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1、考试说明要求考试说明要求类类型型具体内容具体内容微生物的培养与利用微生物的培养与利用微生物的培养与分离微生物的培养与分离某种微生物数量的某种微生物数量的测测定定培养基培养基对对微生物的微生物的选择选择作用作用利用微生物利用微生物进进行行发发酵来生酵来生产产特定特定的的产产物物发发酵酵过过程中程中亚亚硝酸硝酸盐盐含量的含量的测测定定 微微 生生 物物 的的 利利 用用什么是微生物？什么是微生物？生物生物:动物界动物界,植物界植物界,微生物界微生物界.微生物：形体极小，结构简单，微生物：形体极小，结构简单，只只有在光学显微镜和电子显微镜下才有在光学显微镜和电子显微镜下才能看清楚的生物能看清楚的生物
2、微生物的类群微生物的类群3真菌界真菌界(单或多单或多C)：例如酵母菌例如酵母菌、霉菌、霉菌、真菌、真菌4原生生物界原生生物界(单单C)：例如草履虫、变形虫例如草履虫、变形虫非细胞非细胞结构结构1病毒：例如艾滋病毒、病毒：例如艾滋病毒、朊病毒朊病毒 细胞细胞结构结构原核细胞原核细胞:2原核生物界原核生物界(单单C)：细菌、蓝藻、放线菌、支原体细菌、蓝藻、放线菌、支原体真核细胞真核细胞:培养基的种类培养基的种类 n按照物理性质划分培养基按照物理性质划分培养基 固体培养基固体培养基半固体培养基半固体培养基液体培养基液体培养基主要用于微生物的主要用于微生物的分离、鉴定等分离、鉴定等主要用于观察微生主要
3、用于观察微生物的运动、保藏菌物的运动、保藏菌种等种等主要用于工业生产主要用于工业生产实验室扩大培养菌种实验室扩大培养菌种需加入凝固需加入凝固剂，如琼脂剂，如琼脂液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长固体培养基：菌落固体培养基：菌落半固体培养基：半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力(弥散弥散)(是否运动是否运动)n按照化学成分划分培养基按照化学成分划分培养基 n天然培养基：天然培养基：化学成分不明确，化学成分不明确，玉米粉，牛肉膏，蛋白胨玉米粉，牛肉膏，蛋白胨等等用于工业化生产用于工业化生产n合成培养基合成培养基化学成分已知，含量精确。化学成分已知，
4、含量精确。用于实验室研究用于实验室研究按照培养基的用途划分培养基按照培养基的用途划分培养基选择培养基：选择培养基：加入（或减少）某种化学物质，抑制不需要的微加入（或减少）某种化学物质，抑制不需要的微生物的生长，促进需要微生物的生长。生物的生长，促进需要微生物的生长。如：酵母菌细菌如：酵母菌细菌加入青霉素后，只有酵母菌生长，细菌死亡加入青霉素后，只有酵母菌生长，细菌死亡。鉴别培养基：鉴别培养基：加入某种化学物质，呈现不同的颜色或状态。加入某种化学物质，呈现不同的颜色或状态。如：伊红美蓝加入后，大肠杆菌呈紫色，金属如：伊红美蓝加入后，大肠杆菌呈紫色，金属光泽。其他细菌则无此现象。光泽。其他细菌则无
5、此现象。下列培养基属于哪种培养基？下列培养基属于哪种培养基？n蛋白胨：蛋白胨：n酵母提取物：酵母提取物：n氯化钠：氯化钠：n水：水：50 ml50 mln琼脂：琼脂：1g1g天然培养基，固体培养基天然培养基，固体培养基加入伊红美蓝后，加入伊红美蓝后，鉴别培养基鉴别培养基LB培养基培养基微生物的营养微生物的营养水水无机盐无机盐 碳源碳源氮源氮源生长因子生长因子氧气、氧气、pH等等基本营养要素基本营养要素碳碳 源源n概念：凡是能为微生物提供生长繁殖所需概念：凡是能为微生物提供生长繁殖所需碳元碳元素素的营养物质，就叫做碳源的营养物质，就叫做碳源 n来源：来源：n无机碳源无机碳源：CO2、NaHCO3
6、n有机碳源有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油n最常用碳源：最常用碳源：糖类是最常用的碳源，尤其是糖类是最常用的碳源，尤其是葡萄糖葡萄糖n功能：构成微生物的细胞物质和代谢产物功能：构成微生物的细胞物质和代谢产物 异养微生物的主要能源物质异养微生物的主要能源物质 以碳源分以碳源分n自养型自养型：以无机物为碳源；：以无机物为碳源；n异养型：异养型：以有机物为碳源。以有机物为碳源。n概念：凡是能为微生物提供所需概念：凡是能为微生物提供所需氮元素氮元素的营的营养物质，就叫做氮源养物质，就叫做氮源 n来源来源n无机氮源无机氮源：N2、氨、铵盐、硝酸盐、氨、铵盐、硝酸盐n有机
7、氮源有机氮源：尿素、牛肉膏和蛋白胨：尿素、牛肉膏和蛋白胨 n最常用氮源最常用氮源：铵盐、硝酸盐铵盐、硝酸盐n功能：功能：用于用于合成蛋白质、核酸以及含氮合成蛋白质、核酸以及含氮的代的代谢产物。谢产物。n对于异养微生物来说，含对于异养微生物来说，含C、H、O、N的化的化 合物合物既是碳源，又是氮源既是碳源，又是氮源。氮氮 源源1.哪种细菌培养时不用在哪种细菌培养时不用在培养基中加氮源呢？培养基中加氮源呢？思 考固氮菌固氮菌2.对于硝化细菌来说，氨的功能对于硝化细菌来说，氨的功能有哪些？培养基中可以不添加哪有哪些？培养基中可以不添加哪种成分？种成分？既是氮源，也是能源物质既是氮源，也是能源物质可以
8、不添加碳源可以不添加碳源判断题判断题（1）同一种物质不可能既作碳源又作）同一种物质不可能既作碳源又作氮源。氮源。（2）凡是碳源都能提供能量。）凡是碳源都能提供能量。（3）除水以外的无机物仅提供无机盐）除水以外的无机物仅提供无机盐（4）无机氮源也能提供能量。）无机氮源也能提供能量。并非任何一种微生物都需从外界吸收。如生长因子自养并非任何一种微生物都需从外界吸收。如生长因子自养型微生物，包括真菌和少数细菌（大肠杆菌）等，均不型微生物，包括真菌和少数细菌（大肠杆菌）等，均不需要外界提供生长因子；异养型微生物则需要补充多种需要外界提供生长因子；异养型微生物则需要补充多种生长因子，如乳酸菌、各种动物致病
9、菌、原生动物和支生长因子，如乳酸菌、各种动物致病菌、原生动物和支原体等。原体等。生长因子生长因子定义定义:它是一类对微生物正常生活所它是一类对微生物正常生活所不可缺不可缺少少而而需要量又不大需要量又不大，但微生物自身不能合成，但微生物自身不能合成，或合成量不足以满足机体生长需要的或合成量不足以满足机体生长需要的有机营有机营养物质养物质。不同微生物需求的生长因子的种类。不同微生物需求的生长因子的种类和数量不同。和数量不同。主要包括：主要包括：维生素维生素 氨基酸氨基酸 碱基碱基来源：来源：酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液功能：功能：酶和核酸的组成成分酶和核酸的组成
10、成分n加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基 分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌n不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌分离固氮菌n不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物分离自养型微生物n加入伊红加入伊红-美蓝的培养基美蓝的培养基 鉴别大肠杆菌鉴别大肠杆菌n分离能分解尿素的微生物（纤维素）分离能分解尿素的微生物（纤维素）尿素为唯一氮源的培养基尿素为唯一氮源的培养基 （纤维素）（纤维素）（碳源）（碳源）讲练测讲练测P173 例例1（1）、）、（5）P175 1、3、4大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧的细菌。大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧的细菌。
11、将细菌分成两大类：将细菌分成两大类：革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。与细胞壁的成分有关与细胞壁的成分有关大肠杆菌的培养与分离大肠杆菌的培养与分离n实验内容：实验内容：先用先用LB液体培养基扩大培液体培养基扩大培养大肠杆菌，再用养大肠杆菌，再用LB固体培养基固体培养基划线划线法法分离，形成单菌落。分离，形成单菌落。接种环接种环微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、培养基的配制、培养基的配制2 2、灭菌、灭菌3 3、培养基的分装（倒平板）、培养基的分装（倒平板）4 4、微生物接种、微生
12、物接种5 5、恒温箱中培养、恒温箱中培养实验：微生物的实验室培养实验：微生物的实验室培养实验：微生物的实验室培养实验：微生物的实验室培养（一）培养基组分应适合微生物的营养特点（一）培养基组分应适合微生物的营养特点（目的明确目的明确）“细菌喜荤，霉菌喜素细菌喜荤，霉菌喜素”（二）营养物的浓度与比例应恰当（二）营养物的浓度与比例应恰当（营养协调营养协调）（三）物理化学条件适宜（三）物理化学条件适宜（条件适宜条件适宜）pHpH：细菌偏碱，真菌偏酸：细菌偏碱，真菌偏酸（四）（四）根据培养目的选择原料及其来源（根据培养目的选择原料及其来源（经济节约经济节约）生产：天然。分类鉴定：合成培养基生产：天然。分
13、类鉴定：合成培养基一一 培养基的配制培养基的配制原则原则微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、培养基的配制、培养基的配制2 2、灭菌、灭菌3 3、培养基的分装（倒平板）、培养基的分装（倒平板）4 4、微生物接种、微生物接种5 5、恒温箱中培养、恒温箱中培养1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。中，所有防止杂菌污染的方法。无论无论是是倒平板倒平板、平板划线平板划线操作，还是操作，还是平板平板稀释涂布法稀释涂布法，其操作中
14、的每一步都需，其操作中的每一步都需要做到要做到“无菌无菌”，即防止杂菌污染。，即防止杂菌污染。二二 灭菌灭菌（）（）消毒定义：消毒定义：利用化学或物理方法，利用化学或物理方法，杀死大部份杀死大部份致致病微生物的过程。区分为病微生物的过程。区分为高程度消毒高程度消毒（High-level DisinfectionHigh-level Disinfection）、）、中程度消中程度消毒毒（Intermediate-level DisinfectionIntermediate-level Disinfection）、）、低程度消毒低程度消毒（Low-level DisinfectionLow-lev
15、el Disinfection）三种方式。三种方式。2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别（2 2）灭菌的定义：）灭菌的定义：以化学剂或物理方法消灭以化学剂或物理方法消灭所有所有微生微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到菌及病毒，而达到完全无菌完全无菌之过程。之过程。灭菌消毒技术是微生物有关工作中灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。最普通也是最重要的技术。1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30mi
16、n30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法:用用75%75%酒精、氯气，酒精、氯气，4 4、紫外线消毒：、紫外线消毒：(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160-170 160-170 下加下加热热1-2h1-2h。3 3、高压蒸汽灭菌：、高压蒸汽灭菌：100kPa100kPa、121 121 下维持下维持15-30min15-30min.(2)灭菌的方法：灭菌的方法：玻玻璃璃砂砂漏漏斗斗4.4.过滤灭菌法过滤灭菌法(不能加热的物质不能加热
17、的物质)尿素，抗生素等尿素，抗生素等 最常用的灭菌方法是最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌，它可以杀，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌高温干热灭菌。下列物体的灭菌消毒方法：下列物体的灭菌消毒方法：n培养基：培养基：n三角瓶，量筒，培养皿：三角瓶，量筒，培养皿：n接种环，涂布器：接种环，涂布器：n双手：双手：n牛奶：牛奶：n饮用水：饮用水：n维生素：维生素：高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸
18、汽灭菌，干热灭菌高压蒸汽灭菌，干热灭菌灼烧灭菌灼烧灭菌巴氏消毒巴氏消毒化学消毒：酒精化学消毒：酒精化学消毒：氯水化学消毒：氯水过滤灭菌过滤灭菌超净台上紫外灯和过滤风超净台上紫外灯和过滤风讲练测讲练测P172 无菌技术具体操作无菌技术具体操作微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、培养基的配制、培养基的配制2 2、灭菌、灭菌3 3、培养基的分装（倒平板）、培养基的分装（倒平板）4 4、微生物接种、微生物接种5 5、恒温箱中培养、恒温箱中培养三三 培养基的分装培养基的分装（试管，三角瓶，培养皿）（试管，三角瓶，
19、培养皿）倒倒入入三三角角瓶瓶和和试试管管（漏斗法）（漏斗法）一些注意事项：一些注意事项：1 1、棉花的使用、棉花的使用不能用脱脂棉，易吸水。不能用脱脂棉，易吸水。棉花塞的制作棉花塞的制作 不能过松，也不能过紧不能过松，也不能过紧实验实验1 1 大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离实验实验1 1 大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离搁置固体斜面培养基搁置固体斜面培养基固体培养基倒入培养皿中（倒平板）固体培养基倒入培养皿中（倒平板）1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温才能用来倒平板。你用什么办法来估
20、计培养基的温度？度？答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。污染培养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来
21、培养微生物吗？为什么？还能用来培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。培养微生物。微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本
22、操作程序微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、培养基的配制、培养基的配制2 2、灭菌、灭菌3 3、培养基的分装（倒平板）、培养基的分装（倒平板）4 4、微生物接种、微生物接种5 5、恒温箱中培养、恒温箱中培养四四 微生物的接种微生物的接种目的不同，接种到不同培养基中。目的不同，接种到不同培养基中。n目的目的1 1，大肠杆菌扩大培养，大肠杆菌扩大培养n目的目的2 2，短期保存菌种，短期保存菌种n目的目的3 3，分离单个大肠杆菌，分离单个大肠杆菌接种到装有液体培养基的三角瓶中接种到装有液体培养基的三角瓶中接种到装有固体培养基的培养皿（平板）上接种到装有固体培养基的培养
23、皿（平板）上接种到固体斜面培养基上接种到固体斜面培养基上分离纯化大肠杆菌的方法分离纯化大肠杆菌的方法接种方法有：接种方法有：平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作养基表面连续画线的操作,将聚集的菌种将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面逐步稀释分散到培养基的表面.在数次画线后在数次画线后,可以分离到由一个细胞可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就这就是菌落是菌落.平板划线的操作方法平板划线的操作方法交叉划线法交叉划线法连续划线法连续划线法 1.
24、1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而
25、通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。免细菌污染环境和感染操作者。2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？什么总是从上一次划线
26、的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、培养基的配制、培养基的配制2 2、灭菌、灭菌3 3、培养基的分装（倒平板）、培养基的分装（倒平板）4 4、微生物接种、微生物接种5 5、恒温箱中
27、培养、恒温箱中培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养五五 微生物的恒温培养微生物的恒温培养固体培养基：菌落固体培养基：菌落菌种的保存菌种的保存 1 1、临时保藏：接种、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌到固体斜面培养基，菌落长成后置于落长成后置于44冰箱保冰箱保存。存。2 2、长期保存：、长期保存：-20-20甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、培养基的配制、培养基的配制2 2、灭菌、灭菌3 3、培养基的分装（倒平板）、培养基的分装（倒平板）4 4、微生物接种、微生物接种5 5、恒温箱中培养、恒温箱中培养