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1、一、 名词解释1、 基因治疗：是将目的基因放进特定载体中导入靶细胞或组织，通过替换或补偿引起疾病的基因，或者关闭或抑制异常表达的基因来克服疾病的治疗方法。2、 反义核酸：是指能与特定mRNA 精确互补、特异阻断其翻译的RNA或 DNA分子。3、 反义 DNA ：也称反义寡核苷酸或反义脱氧寡核苷酸，是一种人工合成的、能与mRNA 互补的、用于抑制翻译的短小反义核酸分子。4、 同尾酶：指切割DNA可产生相同的黏性末端的限制酶5、 转导：指以噬菌体为载体，在细菌之间转移DNA的过程，有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞 DNA的过程。6、 - 互补：指半乳糖苷酶的两个无活性片段组合而成
2、为功能完整的酶的过程。7、 转化：指将质粒或其他外源DNA导入处于感受态的宿主细胞，并使其获得新的表型的过程。8、 基因克隆：通过体外重组技术，将一段目的DNA经切割、连接插入适当载体，并导入受体细胞，扩增形成大量子代分子的过程。9、 核酶：是一类具有催化活性的RNA分子，具有核苷酸水解活性，可特异性剪切RNA分子，相当于RNA酶。10、位点偏爱：某些限制酶对同一底物中的有些位点表现出偏爱性切割，即对不同位置的同一识别序列表现出不同的切割效率，这种现象称作为位点偏爱。二、选择1. 在( B )诱导下，目的蛋白与lacZ 就会以融合蛋白的形式表达出来。A. dNTP C. DMSO 2. （ A
3、 ）可使表达蛋白避免被细胞内蛋白降解，或使表达的蛋白正确折叠，从而达到维护目的蛋白的目的。A . 分 泌 表 达 载 体融 合 表 达 载 体C.组 氨 酸 标 签 表 达 载 体D . 内 含 肽 表 达 载 体的琼脂糖凝胶电泳方向为（ B ）A.正 极 向 负 极B.负 极 向 正 极C 浓 度 高 向 浓 度 低 .D.浓 度 低 向 浓 度 高4. 影响脉冲场凝胶电泳电泳分辨率的最关键因素是（D ）A. 电 场 强 度B.缓 冲 液 浓 度C.温 度D. 脉 冲 时 间5. 控制潜在 RNA酶活性最重要的是（C）A. 使 用RNA 酶 抑 制 剂B. 实 验 用 具C. 细 致 谨 慎
4、 的 操 作D. 温 度 控 制6. 酵母基因表达系统的宿主不具有以下哪一条件(B )A. 安 全 无 毒B. 载 体DNA 转 化 频 率 低C.发 酵 周 期 短D. 蛋 白 质 分 泌 能 力 好7. 酿酒酵母的附加体形表达载体有（D）的缺点A. 蛋 白 分 泌 能 力 差B. 无 终 止 子C. 不 能 独 立 复 制D. 无 选 择 压 力 时 不 稳 定8. （C）不能用大肠杆菌表达系统来生产。A.胰岛素 B. 干扰素 D.赛若金9. 中国学者从人脐血白细胞中获得的（B ）基因已用于我国第一个基因工程干扰素的生产。精品资料 - - - 欢迎下载 - - - - - - - - -
5、- - 欢迎下载 名师归纳 - - - - - - - - - -第 1 页，共 4 页 - - - - - - - - - - A.胰岛素 B. 干扰素 -1b 10. 下列哪项不属于反义核酸药物(D )A.反义 DNA B. 核酶 C.肽核酸答案： BABDC BDCBD型限制与修饰系统的酶分子是（B）A.内切酶与甲基化酶分子在一起 B.三亚基双功能酶C . 二亚基双功能酶 D.四亚基双功能酶12. 限制性内切酶的命名遵循的一定原则（D）A种名 B. 菌株号 C . 属名 D.种名，菌株号或生物型13. 大肠杆菌DNA聚合酶 I 型 5 3外切核酸酶活性的反应底物是（C）A.单链 DNA及
6、引物突出的双链DNA C.双链 DNA或 DNA:RNA 杂交体 D.带 3 OH的双链 DNA或单链 DNA14提高酶连接效率的方法（C）A.加大酶量 20 倍 B.降低温度C.加大平头末端的底物浓度 D.降低平头末端的底物浓度15. 碱性磷酸酶CIAP指（ D）A.细菌和虾的细菌碱性磷酸酶 B.虾碱性磷酸酶C.细菌碱性磷酸酶 D.牛小肠碱性磷酸酶16. 为了突出3末端可采用的方法（A）AT4DNAPOL 切平，然后平头连接补平，然后平头连接CS1 核酸酶切平，然后平头连接补平，或S1 核酸酶切平17. 能使 X gal 变蓝的条件是（C）A.有片段 B. 受体片段C.同时具有片段和受体片段
7、 D.同时具有片段和受体片段18. 当基因组DNA长度为野生型入噬菌体基因组多少时，不会明显影响存活能力（C）9078105以上19 质粒 PSC101带有何种抗性基因（B）A.卡那霉素抗性基因 B.四环素抗性基因 C.青霉素抗性基因 D.链霉素抗性基因20. 宿主为 rec+，可在噬菌体溶源性细菌中鉴别重组合非重组入噬菌体的条件为（C）精品资料 - - - 欢迎下载 - - - - - - - - - - - 欢迎下载 名师归纳 - - - - - - - - - -第 2 页，共 4 页 - - - - - - - - - - game 基因存在 game 基因缺失，无chi 位点 gam
8、e 基因缺失或替换，且有chi 位点 game基因存在且无chi 位点三、判断1. 酶切反应的反应温度大多数为37对连接酶只连接双链DNA分子，不需要 ATP 。错3. 同一质粒尽管分子量不同，不同的构型电泳迁移率不同，其中ocDNA最快， scDNA最慢。错4 酵 母DNA 的 原 生 质 体 转 化 法 操 作 简 便 ， 容 易 掌 握 ， 但 转 化 率 不 稳 定 ， 成 本 较 高 。错5. 同尾酶的黏性末端互相结合后形成的新位点，一般不能再被原来的酶识别。对6. 在蓝白斑筛选中，只有同时存在片段和受体片段才能使Xgal 变蓝。对7. 基因组大小分左臂，中段，右臂三部分。对基因的表
9、达抑制噬菌体进入溶源状态。错位点是一段与重组事件相关联的10bpDNA序列，它激活以rec 为媒介的交换反应。错的琼脂糖凝胶电泳实验中，RNA分析是在变性的条件下进行的，常用的变性剂为乙醛。错四、简答一 简述载体应具备的特征P391 在宿主细胞内必须能够自主复制（具备复制原点）；2 必须具备合适的酶切位点，供外源DNA片段插入，同时不影响其复制；3 有一定的选择标记，用于筛选；4 最好有较高的拷贝数，便于载体的制备。二 简述构建质粒载体的基本策略和构建过程P43（一）基本策略1 能在受体细胞内有效的复制；2 必须含有允许外源DNA片段克隆的位点，切尽可能的多；3 含有供选择克隆子的标记基因；4
10、 载体 DNA分子尽可能小。（二）构建过程1 选择合适的出发质粒（亲本质粒）；2 正确获得构建质粒克隆载体的元件；3 选择合适的选择标记基因；4 在能达到预期目的的前提下，过程力求简单。三 大肠杆菌表达载体的表达形式和优缺点P871 包涵体蛋白，没有生物学活性、易于分离纯化、不会被细胞内蛋白的降解作用、不会伤害宿主细胞；2 融合蛋白，稳定性大大增加、较高效率、易于分离纯化、一般受体蛋白位于N端外源蛋白位于表面；3 分泌型外源蛋白，更易于分离纯化、需在N端加入信号肽序列、减少外源蛋白在细胞内被蛋白酶降解的概率。四 简述能够发展成基因表达系统的宿主应具备的条件P2791 安全无毒，不致病；2 遗传
11、背景清楚，容易进行遗传操作；3 构建的载体DNA容易进入，转化频率较高；4 发酵周期短，培养条件简单，容易进行高密度发酵；5 蛋白质分泌能力良好；6 有类似高等真核生物的蛋白质翻译后的修饰功能。五 酵母基因工程的优点（至少5 点） P275精品资料 - - - 欢迎下载 - - - - - - - - - - - 欢迎下载 名师归纳 - - - - - - - - - -第 3 页，共 4 页 - - - - - - - - - - 1 酵母是真核生物，大多具有较高的安全性，如酿酒酵母可作为单细胞蛋白直接添加于饲料中;2 酵母繁殖速度快，能够向细菌一样在廉价的培养基上高密度培养，因此能大规模生
12、产，具有降低基因工程产品成本的潜力；3 将原核生物中已知的分子和基因操作技术与真核生物中复杂的转译后修饰能力相结合，能方便的用于外源基因的操作；4 作为真核生物，提供了翻译后加工和分泌的环境，使得产物与天然蛋白一样或类似；5 不会形成不溶性的重组蛋白包涵体易于进行分离提纯。五、论述裂解提取法大肠杆菌质粒DNA的过程和几种纯化质粒的方法 P101过程 ：1 用溶液将细胞悬浮50mmol/L 的葡萄糖具有维持渗透压的作用，悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管底；2 加入 2 倍于溶液体积的溶液，该溶液含有NaOH /SDS ，能够使细胞迅速破裂溶解，使悬浮液变成完全完全澄清的液体。到染色体DNA和蛋白质变性，溶液中形成的大型复合物被SDS包被；3 加入倍于溶液体积的溶液，溶液含有醋酸钾缓冲液，中和NaOH ，防止长时间碱性条件会打断DNA ，使复合物PDS从溶液中沉淀下来。4 取上清液离心制取粗产品( 质粒 DNA),再用 2 倍体积的乙醇沉淀，获得质粒DNA样品（可用RNase A去除 RNA ，用苯酚 / 氯仿抽离蛋白） 。方法 ：1、PEG纯化质粒2、氯化铯 -溴化乙锭梯度平衡精品资料 - - - 欢迎下载 - - - - - - - - - - - 欢迎下载 名师归纳 - - - - - - - - - -第 4 页，共 4 页 - - - - - - - - - -