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1、会计学1荧光光分析法测定维生素荧光光分析法测定维生素PRINCIPLE荧光：物质的分子经紫外光照射后，发射出的较原来吸收 光的频率低、波长长的光。不同的荧光物质有各自 的特征激发光波长和荧光波长，利用物质的荧光现 象进行定性、定量分析的方法称为荧光分析法。第1页/共12页对同一物质而言，若bC 1（0.05），即溶液的组 成量度极稀时，荧光强度F与溶液的组成量度C有以下关系：F=2.303I0bC：荧光效率 I0：入射光强度:荧光物质的摩尔吸光系数 b：样品池的厚度 I0 和 b当 固定时，F=KC第2页/共12页0FCC样品 F=KC F样品第3页/共12页VB2的C（HAc）=0.1mol
2、/L溶液在紫外光照射下，发出黄绿色荧光，可直接进行荧光测定。pH=2.9,激发 370nm，467nm 发射 527nmVB2，核黄素第4页/共12页PROCEDURE1 维生素B2系列标准溶液的配制0.1mol/L HAc 准确吸取VB2贮备液(125g/ml)0.50ml定容 50.0ml摇匀 1.25g/ml VB2 操作液 第5页/共12页 编号 1 2 3 4 5 6 VB2 操作液(ml)0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00用0.1mol/L Hac稀释至(ml)25.00荧光强度F相对荧光强度F第6页/共12页2 待测溶液的配制 取样品溶液 5.00ml
3、0.1mol/L HAc定容25.0ml摇匀 待测溶液 第7页/共12页3 标准曲线绘制 1）仪器预热（激发光波长360nm，荧光波长510nm）。2）以系列标准液6号液为标准，调节荧光强度F为90左右。3）固定荧光测定条件不变。分别测定下列标准液16号液（由稀倒浓）的荧光强度F，并记录。4）以溶液组成量度C为横坐标，相对荧光强度F，为纵坐标，绘制标准曲线。0FC(g/ml)第8页/共12页4 样品测定1）在相同的荧光测定条件下，测定样品液的荧光强度F。2）从标准曲线上查出对应的组成量度，再乘以5，得试样 中维生素B2的组成量度。C待测0FC(g/ml)第9页/共12页DATA 编号 1 2 3 4 5 6 7 VB2 操作液(ml)0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 5.00样品用0.1mol/L Hac稀释至(ml)25.00VB2标准溶液组成量度(g/ml)荧光强度 F相对荧光强度 F实验结果：CVB2=第10页/共12页QUESTION&DISCUSSION为何要以5号液来调节荧光强度为90左右?第11页/共12页