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1、关于分子荧光法第一页，本课件共有43页按电磁辐射的作用对象分按电磁辐射的作用对象分：原子光谱原子光谱 分子光谱分子光谱光谱法光谱法：按电磁辐射的能级跃迁方向分按电磁辐射的能级跃迁方向分：吸收光谱法吸收光谱法（从基态跃迁到激发态）（从基态跃迁到激发态）发射光谱法发射光谱法（激发态跃迁回基态）（激发态跃迁回基态）紫外及可见分光光度法：紫外及可见分光光度法：分子吸收光谱法分子吸收光谱法分子荧光分析法：分子荧光分析法：分子发射光谱法分子发射光谱法发光分析法发光分析法第二页，本课件共有43页第一节第一节 概述概述 物质分子吸收了物质分子吸收了一定能量一定能量后后,其电子由基态跃迁至激发态其电子由基态跃迁
2、至激发态,当激当激发态分子以辐射形式将其能量释放返回基态时发态分子以辐射形式将其能量释放返回基态时,便产生分子发光。根便产生分子发光。根据这种现象建立的分析方法称为据这种现象建立的分析方法称为发光分析法发光分析法。根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理不同分为以下几类：根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理不同分为以下几类：光致发光：以光致发光：以光源光源来激发而发光来激发而发光 电致发光：以电致发光：以电能电能来激发而发光来激发而发光 生物发光：以生物发光：以生物体释放的能量生物体释放的能量激发而发光激发而发光 化学发光：以化学发光：以化学反应能化学反应能激发而发光激发而发光发射发射第三页，
3、本课件共有43页光致发光包括光致发光包括荧光荧光和和磷光磷光荧光包括荧光包括分子荧光分子荧光和和原子荧光原子荧光分子荧光分析法：根据物质的分子吸收光能后发射出的荧光光谱的特征和强度，对物质进行定性和定量的分析方法。优点：灵敏度高，比紫外可见光谱法高灵敏度高，比紫外可见光谱法高2-42-4个数量个数量 级；级；选择性好。选择性好。缺点：应用范围小。第四页，本课件共有43页第二节第二节 基本原理基本原理一、分子荧光的发生过程一、分子荧光的发生过程总自旋量子数：分子的多重性：M=2S+1S=0，M=1S=1，M=3基态分子中，电子按能量最低原理成对地排列于一定的轨道中分子内同一轨道中两个电子必须有相
4、反的自旋方向，即自旋量子数分别为1/2和-1/2.第五页，本课件共有43页 电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁(发光)和无辐射跃迁等方式失去能量，称为去激发过程。传递途径传递途径辐射跃迁辐射跃迁荧光荧光振动弛豫振动弛豫无辐射跃迁无辐射跃迁磷光磷光系间跨越系间跨越内转换内转换外转换外转换第六页，本课件共有43页非辐射能量传递过程振动弛豫(vibrational relexation)：各振动能级的分子通过与溶剂分子的碰撞而将部分振动能量传递给溶剂分子，其电子返回到同一电子能级的最低振动能级间的过程；发生振动弛豫的时间10-12s。内部转换(internal conversion
5、)：当两个电子激发态之间的能量相差较小以致其振动能级有重叠时，受激分子常由高电子能级以无辐射方式转移至低电子能级的过程。第七页，本课件共有43页 外部能量转换(external conversion)：激发分子与溶剂或其他溶质分子之间相互碰撞失去能量，并以热能的形式释放能量的过程。外转换使荧光或磷光减弱或“猝灭”。体系间跨越(intersystem crossing)：处于激发态分子的电子发生自旋反转而使分子的多重性发生变化的过程；分子由激发单重态通过体系间跨越到激发三重态。条件：激发态的振动能级有重叠时宜发生。第八页，本课件共有43页辐射能量传递过程辐射能量传递过程荧光发射：激发分子从第一激
6、发单重态的最低振动能级跃迁到基态各振动能级时所产生的光子辐射称为荧光；荧光辐射能要比激发能量低，荧光波长大于激发波长；荧光是相同多重态间的允许跃迁，产生速度快，荧光发射时间为10-9-10-7s。磷光发射：激发分子由第一激发三重态的最低振动能级跃迁到基态各振动能级时所产生的光子辐射称为磷光；磷光辐射能要比荧光辐射能量低，磷光波长大于荧光波长；磷光发射时间为10-4-10s。第九页，本课件共有43页荧光：荧光：10-710-9 s,第一激发单重态的最低振动能级第一激发单重态的最低振动能级基态；基态；磷光：磷光：10-410s；第一激发三重态的最低振动能级；第一激发三重态的最低振动能级基态；基态；
7、第十页，本课件共有43页二、激发光谱和荧光光谱二、激发光谱和荧光光谱激发光谱激发光谱（excitation spectrum）：固定荧光波长，：固定荧光波长，改变激发光波长，测定不同波改变激发光波长，测定不同波长光照射下荧光强度的变化，长光照射下荧光强度的变化，以激发波长为横坐标，荧光强以激发波长为横坐标，荧光强度为纵坐标，可得荧光物质的度为纵坐标，可得荧光物质的激发光谱。激发光谱。萘的激发光谱、荧光和磷光光谱注：相当于荧光物质的吸收光谱。激发荧光最灵敏波长（ex）是荧光强度最大所对应波长。第十一页，本课件共有43页荧光光谱（荧光光谱（fluorecence spectrum）：）：固定激发光
8、波固定激发光波长为最大激发波长长为最大激发波长，测定，测定不同荧光波长下的荧光强不同荧光波长下的荧光强度，以发射波长为横坐标，度，以发射波长为横坐标，荧光强度为纵坐标作图，荧光强度为纵坐标作图，得到荧光发射光谱。得到荧光发射光谱。最大荧光波长（em）：光谱上荧光强度最大的波长。萘的激发光谱、荧光和磷光光谱荧光物质的最大激发波长（荧光物质的最大激发波长（ex）和最大发射波长）和最大发射波长（em）是鉴定物质的根据；也是定量测定最为灵敏的条件。是鉴定物质的根据；也是定量测定最为灵敏的条件。第十二页，本课件共有43页荧光光谱的特征荧光光谱的特征1 1、荧光光谱与激发光波长无关、荧光光谱与激发光波长无
9、关 电子跃迁到不同激发态能级，但电子跃迁到不同激发态能级，但均回到第一激发单重均回到第一激发单重态的最低振动能级再跃迁回到基态态的最低振动能级再跃迁回到基态，从而荧光发射光，从而荧光发射光谱只有一个发射带，而且荧光光谱的形状与激发波长谱只有一个发射带，而且荧光光谱的形状与激发波长无关。无关。2 2、荧光波长比激发波长较长、荧光波长比激发波长较长:荧光发射能量以激发能量低，故荧光发射波长总荧光发射能量以激发能量低，故荧光发射波长总是大于激发光谱波长，这种现象又称红移。是大于激发光谱波长，这种现象又称红移。光谱图中，光谱图中，激发光谱激发光谱总是在总是在左左，发射光谱发射光谱总是在总是在右右。第十
10、三页，本课件共有43页3 3、激发光谱与荧光光谱呈现镜像对称关系、激发光谱与荧光光谱呈现镜像对称关系nm200280360440520020406080100Fab4b3b2b1b0c0c1c2c3c4V=0V=1V=2V=3V=4V=0V=1V=2V=3V=4b4b3b2b1b0c0c1c2c3c4E4E3E2E1E4E3E2E1蒽的激发光谱（虚线）蒽的激发光谱（虚线）荧光光谱（实线）荧光光谱（实线）蒽的能级跃迁蒽的能级跃迁第十四页，本课件共有43页三、荧光与物质的分子结构三、荧光与物质的分子结构荧光物质应具备的条件：荧光物质应具备的条件：1 1、分子具有强的吸收紫外可见辐射的结构（内因）、
11、分子具有强的吸收紫外可见辐射的结构（内因）2 2、具有较高的荧光效率、具有较高的荧光效率（一）荧光发射的量子产率（一）荧光发射的量子产率荧光效率与物质的分子结构和所处的化学环境荧光效率与物质的分子结构和所处的化学环境条件有关。条件有关。第十五页，本课件共有43页（二）分子结构与荧光（二）分子结构与荧光荧光物质的分子结构应具备如下特征：荧光物质的分子结构应具备如下特征：1.共轭结构（芳香族烃）205nm278nm286nm321nm356nm404nm0.110.290.36而且共轭度越大，荧光效率越大，荧光波长长移。而且共轭度越大，荧光效率越大，荧光波长长移。通常，具有通常，具有 *跃迁结构的
12、分子最容易产生荧光跃迁结构的分子最容易产生荧光第十六页，本课件共有43页2.分子的刚性 分子刚性越强，分子振动越少，与其它分子碰撞失活的机率下降，荧光效率提高。3.取代基对分子荧光的影响给电子基团如-NH2、-OH、-OCH3、-CN等，使荧光增强。吸电子基团如-COOH、-NO2、-C=O、-F、-Cl等会减弱甚至破坏荧光。=0.92，0.1M NaOH非荧光物质第十七页，本课件共有43页四、荧光强度与溶液浓度的关系四、荧光强度与溶液浓度的关系I0IF 溶液的荧光强度溶液的荧光强度F F与溶液吸收光的强度及荧光效率成与溶液吸收光的强度及荧光效率成正比正比第十八页，本课件共有43页(荧光定量分
13、析法的依据荧光定量分析法的依据)结论：对某一物质的稀溶液（A=abc0.05），在一定条件下，当激发光波长、强度和液层厚度固定时，物质发出的荧光强度与该溶液的浓度呈正比。第十九页，本课件共有43页五、影响荧光强度的外部因素五、影响荧光强度的外部因素（一）溶剂的影响（一）溶剂的影响1 1、荧光强度在一定范围内可随溶剂粘度的减小而减小。、荧光强度在一定范围内可随溶剂粘度的减小而减小。2 2、溶剂和荧光物质反应，会使荧光峰的波长和荧光、溶剂和荧光物质反应，会使荧光峰的波长和荧光强度改变。强度改变。3 3、随着溶剂的极性的增加，荧光物质的、随着溶剂的极性的增加，荧光物质的*跃跃迁几率增加，荧光强度将增
14、强，荧光波长也发生红移。迁几率增加，荧光强度将增强，荧光波长也发生红移。4 4、溶剂纯度。溶剂中有杂质会影响荧光光谱。、溶剂纯度。溶剂中有杂质会影响荧光光谱。第二十页，本课件共有43页（二）温度的影响（二）温度的影响温度增加，荧光效率和荧光强度下降。（三）酸度的影响（三）酸度的影响pH影响荧光物质的存在形式影响荧光物质的存在形式pH影响荧光配合物的组成影响荧光配合物的组成影响荧光配合物的组成影响荧光配合物的组成pH 34Ga3+邻二羟基偶氮苯邻二羟基偶氮苯1:11:1配合物配合物(产生荧光产生荧光)pH 67Ga3+邻二羟基偶氮苯邻二羟基偶氮苯1:21:2配合物配合物(不产生荧光不产生荧光)N
15、H3+OH-H+NH2NH-OH-H+无荧光无荧光无荧光无荧光pH 27 pH 13蓝色荧光蓝色荧光第二十一页，本课件共有43页（四）荧光猝灭（四）荧光猝灭 荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子的相互作用引起荧光强度降低或荧光强度不与浓度成线性关系的现象称为荧光猝灭。能引起荧光猝灭的物质叫能引起荧光猝灭的物质叫荧光熄灭剂荧光熄灭剂导致荧光熄灭的原因：碰撞猝灭碰撞猝灭 M+hM+hv vM*,M*+Q M*,M*+Q M+M+热热静态猝灭静态猝灭 M+Q M+Q MQ MQ 非荧光物质非荧光物质转入三重态的猝灭转入三重态的猝灭 引入碘、溴后，易发生体系间跨越引入碘、溴后，易发生体系间跨越荧光物质
16、的自猝灭荧光物质的自猝灭 荧光物质浓度较高荧光物质浓度较高内滤作用内滤作用 溶液中有其它物质吸收荧光物质的溶液中有其它物质吸收荧光物质的 激发光或发射光激发光或发射光第二十二页，本课件共有43页荧光猝灭法（fluorescence quenching method）：荧光物质加入某些猝灭剂后，其荧光强度的减少与荧光猝灭剂的浓度呈线性关系，可用于测定猝灭剂的含量。比直接荧光法更灵敏、更有选择性。第二十三页，本课件共有43页（五）散射光（五）散射光1.瑞利散射 光子与物质分子发生弹性碰撞，不发生能量交换，运动方向改变；瑞利光入射光2.拉曼散射 光子与物质分子发生非弹性碰撞，发生能量交换，运动方向改
17、变；拉曼光入射光3.丁铎尔散射 散射光对荧光测定有干扰，尤其是波长比入射光散射光对荧光测定有干扰，尤其是波长比入射光更长的更长的拉曼光拉曼光，因其波长与荧光波长接近，对荧光测定，因其波长与荧光波长接近，对荧光测定干扰更大，必须消除。干扰更大，必须消除。第二十四页，本课件共有43页第三节第三节 荧光分析仪器荧光分析仪器荧光分光光度计的主要部件：荧光分光光度计的主要部件：光源、激发单色器、光源、激发单色器、发射单色器、样品池、检测系统、显示系统。发射单色器、样品池、检测系统、显示系统。与分光光度计与分光光度计有两点不同：有两点不同：两个单色器两个单色器检测器与激发光检测器与激发光成直角成直角光源光
18、源激发单色器激发单色器样品池样品池发发射射单单色色器器检测器检测器放大器放大器指示器指示器记录器记录器第二十五页，本课件共有43页1 1、光源、光源 理想的光源能发射含有各种波长的紫外和可见光，理想的光源能发射含有各种波长的紫外和可见光，且光强度较大。且光强度较大。荧光光度计中，常使用荧光光度计中，常使用高压汞灯和卤钨灯高压汞灯和卤钨灯作光源作光源荧光分光光度计中常用荧光分光光度计中常用高压氙灯高压氙灯作光源作光源2、单色器、单色器荧光光度计用滤光片作单色器，不能进行荧光光谱荧光光度计用滤光片作单色器，不能进行荧光光谱和激发光谱的扫描；和激发光谱的扫描；大多数荧光分光光度计一般采用两个光栅单色
19、器，大多数荧光分光光度计一般采用两个光栅单色器，有较高的分辨率，能扫描图谱。有较高的分辨率，能扫描图谱。第二十六页，本课件共有43页第一单色器作用：分离出所需要的激发光，选择最佳第一单色器作用：分离出所需要的激发光，选择最佳激发波长，用此激发样品池内的荧光物质激发波长，用此激发样品池内的荧光物质 第二单色器作用：滤掉一些溶剂的散射光和杂质所发射第二单色器作用：滤掉一些溶剂的散射光和杂质所发射的干扰光，用来选择测定用的荧光波长。的干扰光，用来选择测定用的荧光波长。在选定的荧在选定的荧光波长下测定荧光强度，定量分析。光波长下测定荧光强度，定量分析。3 3、样品池、样品池 盛放测定溶液，通常是石英材
20、料的方形池，四面盛放测定溶液，通常是石英材料的方形池，四面都透光，只能用手拿棱或最上边都透光，只能用手拿棱或最上边4 4、检测器、检测器 荧光的强度一般较弱，要求检测器有较高的灵敏荧光的强度一般较弱，要求检测器有较高的灵敏度，荧光光度计采用光电倍增管度，荧光光度计采用光电倍增管5 5、放大指示器、放大指示器第二十七页，本课件共有43页SK-2003A型荧光光谱仪型荧光光谱仪(国内首创）国内首创）第二十八页，本课件共有43页第四节第四节 荧光分析方法和应用荧光分析方法和应用一、定性分析一、定性分析 荧光物质的特征光谱有荧光物质的特征光谱有激发光谱激发光谱和和荧光光谱荧光光谱两种，两种，可以将荧光
21、物质的特征光谱与标准物质的光谱比较，以确可以将荧光物质的特征光谱与标准物质的光谱比较，以确定是否为同一物质。定是否为同一物质。二、定量分析二、定量分析定量分析依据定量分析依据 F=KC 1.1.标准曲线法标准曲线法步骤：步骤：1.1.配制不同浓度的标准溶液配制不同浓度的标准溶液2.2.做做F FC C关系曲线关系曲线 3.3.求得浓度求得浓度CFCXFX注意：固定仪器和测定条件；注意：固定仪器和测定条件；试样浓度在线性范围内试样浓度在线性范围内第二十九页，本课件共有43页2 2、直接比较法、直接比较法步骤：步骤：1.1.配制标准溶液和试样溶液配制标准溶液和试样溶液2.2.测测F F3.3.求浓
22、度求浓度注意：样品与标样溶液浓度接近，在线性范围内注意：样品与标样溶液浓度接近，在线性范围内第三十页，本课件共有43页三、荧光分析法的应用三、荧光分析法的应用有机物的荧光分析有机物的荧光分析芳香族及具有芳香结构的有机化合物在紫外光照射下大芳香族及具有芳香结构的有机化合物在紫外光照射下大多数能产生荧光，某些弱荧光物质可与荧光剂作用生成多数能产生荧光，某些弱荧光物质可与荧光剂作用生成强荧光物质。强荧光物质。1.1.油脂苯并（油脂苯并（a a）芘测定：）芘测定：油样经提取、浓缩、纯化后进行荧光测定，油样经提取、浓缩、纯化后进行荧光测定，ex 386nm、em406nm。2.2.尿中尿中N N1 1甲
23、基尼克酰胺的测定：甲基尼克酰胺的测定：尿液经纯化、碱处理和酮缩合成为带有黄色荧光的衍尿液经纯化、碱处理和酮缩合成为带有黄色荧光的衍生物，在酸性溶液中加热变成稳定而产生强蓝色荧光生物，在酸性溶液中加热变成稳定而产生强蓝色荧光的物质的物质,ex 355nm、em430nm。第三十一页，本课件共有43页3.1-2-3.1-2-甲氨基甲氨基5 5氯化磺酰萘氯化磺酰萘(Dansyl-Cl,DNS-ce 丹酰氯）用于氨基酸的荧光测定：丹酰氯）用于氨基酸的荧光测定：DNS-Cl是一种荧光试剂，是一种荧光试剂，DNS-C1能与所有的氨基能与所有的氨基酸生成具荧光的衍生物，在碱性条件下与氨基酸酸生成具荧光的衍生
24、物，在碱性条件下与氨基酸(肽肽或蛋白质或蛋白质)的氨基结合成带有荧光的的氨基结合成带有荧光的DNS-氨基酸氨基酸(DNS-肽或肽或DNS-蛋白质蛋白质)，DNS-氨基酸在紫外光照氨基酸在紫外光照射下呈现黄色荧光射下呈现黄色荧光 。第三十二页，本课件共有43页无机物的荧光分析无机物的荧光分析很多金属或非金属无机离子与一些有机化合物形成有很多金属或非金属无机离子与一些有机化合物形成有荧光的配合物，测定荧光强度可以进行定量分析。荧光的配合物，测定荧光强度可以进行定量分析。常用的试剂：常用的试剂：1.8羟基喹啉及其衍生物：羟基喹啉及其衍生物：用于用于Al、Ga、In、Sc、La、Mg、Zn、Cd等元素
25、的荧光测定。等元素的荧光测定。2.2.黄酮类试剂：黄酮类试剂：桑色素、黄烷醇、槲皮素桑色素、黄烷醇、槲皮素用于用于、族元素的荧光测定族元素的荧光测定3.3.二氨基化合物：二氨基化合物：用于测定用于测定Se第三十三页，本课件共有43页核酸分子荧光探针核酸分子荧光探针遗传物质的脱氧核糖酸遗传物质的脱氧核糖酸 (DNA),自身的荧光效率很低，一般自身的荧光效率很低，一般条件下几乎检测不到条件下几乎检测不到DNA的荧光，因此，常选用某些的荧光，因此，常选用某些荧光荧光分子作为探针分子作为探针，通过探针标记分子的荧光变化来研究，通过探针标记分子的荧光变化来研究 DNA 与小分子及药物的作用机理，从而探讨
26、致病原因及筛选和与小分子及药物的作用机理，从而探讨致病原因及筛选和设计新的高效低毒药物。目前设计新的高效低毒药物。目前,典型的荧光探针分子为溴化典型的荧光探针分子为溴化乙锭，此外也使用钉的配合物等。在基因检测方面，已逐步乙锭，此外也使用钉的配合物等。在基因检测方面，已逐步使用使用荧光染料荧光染料作为标记物来代替同位素标记，从而克服了作为标记物来代替同位素标记，从而克服了同位素标记物产生的污染同位素标记物产生的污染,价格昂贵及难保存等的不足。价格昂贵及难保存等的不足。第三十四页，本课件共有43页核酸分子荧光探针核酸分子荧光探针遗传物质的脱氧核糖酸遗传物质的脱氧核糖酸 (DNA),自身的荧光效率很
27、低，一自身的荧光效率很低，一般条件下几乎检测不到般条件下几乎检测不到DNA的荧光，因此，常选用某些的荧光，因此，常选用某些荧光分子作为探针荧光分子作为探针，通过探针标记分子的荧光变化来研，通过探针标记分子的荧光变化来研究究 DNA 与小分子及药物的作用机理，从而探讨致病原因及与小分子及药物的作用机理，从而探讨致病原因及筛选和设计新的高效低毒药物。目前筛选和设计新的高效低毒药物。目前,典型的荧光探针分子典型的荧光探针分子为溴化乙锭，此外也使用钉的配合物等。在基因检测方为溴化乙锭，此外也使用钉的配合物等。在基因检测方面，已逐步使用面，已逐步使用荧光染料荧光染料作为标记物来代替同位素标记，作为标记物
28、来代替同位素标记，从而克服了同位素标记物产生的污染从而克服了同位素标记物产生的污染,价格昂贵及难保存等的价格昂贵及难保存等的不足。不足。第三十五页，本课件共有43页本章小结本章小结掌握分子荧光产生机理掌握分子荧光产生机理掌握激发光谱和发射光谱的产生以及发射光谱特掌握激发光谱和发射光谱的产生以及发射光谱特征征掌握荧光与分子结构的关系以及荧光强度的影掌握荧光与分子结构的关系以及荧光强度的影 响因素响因素掌握荧光定量分析方法及荧光分光光度计掌握荧光定量分析方法及荧光分光光度计习题：习题：2,62,6第三十六页，本课件共有43页1.1.盐桥的作用是消除（盐桥的作用是消除（）A.A.不对称电位不对称电位
29、 B.B.液接电位液接电位 C.C.接触电位接触电位 D.D.相间电位相间电位2.2.在实际测定溶液在实际测定溶液pHpH时，都用时，都用pHpH标准溶液来校正电极，其目的标准溶液来校正电极，其目的是消除何种影响（是消除何种影响（）A.A.不对称电位不对称电位 B.B.液接电位液接电位 C.C.不对称电位和液接电位不对称电位和液接电位 D.D.温度温度3.3.玻璃电极使用前浸泡的目的是（玻璃电极使用前浸泡的目的是（）A.A.活化电极活化电极 B.B.清洗电极清洗电极 C.C.校正电极校正电极 D.D.检查电极性能检查电极性能4 4pHpH玻璃电极膜电位的产生是由于玻璃电极膜电位的产生是由于()
30、()A A电子得失电子得失 B B氢电子透过玻璃膜氢电子透过玻璃膜 C C溶液中氢离子和玻璃膜表面水化凝胶层中氢离子产生离子溶液中氢离子和玻璃膜表面水化凝胶层中氢离子产生离子交换和扩散交换和扩散 D D溶液中氢离子和玻璃膜表面水化凝胶层中钠离子产生离子交换溶液中氢离子和玻璃膜表面水化凝胶层中钠离子产生离子交换和扩散和扩散第三十七页，本课件共有43页5 5当当pHpH玻璃电极测量超出其使用的玻璃电极测量超出其使用的pHpH范围的溶液时，测量值将发范围的溶液时，测量值将发生生“酸差酸差”和和“碱差碱差”。“酸差酸差”和和“碱差碱差”使得测量使得测量pHpH值将值将()()A A偏高和偏高偏高和偏高
31、 B B偏低和偏低偏低和偏低 C C偏高和偏低偏高和偏低 D D偏低和偏高偏低和偏高6 6参比电极的作用是参比电极的作用是()()A A保持离子强度一致保持离子强度一致 B B提供标准电极电位提供标准电极电位 C C调节适宜的调节适宜的pHpH范围范围 D D消除干扰消除干扰7.TISAB7.TISAB由由_、_和和_三部分组成。三部分组成。8.8.电化学分析中盐桥中的电解质溶液应符合的要求是电化学分析中盐桥中的电解质溶液应符合的要求是_；_。第三十八页，本课件共有43页1.1.下列参数中，不属于紫外可见分光光度法定性的参数是（）下列参数中，不属于紫外可见分光光度法定性的参数是（）A.A.ma
32、x B.A C.max B.A C.吸收光谱形状吸收光谱形状 D.D.maxmax2.2.紫外可见法测定中，如果显色剂在测定波长处也有吸收，则空紫外可见法测定中，如果显色剂在测定波长处也有吸收，则空白应选用白应选用（）（）A.A.溶剂空白溶剂空白 B.B.平行操作空白平行操作空白 C.C.试样空白试样空白 D.D.试剂空白试剂空白3.3.某显色剂在某显色剂在pHpH小于小于6 6时为黄色，时为黄色，6-126-12时为橙色，大于时为橙色，大于1212时为红时为红色，该显色剂与某金属离子形成的红色配合物，则该显色反应色，该显色剂与某金属离子形成的红色配合物，则该显色反应应在（）应在（）A.A.弱
33、酸性溶液中进行弱酸性溶液中进行 B.B.弱碱性溶液中进行弱碱性溶液中进行 C.C.强碱性溶液进行强碱性溶液进行 D.D.任意任意pHpH条件下进行条件下进行4.4.摩尔吸光系数与下列因素有关的是（）摩尔吸光系数与下列因素有关的是（）A.A.入射光波长入射光波长 B.B.待测物浓度待测物浓度 C.C.比色皿厚度比色皿厚度 D.D.入射光强度入射光强度第三十九页，本课件共有43页5 5双波长分光光度计的输出信号是双波长分光光度计的输出信号是()()A A试样吸收与参比吸收之差试样吸收与参比吸收之差 B B试样与参比吸收之和试样与参比吸收之和 C C试样在试样在和和2 2处吸收之差处吸收之差 D D
34、试样在试样在和和2 2处吸收之和处吸收之和6 6分光光度分析中比较适宜的吸光度范围是分光光度分析中比较适宜的吸光度范围是()()A A0.11.2 B0.11.2 B0.20.8 0.20.8 C C0.050.6 D0.050.6 D0.21.50.21.57 7双光束与单光束分光光度计相比，其突出优点是双光束与单光束分光光度计相比，其突出优点是()()A A可以扩大波长的应用范围可以扩大波长的应用范围 B B可以采用快速响应的检测系统可以采用快速响应的检测系统 C C可以抵消吸收池所带来的误差可以抵消吸收池所带来的误差 D D可以抵消因光源的变化而产生的误差可以抵消因光源的变化而产生的误差
35、8 8符合符合LambertLambertBeerBeer定律的某有色溶液，当有色物质的浓度增加时，定律的某有色溶液，当有色物质的浓度增加时，最大吸收波长和吸光度分别是最大吸收波长和吸光度分别是()()A A不变，增加不变，增加 B B不变，减小不变，减小 C C向长波移动，不变向长波移动，不变 D D向短波移动，不变向短波移动，不变第四十页，本课件共有43页1.1.荧光光度计中第一单色器的作用是（）荧光光度计中第一单色器的作用是（）A.A.消除杂质荧光消除杂质荧光 B.B.得到合适的单色激发光得到合适的单色激发光 C.C.消除激发光产生的反射光消除激发光产生的反射光 D.D.消除瑞利散射、拉
36、曼散射消除瑞利散射、拉曼散射2.2.硫酸奎宁在硫酸奎宁在0.05M 0.05M 硫酸中，分别用硫酸中，分别用320nm320nm和和350nm350nm波长的光激发，波长的光激发，所得到的荧光光谱所得到的荧光光谱（）（）A.A.形状和强度都相同形状和强度都相同 B.B.形状和强度都不同形状和强度都不同 C.C.形状相同，强度不同形状相同，强度不同 D.D.强度相同，形状不同强度相同，形状不同3.3.为使荧光强度和荧光物质溶液的浓度成正比，必须使（）为使荧光强度和荧光物质溶液的浓度成正比，必须使（）A.A.激发光足够强激发光足够强 B.B.摩尔吸光系数足够大摩尔吸光系数足够大 C.C.试样溶液足
37、够稀试样溶液足够稀 D.D.仪器的灵敏度足器的灵敏度足够高高第四十一页，本课件共有43页4 4下列说法正确的是下列说法正确的是()()A A分子的刚性平面有利于荧光的产生分子的刚性平面有利于荧光的产生 B B磷光辐射的波长比荧光短磷光辐射的波长比荧光短 C C磷光比荧光的寿命短磷光比荧光的寿命短 D D荧光猝灭是指荧光完全消失荧光猝灭是指荧光完全消失5 5分子荧光与化学发光均为第一激发态的最低振动能级跃至基态分子荧光与化学发光均为第一激发态的最低振动能级跃至基态中各振动能级产生的光辐射，他们的主要区别在于中各振动能级产生的光辐射，他们的主要区别在于()()A A分子的电子层不同分子的电子层不同 B B跃至基态中的振动能级不同跃至基态中的振动能级不同 C C产生光辐射的能源不同产生光辐射的能源不同 D D无辐射弛豫的途径不同无辐射弛豫的途径不同 6.6.产生荧光发射时，分子应处于产生荧光发射时，分子应处于_。第四十二页，本课件共有43页感感谢谢大大家家观观看看2/28/2023第四十三页，本课件共有43页