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1、会计学1细菌的培养与分离技术细菌的培养与分离技术常用玻璃器材的准备常用玻璃器材的准备n n玻璃器材的种类及用途玻璃器材的种类及用途n n玻璃器材的清洗玻璃器材的清洗新购置的玻璃器材：新购置的玻璃器材：1 12 2盐酸浸泡盐酸浸泡清清水清洗水清洗用过的无污染器皿：洗涤剂洗刷用过的无污染器皿：洗涤剂洗刷清水清洗清水清洗n n细菌污染的器材：消毒灭菌后再洗刷细菌污染的器材：消毒灭菌后再洗刷盛培养基试管和平皿：高压灭菌盛培养基试管和平皿：高压灭菌趁热倒出趁热倒出洗涤剂洗刷洗涤剂洗刷清水冲洗清水冲洗吸管：吸管：3 3来苏浸泡来苏浸泡清水冲洗清水冲洗玻片和盖玻片：玻片和盖玻片：3 3来苏和清洁液浸泡来苏和
2、清洁液浸泡清水清水冲洗；染色后的玻片，应肥皂水煮沸冲洗；染色后的玻片，应肥皂水煮沸10min10min再再洗涤洗涤含油脂的器皿：单独灭菌含油脂的器皿：单独灭菌第1页/共25页玻璃器皿灭菌前的准备玻璃器皿灭菌前的准备n n玻璃器皿在清洗、干燥后必须经正确的包裹和加塞后才能进行灭菌处理。第2页/共25页培养基的成分和作用培养基的成分和作用n n培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。n n营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类物血清
3、、生长因子、无机盐类n n水水n n凝固剂：琼脂、明胶凝固剂：琼脂、明胶n n抑制剂抑制剂n n指示剂指示剂第3页/共25页培养基的种类培养基的种类（按用途分类按用途分类按用途分类按用途分类）n n基础培养基基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普：培养营养要求不高的细菌，如普通平板通平板n n营养培养基营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板如血平板n n鉴别培养基鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（细菌，如克氏双糖培养基（KIAKIA）n n选择培养基选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择
4、：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，如性的培养目的菌，如SSSS平板平板n n增菌培养基增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤。量较少的标本，如葡萄糖肉汤。n n厌氧培养基厌氧培养基：用于培养厌氧菌：用于培养厌氧菌第4页/共25页培养基的种类培养基的种类（按物理性状分类按物理性状分类按物理性状分类按物理性状分类）n n液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。n n半固体培养基：含0.30.5琼脂，用于观察细菌的动力。n n固体培养基：含22.5琼脂，多用于细菌的分离培养。第5页/共25页培养基制备的一般程序培养基制备的
5、一般程序调配调配溶化溶化矫正矫正pH过滤澄清过滤澄清分装分装灭菌灭菌检定检定培养基灭菌培养基灭菌 基础培养基：基础培养基：121高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌15分钟分钟 含糖培养基：含糖培养基：113 灭菌灭菌15分钟分钟 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天天3次次 不耐高温的液体成分：滤过除菌不耐高温的液体成分：滤过除菌保存第6页/共25页培养基培养基pH测定及矫正测定及矫正 材料：n n待测培养基、n npH7.4标准比色管、4孔比色架、0.02酚红、n n氢氧化钠0.1mol/L、1mol/L）n n盐酸（0.1mol/L、1mol/L）n n蒸馏水n n试管（与比色管
6、口径一致）、n n刻度吸管（5ml、1ml、0.5ml、0.25ml）、第7页/共25页pHpH矫正矫正矫正矫正水水培养基培养基培养基培养基比色管比色管 酚红酚红指示剂指示剂目目 视视第8页/共25页 培养基蒸馏水pHpH矫正矫正矫正矫正过酸相同过碱标准比色管待测管 培养基蒸馏水标准比色管待测管 培养基蒸馏水标准比色管待测管第9页/共25页计计 算算n n假设2ml培养基矫正pH至7.4时需0.1mol/L NaOH 0.12ml，现有培养基1000ml，求需加NaOH的量。2：10000.12：X设需加需加NaOH的量为的量为Xml。X=0.1210002 60ml 0.1mol/L NaO
7、H 60106ml 1mol/L NaOH第10页/共25页细菌的接种与培养细菌的接种与培养n n无菌技术n n细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行。n n无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。n n细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌n n标本的采集n n无菌试管、烧瓶的使用第11页/共25页细菌接种的基本程序细菌接种的基本程序灭菌接种环灭菌接种环沾取标本沾取标本接种接种灭菌接种环灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境第12页/共25页细菌接种法细菌接种法n n平板划线接种法：目
8、的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。方法：分区划线法：适用于含菌量较多的标本连续划线法：适用于含菌量较少的标本n n液体培养基接种法n n穿刺接种法:用于观察细菌动力n n斜面接种法 n n倾注培养法:用于细菌计数第13页/共25页分区划线法分区划线法第一区划线第一区划线灭菌接种环灭菌接种环第二区划线第二区划线灭菌接种环灭菌接种环第三区划线第三区划线灭菌接种环灭菌接种环第14页/共25页连续划线法连续划线法第15页/共25页细菌培养法细菌培养法n n一般培养（需氧培养）：培养温度：35（采用恒温培养箱）培养时间：1824hn n二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱n
9、n厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等第16页/共25页细菌在细菌在细菌在细菌在固体固体固体固体培养基中的生长现象培养基中的生长现象培养基中的生长现象培养基中的生长现象n n菌落菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。成单一肉眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性明度、湿润度、黏度、溶血性菌落类型：光滑型（菌落类型：光滑型（S S）、粗糙型（）、粗糙型（R R）、黏液型）、黏液型（MM）n n菌苔：指多
10、个菌落融合在一起形成的细菌堆积菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。物。第17页/共25页细菌在细菌在细菌在细菌在液体液体液体液体培养基中的生长现象培养基中的生长现象培养基中的生长现象培养基中的生长现象n n混浊n n沉淀：多见于链状排列的细菌n n菌膜：多见于厌氧菌第18页/共25页细菌在细菌在细菌在细菌在半固体半固体半固体半固体培养基中的生长现象培养基中的生长现象培养基中的生长现象培养基中的生长现象n n有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。n n无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。第19页/共25页菌菌菌菌 落落落落第20页/共25页菌落与菌苔菌落与菌苔第21页/共25页细菌在液体培养基中的生长现象细菌在液体培养基中的生长现象第22页/共25页细菌在半固体培养基中的生长现象细菌在半固体培养基中的生长现象细菌在半固体培养基中的生长现象细菌在半固体培养基中的生长现象有动力有动力 现象现象无动力无动力 现象现象第23页/共25页第24页/共25页