苗合成疫苗n亚单位疫苗亚单位疫苗nDNA疫苗疫苗n转基因植物疫苗转基因植物疫苗n治疗性疫苗治疗性疫苗n类
15、毒素类毒素 外毒素外毒素 0.3%0.4%甲醛甲醛 类毒素类毒素用于人工主动免疫的生物制剂第二十七页，讲稿共三十二页哦第二十八页，讲稿共三十二页哦二、人工被动免疫二、人工被动免疫(artificial passitive immunity)注射含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白或注射含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白或细胞因子等免疫制剂，使机体立即获得特异性免疫。细胞因子等免疫制剂，使机体立即获得特异性免疫。人工被动免疫作用作用发挥迅速，但这些免疫物质不人工被动免疫作用作用发挥迅速，但这些免疫物质不是病人自己产生，故维持时间短。主要用于治疗或紧急是病人自己产生，故维持时间短。主要用
16、于治疗或紧急预防。预防。第二十九页，讲稿共三十二页哦抗毒素抗毒素抗菌血清抗菌血清胎盘丙种球蛋白、血清丙种球蛋白胎盘丙种球蛋白、血清丙种球蛋白其他免疫制剂其他免疫制剂用于人工被动免疫的生物制剂第三十页，讲稿共三十二页哦两种人工免疫的比较两种人工免疫的比较区别要点区别要点人工主动免疫人工主动免疫人工被动免疫人工被动免疫免疫物质免疫物质抗原抗原抗体或细胞因子等抗体或细胞因子等接种次数接种次数1-3次次1次次免疫出现时间免疫出现时间慢（注射后慢（注射后2-4W）快（注射后立刻出现）快（注射后立刻出现）免疫维持时间免疫维持时间长（数月长（数月数年）数年）短（短（2-3W）用途用途多用于预防多用于预防多用于治疗或应急预防多用于治疗或应急预防第三十一页，讲稿共三十二页哦三、细菌感染的治疗三、细菌感染的治疗抗菌药物抗菌药物n人工合成化学药物人工合成化学药物n微生物合成的抗生素微生物合成的抗生素第三十二页，讲稿共三十二页哦