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1、第七章第七章 黄酮类化合物黄酮类化合物(2)(2)FlavonoidFlavonoids s-黄酮类的提取和分离黄酮类的提取和分离黄酮类的提取和分离黄酮类的提取和分离1第七章第七章 黄酮类化合物黄酮类化合物概概概概 述述述述1黄酮类化合物的结构和分类黄酮类化合物的结构和分类黄酮类化合物的结构和分类黄酮类化合物的结构和分类2黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质3黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离4黄酮类化合物的检识和结构鉴定黄酮类化合物的检识和结构鉴定黄酮类化合物的检识和结构鉴定黄酮
2、类化合物的检识和结构鉴定52黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离原理原理原理原理：黄酮类化合物的黄酮类化合物的溶解性溶解性溶解性溶解性和和酸性酸性酸性酸性 相似相溶与酸碱理论相似相溶与酸碱理论提取提取提取提取：苷元苷元：极性小的溶剂，如氯仿、乙醚、乙酸乙酯等极性小的溶剂，如氯仿、乙醚、乙酸乙酯等 回流提取回流提取苷及极性大的苷元苷及极性大的苷元：用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇-水加热提取水加热提取 极性稍大的甙元一般指：羟基黄酮、双黄酮、极性稍大的甙元一般指：羟基黄酮、双黄酮、橙酮、查尔橙酮、查尔酮酮多糖苷类多糖苷类：一般用沸水提取：一般用沸水提取
3、 提取提取3黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离溶剂萃取法（系统分离法）溶剂萃取法（系统分离法）碱提酸沉法碱提酸沉法炭粉吸附法炭粉吸附法 粗分粗分4黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离药药药药 材材材材水或醇-水，加热提取提取液提取液提取液提取液浓缩，加3-4倍醇醇水液醇水液醇水液醇水液沉淀（水杂）沉淀（水杂）沉淀（水杂）沉淀（水杂）浓缩，回收醇，加水水水水水 液液液液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取石油醚层石油醚层石油醚层石油醚层氯仿层氯仿层氯仿层氯仿层乙酸乙酯层乙酸乙酯层乙酸乙酯层乙酸乙酯层正丁醇层正丁醇层正丁醇层正丁醇层水层水层水层水层叶绿素等脂叶绿素等脂
4、叶绿素等脂叶绿素等脂溶性成分溶性成分溶性成分溶性成分黄酮苷元黄酮苷元黄酮苷元黄酮苷元大极性苷元大极性苷元大极性苷元大极性苷元小极性的苷小极性的苷小极性的苷小极性的苷黄酮苷黄酮苷黄酮苷黄酮苷多糖多糖多糖多糖蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质原理：原理：原理：原理：利用黄酮类与其它杂质极性利用黄酮类与其它杂质极性利用黄酮类与其它杂质极性利用黄酮类与其它杂质极性不同，选不同溶剂进行萃取不同，选不同溶剂进行萃取不同，选不同溶剂进行萃取不同，选不同溶剂进行萃取溶剂萃取法溶剂萃取法5黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离原理原理原理原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析
5、出：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出碱碱碱碱：常用常用常用常用Ca(OH)Ca(OH)Ca(OH)Ca(OH)2 2 2 2，即石灰乳，即石灰乳，即石灰乳，即石灰乳(石灰水石灰水石灰水石灰水)优点优点优点优点 A A A A：使含酚羟基化合物成盐溶解：使含酚羟基化合物成盐溶解：使含酚羟基化合物成盐溶解：使含酚羟基化合物成盐溶解 B B B B：使含羧基杂质（果胶、粘液质、蛋白质等）：使含羧基杂质（果胶、粘液质、蛋白质等）：使含羧基杂质（果胶、粘液质、蛋白质等）：使含羧基杂质（果胶、粘液质、蛋白质等）形成沉淀形成沉淀形成沉淀形成沉淀注意注意注意注意 a a
6、a a：提取时，碱液浓度不宜过高。提取时，碱液浓度不宜过高。提取时，碱液浓度不宜过高。提取时，碱液浓度不宜过高。b b b b：加酸酸化时，酸性也不宜过强。：加酸酸化时，酸性也不宜过强。：加酸酸化时，酸性也不宜过强。：加酸酸化时，酸性也不宜过强。应用应用应用应用：芦丁和槲皮素的提取、分离和鉴定芦丁和槲皮素的提取、分离和鉴定芦丁和槲皮素的提取、分离和鉴定芦丁和槲皮素的提取、分离和鉴定碱提酸沉法碱提酸沉法碱提酸沉法碱提酸沉法6黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离原理原理：活性炭吸附黄酮苷类化合物活性炭吸附黄酮苷类化合物活性炭吸附黄酮苷类化合物活性炭吸附黄酮苷类化合物用途用途：主要用于含
7、量较高的黄酮苷类的精制主要用于含量较高的黄酮苷类的精制操作操作：植物的甲醇提取物中，分次加入活性炭，植物的甲醇提取物中，分次加入活性炭，搅拌，静置，定性检查上清液无黄酮反应时为止。搅拌，静置，定性检查上清液无黄酮反应时为止。过滤，收集活性炭，依次用过滤，收集活性炭，依次用沸水、沸甲醇、沸水、沸甲醇、7%7%酚酚/水、水、15%15%酚酚/醇溶剂进行梯度洗脱醇溶剂进行梯度洗脱，对各部分洗脱液进行定 性检查。大部分黄酮苷类可以用大部分黄酮苷类可以用7%酚酚/水洗下水洗下。活性炭吸附法活性炭吸附法7黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离分离方法分离方法8黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物
8、的提取和分离硅胶是一种高活性吸附材料，其化学分子式为硅胶是一种高活性吸附材料，其化学分子式为mSiOmSiO2 2nHnH2 2O O 应用范围：主要分离小极性和中等极性小极性和中等极性的化合物，应用最为广泛。异黄酮、二氢黄酮（醇）、高度甲基化（乙酰化）的黄酮及黄酮醇 多羟基黄酮、黄酮醇及其苷类：硅胶加水去活化吸附规律吸附规律：极性大吸附能力强极性大吸附能力强e g e g ：A 苷元 B 二糖苷 C 单糖苷 Rf：A C B硅胶柱色谱硅胶柱色谱9黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离原理原理：氢键吸附（作用）洗脱规律洗脱规律：（先后）母核上羟基增加，洗脱顺序递减羟基数目相同时，有缔
9、合羟基 无缔合羟基苷元相同：三糖苷 双糖苷 单糖苷 苷元 不同类型黄酮类化合物的洗脱先后顺序为：异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇。分子中芳香程度高、共轭双键多，则聚酰胺对其的吸附力强，故难于洗脱。应用范围应用范围：适合各种类型的黄酮类化合物，包括苷、苷元、查耳酮及二氢黄酮聚酰胺柱色谱聚酰胺柱色谱10聚酰胺聚酰胺“双重色谱双重色谱”原理原理 正相色谱正相色谱 反相色谱反相色谱苷与苷元聚苷与苷元聚苷与苷元聚苷与苷元聚酰胺色谱酰胺色谱酰胺色谱酰胺色谱聚酰胺：聚酰胺：聚酰胺：聚酰胺：极性固定相（极性酰胺基团）极性固定相（极性酰胺基团）极性固定相（极性酰胺基团）极性固定相（极性酰胺基团）非极性固定相（非极性脂
10、肪链）非极性固定相（非极性脂肪链）非极性固定相（非极性脂肪链）非极性固定相（非极性脂肪链）洗脱剂：洗脱剂：洗脱剂：洗脱剂：有机溶剂（氯仿有机溶剂（氯仿有机溶剂（氯仿有机溶剂（氯仿-甲醇，极性小）甲醇，极性小）甲醇，极性小）甲醇，极性小）含水溶剂（甲醇含水溶剂（甲醇含水溶剂（甲醇含水溶剂（甲醇-水，极性大）水，极性大）水，极性大）水，极性大）先洗脱：先洗脱：先洗脱：先洗脱：游离黄酮（苷元，极性小）游离黄酮（苷元，极性小）游离黄酮（苷元，极性小）游离黄酮（苷元，极性小）苷（极性大）（柱色谱分离）苷（极性大）（柱色谱分离）苷（极性大）（柱色谱分离）苷（极性大）（柱色谱分离）R R R Rf f f
11、f值：值：值：值：苷元苷元苷元苷元 苷苷苷苷 苷元苷元苷元苷元 流动相（醇）极性时为正相聚酰胺 固定相（聚酰胺脂肪链）极性 流动相（醇水）极性时为反相槲皮素对照品槲皮素对照品槲皮素对照品槲皮素对照品槲皮素槲皮素槲皮素槲皮素芦丁芦丁芦丁芦丁芦丁对照品芦丁对照品芦丁对照品芦丁对照品槲皮素对照品槲皮素对照品槲皮素对照品槲皮素对照品槲皮素槲皮素槲皮素槲皮素芦丁芦丁芦丁芦丁芦丁对照品芦丁对照品芦丁对照品芦丁对照品12黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离常用型号常用型号：Sephadex-G和Sephadex-LH20原理原理：吸附作用和分子筛 对游离黄酮游离黄酮，主要是吸附作用吸附作用,吸附
12、程度取决于游离酚羟基的数目，苷元的羟基数目越多，越难洗脱。对黄酮苷黄酮苷，主要是分子筛原理分子筛原理,洗脱时按分子量由大到小先后洗脱下来。常用洗脱剂常用洗脱剂：碱性水溶液（0.1mol/L NH4OH），盐水溶液(0.05mol/L NaCl)醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水，乙醇等。其它溶剂：含水丙酮、甲醇-氯仿(凝胶会膨胀，体积变大)。葡聚糖凝胶柱色谱葡聚糖凝胶柱色谱葡聚糖凝胶柱色谱葡聚糖凝胶柱色谱13黄酮类化合物在黄酮类化合物在Sephadex-LHSephadex-LH2020(甲醇甲醇)上的上的Ve/VoVe/Vo黄酮类化合物黄酮类化合物黄酮类化合物黄酮类化合物取取取取 代代代代 情情情
13、情 况况况况Ve/VoVe/Vo芹菜素芹菜素芹菜素芹菜素5,7,45,7,4三三三三OHOH5.35.3木犀草素木犀草素木犀草素木犀草素5,7,3,45,7,3,4四四四四OHOH6.36.3槲皮素槲皮素槲皮素槲皮素3,5,7,3,43,5,7,3,4五五五五OHOH8.38.3杨梅素杨梅素杨梅素杨梅素3,5,7,3,4,53,5,7,3,4,5六六六六OHOH9.29.2山奈酚山奈酚山奈酚山奈酚-3-3-半乳糖鼠李糖半乳糖鼠李糖半乳糖鼠李糖半乳糖鼠李糖-7-7-鼠鼠鼠鼠李糖苷李糖苷李糖苷李糖苷三三三三糖苷糖苷糖苷糖苷3.33.3槲皮素槲皮素槲皮素槲皮素-3-3-芸香糖苷芸香糖苷芸香糖苷芸香糖
14、苷双双双双糖苷糖苷糖苷糖苷4.04.0槲皮素槲皮素槲皮素槲皮素-3-3-鼠李糖苷鼠李糖苷鼠李糖苷鼠李糖苷单单单单糖苷糖苷糖苷糖苷4.94.914黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离规律：苷元的羟基数越多，Ve/Vo越大，越难以洗脱。吸附作用苷的分子量越大,其上联结糖的数目越多,Ve/Vo 越小,容易洗脱。分子筛原理苷比苷元先洗脱。葡聚糖凝胶柱色谱葡聚糖凝胶柱色谱葡聚糖凝胶柱色谱葡聚糖凝胶柱色谱15黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离原理：原理：黄酮类化合物具有酸性、且不同数目和不同位置的黄酮类化合物具有酸性、且不同数目和不同位置的酚羟基的酸性强弱不同酚羟基的酸性强弱不同
15、适用范围：适用范围：适用于分离酸性强弱不同的黄酮苷元适用于分离酸性强弱不同的黄酮苷元酸性：酸性：7,4-OH 7-或或4-OH 一般酚一般酚OH5-OH溶于溶于5%NaHCO3溶于溶于5%NaCO3溶于不同浓度溶于不同浓度NaOH梯度梯度pH萃取法萃取法16黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液（脂杂）（脂杂）（脂杂）（脂杂）乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液碱液碱液碱液碱液(3(3(3(3或或或或5-OH5-OH5-OH5-OH黄酮黄酮黄酮黄酮)碱液碱液碱液碱液(一般酚一般酚一般酚一般酚OHOHO
16、HOH黄酮黄酮黄酮黄酮)碱液碱液碱液碱液(7,4-(7,4-(7,4-(7,4-二二二二OHOHOHOH黄酮黄酮黄酮黄酮)碱液碱液碱液碱液(7(7(7(7或或或或4-OH4-OH4-OH4-OH黄酮黄酮黄酮黄酮)5%NaHCO5%NaHCO5%NaHCO5%NaHCO3 3 3 35%Na5%Na5%Na5%Na2 2 2 2COCOCOCO3 3 3 30.2%NaOH0.2%NaOH0.2%NaOH0.2%NaOH4%NaOH4%NaOH4%NaOH4%NaOH梯度梯度梯度梯度pHpH萃取法萃取法萃取法萃取法17黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离原理：原理：利用分子中某些特定
17、官能团性质进行分离利用分子中某些特定官能团性质进行分离 具有邻二酚羟基的成分，用具有邻二酚羟基的成分，用醋酸铅醋酸铅沉淀沉淀 不具有邻二酚羟基的成分，用不具有邻二酚羟基的成分，用碱式醋酸铅碱式醋酸铅沉淀沉淀 具有具有邻二酚羟基邻二酚羟基的黄酮类化合物还可以与硼酸反应形成的黄酮类化合物还可以与硼酸反应形成溶于水的硼酸络合物，可以与不具有邻二酚羟基的其它溶于水的硼酸络合物，可以与不具有邻二酚羟基的其它黄酮类化合物分离黄酮类化合物分离金属盐络合法金属盐络合法18从柠檬果皮中分离降血压有效成分从柠檬果皮中分离降血压有效成分从柠檬果皮中分离降血压有效成分从柠檬果皮中分离降血压有效成分目的：使要得到的目的
18、：使要得到的目的：使要得到的目的：使要得到的化合物溶解，而使化合物溶解，而使化合物溶解，而使化合物溶解，而使蛋白质、黏液质等蛋白质、黏液质等蛋白质、黏液质等蛋白质、黏液质等大极性成分形成沉大极性成分形成沉大极性成分形成沉大极性成分形成沉淀除去淀除去淀除去淀除去 提取分离实例提取分离实例提取分离实例提取分离实例1 119从柠檬果皮中分离降血压有效成分从柠檬果皮中分离降血压有效成分从柠檬果皮中分离降血压有效成分从柠檬果皮中分离降血压有效成分溶剂萃取法溶剂萃取法溶剂萃取法溶剂萃取法铅盐沉淀法铅盐沉淀法铅盐沉淀法铅盐沉淀法凝胶色谱法凝胶色谱法凝胶色谱法凝胶色谱法硅胶色谱法硅胶色谱法硅胶色谱法硅胶色谱法
19、目的：目的：目的：目的：除去除去除去除去PbPbPbPb，生成，生成，生成，生成PbCOPbCOPbCOPbCO3 3 3 3 提取分离实例提取分离实例提取分离实例提取分离实例1 120提取分离实例提取分离实例提取分离实例提取分离实例1 1从柠檬果皮中分离降血压有效成分从柠檬果皮中分离降血压有效成分从柠檬果皮中分离降血压有效成分从柠檬果皮中分离降血压有效成分21提取分离实例提取分离实例提取分离实例提取分离实例1 1从柠檬果皮中分离降血压有效成分从柠檬果皮中分离降血压有效成分从柠檬果皮中分离降血压有效成分从柠檬果皮中分离降血压有效成分22满山红化学成分的提取分离满山红化学成分的提取分离 提取分离实例提取分离实例提取分离实例提取分离实例2 223去除鞣质等去除鞣质等去除鞣质等去除鞣质等减少杂质减少杂质减少杂质减少杂质满山红化学成分的提取分离满山红化学成分的提取分离 提取分离实例提取分离实例提取分离实例提取分离实例2 224