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1、会计学1细菌的培养与分离细菌的培养与分离常用玻璃器材的准备常用玻璃器材的准备n n玻璃器材的种类及用途玻璃器材的种类及用途n n玻璃器材的清洗玻璃器材的清洗n n新购置的玻璃器材：新购置的玻璃器材：1 12 2盐酸浸泡盐酸浸泡清水清洗清水清洗n n用过的无污染器皿：洗涤剂洗刷用过的无污染器皿：洗涤剂洗刷清水清洗清水清洗n n细菌污染的器材：消毒灭菌后再洗刷细菌污染的器材：消毒灭菌后再洗刷n n盛培养基试管和平皿：高压灭菌盛培养基试管和平皿：高压灭菌趁热倒出趁热倒出洗涤剂洗刷洗涤剂洗刷清水冲清水冲洗洗n n吸管：吸管：3 3来苏浸泡来苏浸泡清水冲洗清水冲洗n n玻片和盖玻片：玻片和盖玻片：3 3
2、来苏和清洁液浸泡来苏和清洁液浸泡清水冲洗；染色后的玻片，应肥清水冲洗；染色后的玻片，应肥皂水煮沸皂水煮沸10min10min再洗涤再洗涤n n含油脂的器皿：单独灭菌含油脂的器皿：单独灭菌第1页/共24页玻璃器皿灭菌前玻璃器皿灭菌前的准备的准备n n玻璃器皿在清洗、干燥后必须经正确的包裹和加塞后才能进行灭菌处理。第2页/共24页培养基的成分和作用培养基的成分和作用n n培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。n n营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类n n水n n凝固剂：琼脂、明胶n n抑制剂n n指示剂第3页/共24页培养基的种类培养
3、基的种类（按用途分类按用途分类按用途分类按用途分类）n n基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板n n营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板n n鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（培养基（KIAKIA）n n选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，如如SSSS平板平板n n增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本
4、，如增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤。葡萄糖肉汤。n n厌氧培养基：用于培养厌氧菌厌氧培养基：用于培养厌氧菌第4页/共24页培养基的种类培养基的种类（按物理性状分类按物理性状分类按物理性状分类按物理性状分类）n n液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。n n半固体培养基：含0.30.5琼脂，用于观察细菌的动力。n n固体培养基：含22.5琼脂，多用于细菌的分离培养。第5页/共24页培养基制备的一般程序培养基制备的一般程序调配调配溶化溶化矫正矫正pH过滤澄清过滤澄清分装分装灭菌灭菌检定检定保存培养基灭菌培养基灭菌 基础培养基：基础培养基：121高压蒸汽
5、灭菌高压蒸汽灭菌15分钟分钟 含糖培养基：含糖培养基：113 灭菌灭菌15分钟分钟 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天天3次次 不耐高温的液体成分：滤过除菌不耐高温的液体成分：滤过除菌第6页/共24页培养基培养基pH测定及矫正测定及矫正n n 材料：材料：n n待测培养基、待测培养基、n npH7.4pH7.4标准比色管、标准比色管、4 4孔比色架、孔比色架、0.020.02酚红、酚红、n n氢氧化钠氢氧化钠0.1mol/L0.1mol/L、1mol/L1mol/L）n n盐酸（盐酸（0.1mol/L0.1mol/L、1mol/L1mol/L）n n蒸馏水蒸馏水n n试管
6、（与比色管口径一致）、试管（与比色管口径一致）、n n刻度吸管（刻度吸管（5ml5ml、1ml1ml、0.5ml0.5ml、0.25ml0.25ml）、）、第7页/共24页pHpH矫正比色架中各试管的位置矫正比色架中各试管的位置矫正比色架中各试管的位置矫正比色架中各试管的位置水水培养基培养基培养基培养基比色管比色管目目 视视第8页/共24页pH矫正矫正 培养基蒸馏水标准比色管待测管 培养基蒸馏水标准比色管待测管 培养基蒸馏水标准比色管待测管过酸相同过碱第9页/共24页计计 算算n n假设2ml培养基矫正pH至7.4时需0.1mol/L NaOH 0.12ml，现有培养基1000ml，求需加Na
7、OH的量。设需加需加NaOH的量为的量为Xml。2：10000.12：XX=0.1210002 60ml 0.1mol/L NaOH 60106ml 1mol/L NaOH第10页/共24页细菌的接种与培养细菌的接种与培养n n无菌技术无菌技术n n细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行。细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行。n n无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。n n细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌n n标本的采集标本的采集n n无菌试管、烧瓶的使用无菌试管、烧瓶的使用第11页/共24页细菌接种的基
8、本程序细菌接种的基本程序灭菌接种环灭菌接种环沾取标本沾取标本接种接种灭菌接种环灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境第12页/共24页细菌接种法细菌接种法n n平板划线接种法：平板划线接种法：n n 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。n n 方法：方法：n n分区划线法：适用于含菌量较多的标本分区划线法：适用于含菌量较多的标本n n连续划线法：适用于含菌量较少的标本连续划线法：适用于含菌量较少的标本
9、n n液体培养基接种法液体培养基接种法n n穿刺接种法穿刺接种法 :用于观察细菌动力用于观察细菌动力n n斜面接种法斜面接种法 n n倾注培养法倾注培养法:用于细菌计数用于细菌计数第13页/共24页分区划线法分区划线法第一区划线第一区划线灭菌接种环灭菌接种环第二区划线第二区划线灭菌接种环灭菌接种环第三区划线第三区划线灭菌接种环灭菌接种环第14页/共24页连续划线连续划线法法第15页/共24页细菌培养法细菌培养法n n一般培养（需氧培养）：n n培养温度：35（采用恒温培养箱）n n培养时间：1824hn n二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱n n厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉
10、培养法、硫乙醇酸盐法等第16页/共24页细菌在细菌在固体固体培养基中的生长现象培养基中的生长现象n n菌落菌落n n定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。n n菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性面、透明度、湿润度、黏度、溶血性n n菌落类型：光滑型（菌落类型：光滑型（S S）、粗糙型（）、粗糙型（R R）、）、黏液型（黏液型（MM）n n菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。积物。第1
11、7页/共24页细菌在细菌在液体液体培养基中的生长现象培养基中的生长现象n n混浊n n沉淀：多见于链状排列的细菌n n菌膜：多见于厌氧菌第18页/共24页细菌在细菌在半固体半固体培养基中的生长现象培养基中的生长现象n n有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。n n无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。第19页/共24页菌菌菌菌 落落落落第20页/共24页菌落与菌苔菌落与菌苔第21页/共24页细菌在液体培养基中的生长现象细菌在液体培养基中的生长现象第22页/共24页细菌在半固体培养基中的生长现象细菌在半固体培养基中的生长现象无动力无动力 现象现象有动力有动力 现象现象第23页/共24页