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1、 第八章第八章 病原学诊断与防病原学诊断与防治治 n第一节细菌学诊断n一、病原菌检测一、病原菌检测n1.标本标本n标本采集与送检的原则标本采集与送检的原则：n（1）据据不不同同疾疾病病以以及及疾疾病病的的不不同同时时期期采采集集不同标本不同标本n（2）严格无菌操作，避免标本被污染）严格无菌操作，避免标本被污染n（3）尽尽可可能能在在疾疾病病早早期期以以及及抗抗菌菌药药物物使使用用前前采集标本采集标本n（4）采采集集的的标标本本必必须须尽尽快快送送检检，大大多多数数细细菌标本可以冷藏送检。菌标本可以冷藏送检。n（5）标本作好标记。）标本作好标记。标本采集与送检的原则标本采集与送检的原则n2.细菌
2、形态与结构检查细菌形态与结构检查n（1）显微镜放大法）显微镜放大法n普通光镜普通光镜,电子显微镜等电子显微镜等n（2）染色法）染色法n染色剂与细菌细胞质的结合。染色剂与细菌细胞质的结合。n最常用的染色剂是最常用的染色剂是盐类盐类。n3.分离和鉴定分离和鉴定n鉴定的主要内容有：鉴定的主要内容有：n培培养养特特征征、形形态态特特征征、生生化化反反应应、血血清清学学鉴鉴定定、动动物物试验、药物敏感试验试验、药物敏感试验n4.病原菌抗原的检测病原菌抗原的检测n常用的细菌学诊断的免疫学技术有：常用的细菌学诊断的免疫学技术有：n沉沉淀淀反反应应、协协同同凝凝集集试试验验、免免疫疫荧荧光光法法、对对流流免免
3、疫疫电电泳、酶免疫测定和免疫印迹技术。泳、酶免疫测定和免疫印迹技术。n5.其他检测法其他检测法n二、血清学诊断二、血清学诊断n用用已知抗原已知抗原检测检测病人血清或其它体液中病人血清或其它体液中未知未知抗体抗体及其量的变化，可作为感染性疾病的辅及其量的变化，可作为感染性疾病的辅助诊断。助诊断。n第二节第二节病毒学诊断病毒学诊断n目目前前常常用用的的病病毒毒学学诊诊断断方方法法包包括括病病毒毒的的分分离离鉴鉴定定、病病毒毒的的血血清清学学检检查查、病病毒毒蛋蛋白白和和核核酸酸的检测。的检测。n一、标本的采取与送检一、标本的采取与送检n原则：原则：n1.对对本本身身带带有有杂杂菌菌（如如咽咽拭拭子
4、子、粪粪便便）或或易易受受污污染染的的标标本本，要要进进行行病病毒毒分分离离培培养养，应应使使用用抗抗生素。生素。n2.标本标本应低温保存应低温保存并并尽快送检尽快送检。n3.血血清清学学诊诊断断标标本本的的采采取取应应在在发发病病初初期期和和病病后后23w内内各各取取1份份血血清清以以便便对对比比双双份份血血清清抗抗体体效效价的动态变化。价的动态变化。n二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定n（一）病毒的分离（一）病毒的分离n1.动物接种动物接种最早的病毒分离方法最早的病毒分离方法n2.鸡胚培养鸡胚培养n按按病病毒毒种种类类不不同同接接种种于于不不同同部部位位如如绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜、尿囊
5、腔、羊膜腔、卵黄囊等。尿囊腔、羊膜腔、卵黄囊等。n3.细胞培养细胞培养n（1）从生长方式可分）从生长方式可分n单层细胞和悬浮细胞培养单层细胞和悬浮细胞培养n（2）从来源、染色体特征及传代次数分）从来源、染色体特征及传代次数分n 原代细胞原代细胞n来源于动物、鸡胚或引产人胚组织细胞来源于动物、鸡胚或引产人胚组织细胞n 二倍体细胞二倍体细胞n细细胞胞在在体体外外分分裂裂50100代代后后仍仍保保持持2倍倍染染色色体数目体数目的的单层细胞单层细胞。n 传代细胞系传代细胞系n多多由由癌癌细细胞胞或或2倍倍体体细细胞胞突突变变而而来来，能能在在体体外外持续传代，对病毒的敏感性稳定持续传代，对病毒的敏感性稳定n（3）病毒在培养细胞中增殖的指标）病毒在培养细胞中增殖的指标n 细胞的变化细胞的变化 n细胞病变、多核巨细胞、包涵体细胞病变、多核巨细胞、包涵体n 红细胞吸附红细胞吸附 n红细胞吸附和红细胞吸附抑制现象红细胞吸附和红细胞吸附抑制现象n 干扰现象干扰现象n 细胞代谢的变化细胞代谢的变化尖锐多久能自愈http:/ n斑斑点点杂杂交交、细细胞胞内内原原位位杂杂交交、DNADNA印印迹迹杂杂交交、RNARNA印迹杂交印迹杂交n2.核酸扩增技术核酸扩增技术nPCR、连接酶链反应、反转录、连接酶链反应、反转录PCRn3.基因芯片技术基因芯片技术沈阳治疗生殖器疱疹专家？http:/