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1、第二章 菌种扩大培养第1页，共12页，编辑于2022年，星期二定义：菌种的扩大培养就是把保藏的菌种，即砂土管，冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化，再经过扁瓶或药瓶和种子罐，逐级扩大培养后达到一定的数量和质量的纯种培养过程。这些纯种的培养物称为种子。第2页，共12页，编辑于2022年，星期二种子必须具备的条件种子必须具备的条件菌种细胞的生长活力强，接种后在发酵罐菌种细胞的生长活力强，接种后在发酵罐 中能迅速生长中能迅速生长生理性状稳定生理性状稳定菌体总量和浓度能满足大容量发酵罐的要菌体总量和浓度能满足大容量发酵罐的要 求求无杂菌污染（不带杂菌）无杂菌污染（不带杂菌）生产能力稳定生
2、产能力稳定 第3页，共12页，编辑于2022年，星期二种种 子子 制制 备备 过过 程程n实验室种子制备阶段：琼脂斜面至固体培养基扩大培养（如茄子瓶斜面培养等或液体摇瓶培养 n生产车间种子制备阶段：种子罐扩大培养 第4页，共12页，编辑于2022年，星期二第5页，共12页，编辑于2022年，星期二第6页，共12页，编辑于2022年，星期二第7页，共12页，编辑于2022年，星期二实验室种子制备实验室种子制备 在砂土管或冷冻干燥管内保藏的菌种以在砂土管或冷冻干燥管内保藏的菌种以无菌的方式接至适合的斜面培养基上，无菌的方式接至适合的斜面培养基上，培养成熟后挑选正常的菌落再接一次试培养成熟后挑选正常
3、的菌落再接一次试管斜面并至摇瓶。管斜面并至摇瓶。第8页，共12页，编辑于2022年，星期二生产车间种子制备生产车间种子制备 实验室制备的孢子斜面或摇瓶种子移接实验室制备的孢子斜面或摇瓶种子移接到种子罐进行扩大培养到种子罐进行扩大培养 种子罐培养一方面使菌种种子罐培养一方面使菌种获获得足得足够够的的数量，另一方面种子罐中的培养基更接数量，另一方面种子罐中的培养基更接近近发发酵罐培养的醪液成分和培养条件，酵罐培养的醪液成分和培养条件，譬如通无菌空气，譬如通无菌空气，搅搅拌形式等等，以使拌形式等等，以使菌体适菌体适应发应发酵酵环环境境 第9页，共12页，编辑于2022年，星期二种子罐级数的确定种子罐
4、级数的确定 种子罐的级数是指制备种子需逐级扩大种子罐的级数是指制备种子需逐级扩大培养的次数培养的次数 对于生长快的细胞，种子用量的比例对于生长快的细胞，种子用量的比例少，即需要的接种量少，所以相应的种少，即需要的接种量少，所以相应的种子罐也少子罐也少 第10页，共12页，编辑于2022年，星期二接种种龄和接种量接种种龄和接种量n接种龄接种龄 种子罐中培养的菌体从开始移入下一级种子罐或发酵种子罐中培养的菌体从开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间罐时的培养时间n接种量接种量 接种量指的是移入的种子悬浮液体积和接种后培接种量指的是移入的种子悬浮液体积和接种后培养液体的体积的比例养液体的体积的比例
5、 n种子质量的判断种子质量的判断 第11页，共12页，编辑于2022年，星期二 种子质量的控制措施种子质量的控制措施 n菌种稳定性的检查菌种稳定性的检查 将保藏菌株溶于无菌的生理盐水中，逐级稀释，然后在培将保藏菌株溶于无菌的生理盐水中，逐级稀释，然后在培养皿琼脂固体培养基上划线培养，长出菌落，选择形态优养皿琼脂固体培养基上划线培养，长出菌落，选择形态优良的菌落接入三角瓶进行液体摇瓶培养，检测出生产率高良的菌落接入三角瓶进行液体摇瓶培养，检测出生产率高的菌种备用的菌种备用 n杂菌检查杂菌检查 显微镜观察，或平板培养试验，即将种子液涂在平板显微镜观察，或平板培养试验，即将种子液涂在平板培养皿上划线培养，观察有无异常菌落，定时检查，培养皿上划线培养，观察有无异常菌落，定时检查，防止漏检防止漏检 第12页，共12页，编辑于2022年，星期二