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1、精选优质文档-倾情为你奉上基因工程试题及答案【篇一：基因工程题库以及答案】因工程是_年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2 基因工程的两个基本特点是： (1)_，(2)_。 3 基因克隆中三个基本要点是：_；_和_。 4 通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小 的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的_。 5 限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_，第二、三两个字母取自_，第四个字母则用_表示。 6部分酶切可采取的措施有：(1)_(2)_ (3)_等。 7第一个分离的限制性内切核酸酶是_；而第一个用于构建重组
2、体的限制性内切核酸酶是_。 8限制性内切核酸酶bsuri和hae的来源不同，但识别的序列都是_，它们属于_。 9dna聚合酶i的klenow大片段是用_切割dna聚合酶i得到的分子量为76kda的大片段，具有两种酶活性： (1)_； (2)_的活性。 10为了防止dna的自身环化，可用_去双链dna_。 11egta是_离子螯合剂。 12测序酶是修饰了的t7 dna聚合酶，它只有_酶的活性，而没有_酶的活性。 13切口移位(nick translation)法标记dna的基本原理在于利用_的_和_的作用。 14欲将某一具有突出单链末端的双链dna分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_或_。
3、15反转录酶除了催化dna的合成外，还具有_的作用，可以将dna- rna杂种双链中的_水解掉。 16基因工程中有3种主要类型的载体： _、_、_。 17就克隆一个基因(dn*段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：_、_、_。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 18 一个带有质粒的细菌在有eb的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测 不出质粒，这种现象叫 。 19 pbr322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于 ，它的四环素抗性基 因来自于 ，它的氨苄青霉素抗性基因来自于 。 20yac的最大容载能力是 ，bac载体的最大容载能力是 。 21pscl01是一种 复制的质粒。
4、 22pucl8质粒是目前使用较为广泛的载体。puc系列的载体是通过 和 两种质粒改造而来。它的复制子来自 ，amp 抗性基因则是来自 。 23噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是 ； 二是 。 24 野生型的m13不适合用作基因工程载体，主要原因是 和 。 25 黏粒(cosmid)是质粒噬菌体杂合载体，它的复制子来自 、cos位点序列来自 ，最大的克隆片段达到 kb。 26 野生型的l噬菌体dna不宜作为基因工程载体，原因是：(1) (2) (3) 。 27噬菌粒是由质粒和噬菌体dna共同构成的，其中来自质粒的主要结构是 ，而来自噬菌体的主要结构是 。28l噬菌体载体由
5、于受到包装的限制，插入外源dn*段后，总的长度应在噬菌体基 因组的 的范围内。 29 在分离dna时要使用金属离子螯合剂，如edta和柠檬酸钠等，其目的是 。 30 用乙醇沉淀dna时，通常要在dna溶液中加人单价的阳离子，如nacl和naac， 其目的是 。 31 引物在基因工程中至少有4个方面的用途：(1) (2) (3) (4) 。 32clark发现用taq dna聚合酶得到的pcr反应产物不是平末端，而是有一个突出 碱基末端的双链dna分子。根据这一发现设计了克隆pcr产物的 。 33在cdna的合成中要用到s1核酸酶，其作用是切除在 。 34乙醇沉淀dna的原理是 。 35 假定克
6、隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件： (1)_ (2)_ (3)_。 36 受体细胞的感受态是_。 37 dna重组连接的方法大致分为四种：(1)_(2)_ (3)_(4)_。 38 将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个_，各种此类质 粒的集合体称之为构建了一个_。 39将含有一个mrna的dna拷贝的克隆称作一个_，源于同一批rna制备 物的克隆群则构建了一个_。 40只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用_可以将这段dna 进行百万倍的扩增。 41人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为_时吸附dna, _时摄人dna。 42目前，在重组体的筛选中，已经
7、发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。 大致可以分为： (1)_(2)_(3)_ (4)_等。 43pcr扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于_。 44 核酸杂交探针可分为两大类： dna探针和rna探针。其中dna探针又分为_ 探针和_探针。 45如果用限制性内切核酸酶切割双链dna产生5?突出的黏性末端，则可以用_进行3?末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割dna产生的是3?突出的黏性末端，可以用_进行3?末端标记。 46单链dna探针的标记可以采用下列方法：(1)_ (2)_(3)_。 47根据northern杂交的结果可以说明：_。 48差示杂交(differentia
8、l hybridization)技术需要_。 49rna分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜) 上，同一放射dna探针杂交的技术称_。 50在_技术中，dna限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的dna探针杂交。 51可用t4 dna聚合酶进行平末端的dna标记，因为这种酶具有_和_的活性。52根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素： (1)_ (2)_(3)_。 53northern印迹和southern印迹有两点根本的区别： (1)_ (2)_。 54放射免疫筛选的原理基于以下三点： (1)_ (2)_
9、 (3)_。 答案 170 2(1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达 3克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择 4限制性酶切图谱 5属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名 6(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积 7ecok；ecorl 8ggcc；异源同工酶 9 枯草杆菌蛋白酶；(1)5-3合成酶的活性；(2)3-5外切核酸酶 10碱性磷酸酶；5?端的磷酸基团 11 ca2+ 12 5-3合成； 3-5外切 13 dna聚合酶i：5一3外切核酸酶；5一3合成酶 14s1核酸酶切割；dna聚合酶补平 15核酸水解酶h；rna 16 质粒dna；病毒dna；质粒和病毒d
10、na杂合体 17 复制区： 含有复制起点；选择标记： 主要是抗性基因；克隆位点： 便于外源dna的插入 18 质粒消除(或治愈) 19， pmbl； pscl01；psf2124(r质粒) 20 1000kb；300kb 21. 严紧 22 pbr322和m13；pmbl；转座子 23 它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源dna的扩增；对某些噬菌体(如l噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽 24 没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记 25质粒；l噬菌体； 45 26 (1)分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记 27复制区； ig区 2
11、875105 29 螯合mg2+离子，抑制核酸酶的活性 30 中和dna分子的负电荷，增加dna分子间的凝聚力 31(1)合成探针；(2)合成cdna；(3)用于pcr反应；(4)进行序列分析 32t载体 33第二链合成时形成的发夹环? 34乙醇使dna分子脱水35(1)保持正确的可读框 (2)能够使其转录的启动子 (3)具有翻译的起始和终止信号 36接受外源dna的生理状态 37(1)黏性末端连接； (2)平末端连接； (3)同聚物接尾连接； (4)接头连接法 38 基因组dna克隆； 基因组dna文库 39cdna克隆；cdna文库 40聚合酶链式反应(pcr) 42(1)遗传学方法； (
12、2)物理筛选法； (3)核酸杂交法； (4)表达产物分析法 43插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选 44基因组dna；cdna 45klenow酶填补的方法；t4dna聚合酶 46(1)用m13噬菌体载体合成单链dna探针；(2)从mrna反转录合成单链cdna探针；(3)用不对称pcr合成单链dna探针 47外源基因是否进行了转录 48两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达一些基因，而 在另一个细胞群体中不能表达这些基因 49northern印迹 50southern印迹 515?3?合成酶；3? ?5?外切核酸酶 52(1)克隆的是完整的基因；(2)
13、使用的是表达载体；(3)不含内含子 53(1)印迹的对象不同：northern是rna，southern是dna；(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件 54(1)抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)同一个抗原可以同几种抗体结合； (3)抗体能够被标记 二、选择题(单选或多选) 1 因研究重组dna技术而获得诺贝尔奖的科学家是( ) akornberg wgilbert pberg bmcclintock 2 第一个作为重组dna载体的质粒是( )pbr322colelpscl01 pucl8 3 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。 由作用于同一dn
14、a序列的两种酶构成 这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对dna进行修饰 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 4型限制性内切核酸酶： ( ) 有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列 仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 限制性识别非甲基化的核苷酸序列有外切核酸酶和甲基化酶活性仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 5下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?( ) 限制酶是外切酶而不是内切酶 限制酶在特异序列(识别位点)对dna进行切割 同一种限制酶切割dna时留下的末端序列总是相同的 一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双
15、链dna，产生黏末端 一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链dna，产生平末端离的类酶是： ( )ecok hindhindecob 7在下列进行dna部分酶切的条件中，控制那一项最好?( ) 反应时间酶量反应体积酶反应的温度 8在下列试剂中，那一种可以螯合ca2+离子?( )edta 柠檬酸钠sds egta 9在下列工具酶中，那一种可以被egta抑制活性?( ) s1单链核酸酶末端转移酶碱性磷酸酶bal 31核酸酶 10限制性内切核酸酶可以特异性地识别： ( ) 双链dna的特定碱基对 特定的三联密码以上都正确 双链dna的特定碱基序列 11下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项
16、的是( )。sau3a i ecorihind iii sau 3a1 12限制性内切核酸酶的星号活性是指：( ) 在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。 切割速度大大加快识别序列与原来的完全不同 活性大大提高 13下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?( ) 甘油含量过高反应体系中含有有机溶剂 酶切反应时酶浓度过低 含有非mg2+的二价阳离子 14关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当 由作用于同一dna序列的两种酶构成【篇二：基因工程试题及答案】因工程原理课程试题与答案 一、名词解释 1、寄主的修饰现象 寄主本身的dna，由于在合成后通过甲基化酶的作用得以甲
17、基化，使dna得以修饰，从而免遭自身限制性酶的破坏。 、f细胞 以染色体外环双链质粒dna形式存在，同时还带有细菌色体基因或dna片段。这样的细胞叫f细胞。 、溶原周期 溶源周期是指在感染过程中没有产生出子代噬菌体颗粒，噬菌体dna是整合到寄主细胞dna上，成为它的一个组成部分。 、内含肽： 蛋白质剪接是从前体蛋白内切除intein，并将extein以肽键连接，产生成熟蛋白质的过程。从前体蛋白中切除的部分称为内含肽。 、cdna文库 cdna文库是将某种生物在某一时期所有的mrna经反转录后形成的互补dna( cdna)连接进某种载体而形成的克隆集合。 、转化 转化(transformatio
18、n)是指感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达质粒载体dna分子的生命过程。 、嵌套引物 利用第一轮pcr扩增产物作为第二轮pcr扩增的起始材料(dna)，同时除使用第一轮的一对特异引物之外，另加一至两个同模板dna结合位点是处在头两个引物之间的新引物 、非融合蛋白 不与细菌的任何蛋白或多肽融合在一起的外源表达蛋白称为非融合蛋白。 、酵母的复制型载体 yrp型载体是酵母的dna片段插入到大肠杆菌质粒中构成的。其中酵母dna片段不但提供了选择标记，还携带来自酵母染色体dna的自主复制顺序(ars)。因为它同时含有大肠杆菌和酵母的自主复制基因，所以能在两种细胞中存在和复制。 10、rapd：随机引物扩增多
19、态性，是用随机引物扩增基因组dna，从中寻找扩增片段有差异。 11、基因组文库 将某种生物的全部基因组dna切割成一定长度的dna片段. b.克隆到某种载体上而形成的集合 12、转染 感受态的大肠杆菌细胞 b.捕获和表达噬菌体dna分子的生命过程 13、简并引物 是一类由多种寡核苷酸组成的混合物. b. 彼此之间仅有一个或数个核苷酸的差异 14、融合蛋白 与细菌的蛋白或多肽融合在一起的表达蛋白称为融合蛋白 15、酵母的整合型载体 .大肠杆菌质粒和酵母的dna片段构成. b. 进入细胞后的yip质粒被整合到染色体上，并随染色体一起复制。 16、受纳细胞 病毒对细胞的感染，能产生具有感染性的病毒颗
20、粒。b.并使寄主细胞裂解 二、填空 1、目的基因获得的方法有:用机械或酶切的方法从基因组中获得基因、用逆转录酶以mrna为模板cdna、用化学合成的方法、从文库中筛选目的基因、用pcr获得目的基因。 2、pcr中计算引物tm的经验公式:tm=（g+c)?4 + (a+t)?2姓名： 学号： 加白纸1张3、与6个连续his连接在一起的融合蛋白能用ni+层析柱分离。 4、举出一种pcr产物的克隆载体:t载体 5、确定基因文库大小的公式nln(1p)/(1f) 6、为了利用 pcr 技术扩增下列染色体 dna 片段上的虚线部分，应选用的引物顺序是d。 i + ii i + iii i + iv ii
21、 + iii ii + iv 7 、请举出三种基因工程中所用的载体:质粒、噬菌体载体、柯斯质粒、动物病毒载体、植物载体(ti质粒)任选三。 8、举出两种哺乳动物基因转移的遗传选择标记有:胸苷激酶(tk)、二氢叶酸还原酶(dhfr)、新霉素(neo)、氯霉素乙酰转移酶(cat). 9、分离真核mrna是利用它的什么结构:poly(a) 10、请举出三种重组体克隆筛选的方法:遗传检测法、物理检测法、核酸杂交筛选法、免疫化学检测法 11、请举出四种将外源基因导入受体细胞的途径:转化、转染、感染、显微注射、电穿孔五选四 12、在基因工程中使用的原核生物启动子有:lac启动子、trp启动子、pl或pr启
22、动子、tac启动子任选三。 13、细菌的表达载体一般具有:启动子、sd序列、终止子、增强子 四种基本结构。 14、生物技术包括:基因工程、细胞工程、酶工程、微生物发酵工程、生化工程五个方面，其中基因工程占主导地位。 16、基因工程中所使用的酶有：核酸酶、连接酶、聚合酶和修饰酶四种，其中在载体酶切或基因组酶切过程中所使用的酶称为限制性内切酶 17、酵母中载体有：整合型(yip)、复制型(yrp)和附加型(yep) 17、举出一种实验室的物理安全级别：p1、p2、p3和p4选一 18、pcr中实际复性温度选择低于tm值：25度 19、puc中p代表：质粒 uc代表：单位 20、请说出基因组计划中两
23、种图谱的名称：遗传图谱 物理图谱 或est图谱 cdna图谱等，选二。 21、请举出一种大肠杆菌的表达载体：pkk223 或pet选一 22、基因工程中所使用的连接酶有：rna连接酶和dna连接酶。其中在dna连接时公司所生产的酶主要有：大肠杆菌连接酶和t4dna连接酶 23、与6个连续his连接在一起的融合蛋白能用ni+层析柱分离 三、问答题 (一) 亚磷酸三酯法合成dna的步骤？ 1、将所要合成的寡聚核苷酸链的3末端先以3-oh与一个不溶性载体，如多孔玻璃珠(cpg)连接。 2、然后依次从35的方向将核苷酸单体加上去，所使用的核苷酸单体的活性官能团都是经过保护的。其中5-oh用4，4二对甲
24、氧基三苯甲基(dmt)保护，3端的二异丙基亚磷酸酰上的磷酸的oh用甲基 3、脱三苯甲基保护基 加入znbr2或二氯乙酸，脱去4，4二对甲氧基三苯甲基，释放出与载体相连的寡聚核苷酸单体1上的5-oh。 4、缩合反应 在弱酸四唑的存在下，新加入带保护基的核苷酸单体2与单体1发生缩合反应，形成3，5-磷酸二酯键，其中，磷为3价，即形成了亚磷酸三酯中间产物。 5、盖帽反应 加入乙酸酐，使极少数尚未参加缩合反应的核苷酸单体1中的5-oh乙酰化，从而达到封闭的作用，终止其以后参加缩合反应的可能性，以减少发生合成错误的机会。 6、氧化反应 形成的35磷酸二酯键由于磷为3价，即亚磷酸酯，不稳定，能被酸或碱解离
25、。加入i2将其氧化，使之转化为磷酸三酯，其中磷为5价。 7、如此经过多次循环，直到合成出具有所需序列长度的寡核苷酸后。 8、用苯硫酚脱去甲氧基保护基，再用浓氢氧化铵将dna片段与固相断开，使dna洗脱下来，最后除去氢氧化铵，在真空中抽干，样品即可溶于适量的水中进行分析。 9、所获得的dna片段长短不一，可以用聚丙烯酰胺凝胶电泳或液相色谱进行纯化，收集相对分子质量最大的部分进行序列分析即可。 （二）如何构建基因组文库？ 1、用适当的方法将某一种生物细胞的整个基因组dna切割成大小合适的片段. 2、并将这些片段与适当的载体进行体外重组； 3、再引入到相应的宿主细胞中繁殖和扩增，从而形成含有重组dn
26、a分子的群体。 4、从理论上讲，这些重组子应包含有整个基因组dna序列，即包含了某种生物细胞的全部基因. （三）限制性长度片段多态性(rflp)的原理？ 1、限制性片段长度多态性标记(restriction fragment length polymorphism)， 简称rflp标记)。生物的基因组dna经某一种限制性内切酶完全酶解后，会产生分子量不同的dna. 2、通过琼脂糖凝胶电泳分离这些片段。 3、凡是可以引起酶解位点变异的突变，如点突变(新产生和去除酶切位点)和一段dna的重新组织(如插入和缺失造成酶切位点间的长度发生变化)等均可导致限制性等位片段的变化，从而产生rflp (四)杂交
27、选择的转译的原理 1、将克隆的dna结合到硝酸纤维素滤膜上. 2、再与未经分离纯化的mrna或细胞的总rna杂交。 3、漂洗滤膜,把杂交的mrna洗脱下来(即将mrna释放出来)。 4、最后，再用回收的mrna用无细胞翻译体系进行体外转译试验。 （五）高温dna聚合酶的种类及各自的特点，并各举出一例？ 1、第一类酶具有5-3方向的dna合成（聚合）性能，没有3-5方向的外切酶特性。如taq dna聚合酶及其突变体。这类酶合成延伸能力比其它dna聚合酶强，因为它不能纠正合成过程中出现的突变。 2、第二类和第一类酶类似，它有合成特性，没有3-5方向的外切酶活性，即不具备保真性能。不同的是它们能以r
28、na为模板，合成dna。也就是说它们具有逆转录功能。如tth dna聚合酶。 3、第三类酶具有第一类酶的dna聚合特性，不拥有第二类酶的逆转录功能，但是它们具有3-5方向的外切酶活性。如pfu dna聚合酶。正是酶本身具有的外切酶活性，pfu能够纠正dna扩增过程出现的错误，如点突变。不足之处是该类酶的dna延伸能力不及其它两类。 （六）画出puc18质粒载体的物理图谱和并说明它筛选重组子的原理 （七）图示ti质粒的组成 （每两个结构1分） （八）请从sv40病毒的特征、cos是如何获得的，以及如何将流感病毒血细胞凝集素(ha)基因克隆到病毒载体中等方面说明如何利用cos细胞及病毒的早期区域克
29、隆外源基因？ 组成 1、sv40病毒是一种小型的20面体的蛋白质颗粒，由三种病毒外壳蛋白质vpl、vp2和vp3构成，中间包装着一条环形的病毒基因组dna。 2、sv40病毒基因组表达的时间顺序是相当严格的。据此可将其区分为早期表达区和晚期表达区。 3、早期初级转录本加工成2种不同的早期mrna(多瘤病毒的早期初级转录本加工成3种不同的早期mrna)；这2种早期mrna分别编码大t抗原和小t抗原(即肿瘤蛋白质或抗原)。 4、而晚期的初级转录本加工成3种不同的晚期mrna。它们分别编码vpl、vp3和vp2病毒蛋白质。 cos细胞的获得 1、用复制起点有缺陷的sv40侵染猴细胞，这种病毒dna不
30、能自我复制，因此在细胞中存留的唯一途径是整合到猴细胞的染色体上。 2、sv40与染色体整合后，能继续产生大t抗原，这种具有大t抗原的猴细胞称cos细胞。 外源基因导入到病毒载体中 1、当正常sv40的早期区域用酶切下后，回收病毒载体。 2、将被流感病毒血细胞凝集素(ha)基因连接到酶切的病毒载体上。 3、将重组dna转染cos细胞，虽然这种含有ha基因的重组dna本身已不能产生大t抗原，但cos细胞中的大t抗原可以识别进入细胞的sv40复制起点，促使重组分子不断复制。重组分子上晚期基因编的蛋白质可以包装重组分子，使细胞裂解。新形成的病毒颗粒全部包含重组dna。 （九）基因工程中所使用的酶的类型
31、，它们的作用是什么？并详细说明dna核酸酶的种类及作用特点？ 基因工程中所使用的酶的类型，它们的作用是什么？ 1、核酸酶：用于切割或核酸分子，如dna酶和rnase。 2、连接酶：用于反核酸分子连接到一起。 3、聚合酶：用于核酸分子的扩增或拷贝。 4、修饰酶：用于给核酸分子添加或减去某些化学基团可核苷酸。 dna核酸酶的种类及作用特点？ 1、dna链的核酸酶分为两大类：一类称为核酸外切酶，核酸外切酶就是从dna两端开始向内切割。 2、一类称为核酸内切酶，核酸内切酶就是从dna链的内部进行切割的酶。 3、核酸内切酶分为两类： 一类称为限制性内切酶，限制性内切酶是具有在特定的位点识别特定的dna序
32、列。 4、类型限制性内切酶识别的dna序列长约十几个苷酸或甲基化，可在离识别序列一端约1000bp的位置切割dna。类型它也可以识别特定的dna序列，它的切割dna位点往往在识别结合位点很相邻的位置上。 5、类型不但能识别特定的dna序列，而且识别的位置与切割的位置一致，它避免了酶切末端的不确定性和不可重复性，使dna分子重组成为可能。目前人们使用的限制性内切酶这一概念主要是指类型限制性内切酶。 6、另一类称为限制性内切酶。非限制性内切酶是指那些不识别特定dna序列进行切割的内切酶。【篇三：基因工程习题与答案】xt一、填空题 1 基因工程是_1970_年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2
33、基因工程的两个基本特点是： (1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达。 3 基因克隆中三个基本要点是：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择。 4 通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的_ 限制性酶切图谱。 5 限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自属名的第一个字母；第二、三两个字母取自种名的前两个字母；第四个字母则用 株名 表示。 6部分酶切可采取的措施有：(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积等。 7第一个分离的限制性内切核酸酶是ecok；而第一个
34、用于构建重组体的限制性内切核酸酶是ecorl。 8限制性内切核酸酶bsuri和hae的来源不同，但识别的序列都是ggcc，它们属于异源同工酶。 9dna聚合酶i的klenow大片段是用枯草杆菌蛋白酶切割dna聚合酶i得到的分子量为76kda的大片段，具有两种酶活性： (1)5-3合成酶的活性；(2)3-5外切核酸酶的活性。 10为了防止dna的自身环化，可用_碱性磷酸酶_去双链dna_ 5端的磷酸基团_。 11egta是_ ca2+_离子螯合剂。 12测序酶是修饰了的t7 dna聚合酶，它只有 5-3合成酶的活性，而没有3-5外切酶的活性。 13切口移位(nick translation)法标
35、记dna的基本原理在于利用dna聚合酶i的5一3合成酶和5一3合成酶的作用。 14欲将某一具有突出单链末端的双链dna分子转变成平末端的双链形式，通常可采用s1核酸酶切割或dna聚合酶补平。 15反转录酶除了催化dna的合成外，还具有核酸水解酶h的作用，可以将dna- rna杂种双链中的rna水解掉。 16基因工程中有3种主要类型的载体：质粒dna、病毒dna；质粒和病毒dna杂合体。17就克隆一个基因(dna片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：复制区： 含有复制起点；选择标记： 主要是抗性基因；克隆位点： 便于外源dna的插入。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 18 一
36、个带有质粒的细菌在有eb的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测 不出质粒，这种现象叫质粒消除(或治愈)。 19 pbr322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于pmbl，它的四环素抗性基 因来自于 pscl01，它的氨苄青霉素抗性基因来自于psf2124(r质粒)。 20yac的最大容载能力是1000kb，bac载体的最大容载能力是300kb。 21pscl01是一种严紧复制的质粒。 22pucl8质粒是目前使用较为广泛的载体。puc系列的载体是通过pbr322和m13两种质粒改造而来。它的复制子来自pmbl，amp抗性基因则是来自转座子。 23噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面
37、的原因：一是它在细菌中能够大量繁殖， 这样有利于外源dna的扩增； 二是对某些噬菌体(如?噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽。 24 野生型的m13不适合用作基因工程载体，主要原因是没有合适的限制性内切核酸酶识别位点和选择标记。 25 黏粒(cosmid)是质粒噬菌体杂合载体，它的复制子来自质粒、cos位点序列来自?噬 菌体，最大的克隆片段达到45kb。 26 野生型的?噬菌体dna不宜作为基因工程载体，原因是：(1)分子量大，(2)酶的多切点， (3)无选择标记。 27噬菌粒是由质粒和噬菌体dna共同构成的，其中来自质粒的主要结构是复制区，而来自噬
38、菌体的主要结构是ig区。 28?噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源dna片段后，总的长度应在噬菌体基 因组的75105的范围内。 29 在分离dna时要使用金属离子螯合剂，如edta和柠檬酸钠等，其目的是螯合mg2+离子，抑制核酸酶的活性 。 30 用乙醇沉淀dna时，通常要在dna溶液中加人单价的阳离子，如nacl和naac， 其目的是中和dna分子的负电荷，增加dna分子间的凝聚力。31 引物在基因工程中至少有4个方面的用途：(1)合成探针；(2)合成cdna；(3)用于pcr反应；(4)进行序列分析。 32clark发现用taq dna聚合酶得到的pcr反应产物不是平末端，而是有一个
39、突出 碱基末端的双链dna分子。根据这一发现设计了克隆pcr产物的t载体 33在cdna的合成中要用到s1核酸酶，其作用是切除在第二链合成时形成的发夹环。 34乙醇沉淀dna的原理是乙醇使dna分子脱水。 35 假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件： (1)保持正确的可读框 (2)能够使其转录的启动子 (3)具有翻译的起始和终止信号 36 受体细胞的感受态是接受外源dna的生理状态_。 37 dna重组连接的方法大致分为四种：(1)黏性末端连接； (2)平末端连接； (3)同聚物接尾连接； (4)接头连接法。 38 将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个基因
40、组dna克隆，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个基因组dna文库。 39将含有一个mrna的dna拷贝的克隆称作一个cdna克隆，源于同一批rna制备 物的克隆群则构建了一个cdna文库。 40只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用聚合酶链式反应(pcr)可以将这段dna 进行百万倍的扩增。 41人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为0?c时吸附dna, 42?c时摄人dna。 42目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。 大致可以分为：(1)遗传学方法； (2)物理筛选法； (3)核酸杂交法； (4)表达产物分析法等。 43pcr扩增筛选重组体是比较简
41、便的筛选方法，它适合于插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选。 44 核酸杂交探针可分为两大类： dna探针和rna探针。其中dna探针又分为基因组dna 探针和cdna探针。45如果用限制性内切核酸酶切割双链dna产生5突出的黏性末端，则可以用klenow酶填补 的方法进行3末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割dna产生的是3突出的黏性末端，可以用t4dna聚合酶进行3末端标记。 46单链dna探针的标记可以采用下列方法：(1)用m13噬菌体载体合成单链dna探针；(2)从mrna反转录合成单链cdna探针；(3)用不对称pcr合成单链dna探针。 47根据northern杂交的结果可以说明：外源基因是否进行了转录。 48差示杂交(differential hybridization)技术需要两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达一些基因，而在另一个细胞群体中不能表达这些基因。 49rna分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜) 上，同一放射dna探针杂交的技术称northern印迹。 50在southern印迹技术中，dna限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或 尼龙膜)上，然后与放射性的dna探针杂交。 51可用t4 dna聚合酶进行平