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1、基因工程一、选择题（每小题 1。5 分，共 15 分）1基因工程的创始人是（)。A A.Kornberg B W.Gilbert C P。Berg D S.Cohen2关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（）不太恰当。A由作用于同一 DNA 序列的两种酶构成 B这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶 C这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对 DNA 进行修饰 D不同的宿主系统具有不同的限制修饰系统3在 DNA 的 35链上，基因的起始密码子是（)A ATG（或 GTG）B AGT C TAG D TGA4II 限制性内切核酸酶可以特异性地识别(）。A双链 DNA 的特定碱基对
2、B双链 DNA 的特定碱基序列 C特定的三联密码 D以上都正确5末端转移酶是合成酶类，具有（）活性.A35DNA 聚合酶 B53DNA 聚合酶 C53DNA 内切酶 D53DNA 外切酶6下面关于松弛型质粒（relaxed plasmid）性质的描述中，(）是不正确的。A质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，因而有较多的拷贝数。B可以在氯霉素作用下进行扩增.C通常带有抗药性标记。D同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子。7关于 cDNA 的最正确的说法是(）。A同 mRNA 互补的单链 DNA B同 mRNA 互补的双链 DNA C以 mRNA 为模板合成的双链 DNA D以上都
3、正确8关于 T4 DNA Ligase，下列说法中哪一项不正确?(）A是最常用的 DNA 连接酶。B不但能连接粘性末端，还能连接齐平末端。C不但能连接粘性末端。D最适温度 37 .9下列关于建立 cDNA 文库的叙述中,（）是错误的?A从特定组织或细胞中提取 DNA 或 RNA B用反转录酶合成 mRNA 的对应单链 DNA C以新合成的单链 DNA 为模板合成双链 DNA D新合成的双链 DNA 克隆到载体上，并导入受体细胞10用下列方法进行重组体的筛选,只有（）说明外源基因进行了表达。A Southem blot B Northem blot C Western 印迹 D原位菌落杂交二、填
4、空题（每空 1 分,共 25 分）1限制性内切核酸酶分为三类，基因工程中应用的是_ _。2为了防止 DNA 的自身环化,可用_去双链 DNA_。3切口平移（nick translation)法标记 DNA 探针时应用的酶是_ _ _.4基因工程中的 3 种主要类型的载体是_、_、_.5野生型的 M13 不适合用作基因工程载体，主要原因是、和 .6黏粒（cosmid）是杂合载体。7引物在基因工程中至少有 4 个方面的用途:（1)（2）、（3)（4）.8Northern 印迹和 Southern 印迹有两点根本的区别:（1)_ _、，（2)_9PCR 反应中常用的酶是_ _ .-1-10感受态的大
5、肠杆菌细胞在温度为_ _时吸附 DNA，_时摄人外源 DNA。11。用碱法分离质粒 DNA 时，染色体 DNA 之所以可以被除去，是因为。12.除具有较低的分子量外，一个理想的质粒载体必需包括_、_、_三个部分.13转基因植物操作中常用的载体是。14。pcDNA3.1 用于。三、名词解释（每小题 4 分,共 20 分）1目的基因：2基因工程：3载体：4Western 印迹:5核酸分子杂交：四、简答题（每小题 10 分，共 20 分）1。基因工程的基本操作程序?2.怎样制备目的基因?基因工程评分标准与参考答案一、选择题：每小题 1。5 分，共 15 分；多选不得分.1d；2b；3a;4b；5b；
6、6c；7c；8c；9a;10c二、填空题:每空 1 分，共 25 分1II 类酶。2碱性磷酸酶；5端的磷酸基团3DNA 聚合酶 I。4质粒 DNA；病毒 DNA;质粒和病毒 DNA 杂合体5没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记6质粒和噬菌体7合成探针；合成 cDNA；用于 PCR 反应；进行序列分析8印迹的对象不同：Northern 是 RNA，Southern 是 DNA；）电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性电泳9Tag DNA 聚合酶100C;42C11染色体变性后来不及复性12复制起点;选择标记；克隆位点13Ti 质粒14外源基因导入哺乳动物细胞三、名词解释(每小题 4
7、分，共 20 分）1在基因工程中被操作的 DNA 序列；又称外源基因(foreign gene/exogenous gene），主要是指编码蛋白质的结构基因（structuralgene）；它们可以从自然界中已有的物种基因组(genome）中分离出来，也可以用人工的方法合成。2按照人们的意愿，进行严密的设计,通过体外 DNA 重组和转基因等技术，有目的地改造生物种性,生产生物活性物质,甚至创造新物种的技术。3携带外源基因进入受体细胞的 DNA 分子。4Western 印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上；然后用特异性的抗体进行检测；可说明基因是否进行了表达。5用标记的探针检测出
8、 DNA 或 RNA 同源序列的技术;原理是碱基互补；常用的有 Southern blot、Northern blot 和原位杂交。四、简答题(20 分)1 目的基因的制备；目的基因与载体连接;目的基因导入受体细胞；目的基因的表达与检测。或者：转、接、切、增、检（加以解释）。2 直接分离法、构建基因文库分离法、PCR 扩增法、人工合成法等。（加以解释）-2-五、实验与论述题（20 分）由于基因已被测序，可通过 RT-PCR 方法克隆该基因；也或通过基因文库分离法获得该基因;基因可以在大肠杆菌中作为融合蛋白质或分泌蛋白质进行表达。具体操作如下：制备目的基因；连接到 T载体；转化大肠杆菌，提质粒；测序；酶切，回收目的基因,连接到原核表达载体；再转化大肠杆菌，大量培养；分离、纯化和检测表达产物。-3-