《分析方法验证方案.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《分析方法验证方案.pdf（13页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、异烟肼含量测定分析方法验证方案 验证原因：验证类型：新项目验证 再验证 其它 预验证 回顾性验证 转移验证 方法描述：本分析方法为中国药典 2010 版二部方法。为确保其检测结果准确，对该分析方法的专属性、精密度（系统精密度、方法精密度、中间精密度）、线性和范围、准确度、耐用性进行评价。验证依据：中国药典 2010 年版分析方法（295 页）验证时间：2010 年 07 月 09 日2010 年 07 月 10 日 验证项目组成员及职责：部门 成员 职责 QC 仪器设备的确认 QC 分析方法编写 QC 分析测试 QC 数据评估 质量部 审核批准 验证内容:-序列号 确认测试项目 可接受标准 0
2、1 01.1 01.2 仪器设备的确认 高效液相色谱仪的确认 天平的确认 符合仪器设备的确认要求 符合仪器设备的确认要求 02 具体测试内容 系统精密度 配置 1 份异烟肼工作标准溶液，连续进针6 次，记录异烟肼峰面积、保留时间。异烟肼峰面积 RSD%,保留时间 RSD%。异烟肼理论塔板数大于 4000，拖尾因子在之间。方法精密度 平行配制同一批样品的 6 份样品溶液，每份溶液进样2 针，计算样品含量及其相对标准偏差。样品含量的 RSD%。线性和范围 以异烟肼工作标准品溶液的浓度为 100%，配制 20%、60%、100%、140%、180%浓度的工作标准品溶液，每个浓度的标准品溶液进样 1
3、次，计算出回归方程和相关系数 R。R 准确度 以异烟肼工作标准品溶液的浓度为 100%，取同一批样品，配制浓度为 80%、100%和 120%的样品溶液各 3 份，每份进样 2 针。计算其回收率。该定量方法的回收率应为%。耐用性 配制异烟酸和异烟肼混合溶液，按下列条件改变方法，稳定后按顺序进样，计算异烟肼的理论塔板数，混合溶液中异烟酸和异烟肼的相对保留时间 RRT。a.改变流速为 min 和 min。理论塔板数大于 4000，拖尾因子在之间,分离度 R，相对保留时间RRT 偏差绝对值不大于 20。b.改变柱温为 23和 27。c.改变流动相缓冲液与甲醇配比为 83:17 和 87:13。d.同
4、一填料不同色谱柱。03 程序及文件 液相色谱仪校正规程 液相色谱仪操作规程 分析天平校正规程 分析天平操作规程 符合要求 符合要求 符合要求 符合要求 验证前准备：a)人员培训：培训人姓名 培训时间 培训内容 b)仪器设备、标准品和试剂：仪器设备 仪器名称 型号 编号 校验有效期 高效液相色谱仪 MODEL200 标准品和试剂 名称 级别 厂家 批号 c)样品 名称 厂家 批号 验证过程：色谱条件 色谱条件 色谱柱：agilent ODS-2 长度：250cm，内径：4.6mm，填料 C18，填料粒度：5m 检测波长：262nm，带宽 30 柱温：25 进样量：20l 流速：min 流动相 A
5、：l 磷酸氢二钠溶液（用磷酸调 pH 至），流动相 B：甲醇 A:B=85:15 停止时间：12min 1.系统精密度 1.1.溶液配制 系统精密度溶液：取异烟肼 10mg，置 100ml 容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释至刻度。验证过程及结果 系统精密度溶液连续进样 6 次，记录其异烟肼峰面积、保留时间。可接受标准：异烟肼峰面积 RSD%,保留时间 RSD%。序号 保留时间(min)峰面积 1 2 3 4 5 6 RSD%结论：2.重现性试验（方法精密度）2.1.溶液配制 2.1.1.对照溶液：取异烟肼工作标准品 10mg，精密称量，置 100ml 容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。2.1.
6、2.方法精密度溶液：取异烟肼样品 10mg 置 100ml 容量瓶中，精密称定，用水溶解并稀释至刻度。用此方法配置同一批号的样品溶液 6 份。2.2.验证程序及结果 工作标准品溶液进 2 针，样品溶液各进 2 针。记录异烟肼峰面积，计算样品含量。可接受标准：异烟肼含量的 RSD%。样品批号：称样量（mg）峰面积 含量 RSD 1 2 平均值 结论：3.线性和范围 3.1.溶液配制 3.1.1.a 供试品溶液：取异烟肼 50mg，置 100ml 容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释至刻度，混匀，即得。3.1.2.线性点溶液：精密移取 a 供试品溶液 5ml、2ml、1ml、分别置 10ml 容量瓶
7、中，用水稀释至刻度，得到浓度约为 50ug/ml（d 供试品溶液）、100ug/ml（c 供试品溶液）、250ug/ml（b 供试品溶液）、500ug/ml（a 供试品溶液）的线性点溶液，再精密移取1ml b 供试品溶液 1ml 置 100ml 容量瓶中，用水稀释至刻度，得到浓度约为 ml（e供试品溶液）。3.2.验证程序及结果 按色谱条件分别对线性点溶液进行分析，每个溶液进样 1 次。以浓度为 X 轴，主峰峰面积平均值为 Y 轴，画出线性图，求出回归方程，计算线性相关系数 R。可接受标准：R 项目（X1）（X2）（X3）X4）（X5）线性点溶液浓度(ug/ml)异烟肼峰面积 线性范围（ug/
8、ml）线性回归方程 相关系数 R 结论：4.准确度 4.1.溶液配制 4.1.1.对照溶液：取异烟肼 10mg，置 100ml 容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释至刻度，混匀，即得。4.1.2.准确度溶液：以对照溶液浓度为 100%，配置 80%、100%和 120%浓度的准确度溶液。即分别取同一批异烟肼样品 8mg、10mg、12mg 至 100ml 容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释至刻度。每个浓度的准确度溶液配制 3 份。4.2.验证程序及结果 按照色谱条件分别对对照溶液和准确度溶液进行分析，每个溶液各进 2 针，按外标法计算准确度溶液中异烟肼含量，计算其回收率。可接受标准：该定量方法的
9、回收率应为%。回收率 RSD%。样品批号 相应含量 称样量（mg）峰面积 实测量（mg）回收率 1 2 平均值 80 100 120 结论：5.耐用性 5.1.溶液配制 5.1.1.混合溶液：精密称取 10mg 异烟酸和 10mg 异烟肼样品置 100ml 容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，混匀，即得。5.2.验证过程及结果 按下列条件改变方法，原条件溶液和改变色谱条件的顺序进样，计算异烟肼的理论塔板数,拖尾因子。计算相对保留时间 RRT 偏差绝对值。a.改变柱温为 23和 27 b.改变流速为 min 和 min。c.改变 l 磷酸氢二钠溶液(磷酸调 pH 至与甲醇配比为 87:13 和 83
10、:17。d.选用同一填料的两个不同色谱柱比较 可接受标准：理论塔板数大于 4000，拖尾因子在之间。分离度 R，相对保留时间 RRT偏差绝对值不大于 20。条件 异烟肼理论塔板数 异烟肼拖尾因子 原条件 a min min b 23 27 c 87:13 83:17 d 色谱柱 1 色谱柱 2 条件 异烟酸 RRT 偏差绝对值 原条件 a 23 27 b min min c 87:13 83:17 d 色谱柱 1 色谱柱 2 结论：验证结论：验证结果见表 验证项目 可接受标准 验证结果 判定 系统精密度 异烟肼的峰面积及保留时间的 RSD均不大于。异烟肼理论塔板数大于4000。方法精密度 RSD 不大于 线性和范围 线性回归系数 R 应大于 准确度 回收率在%之间 耐用性 理论塔板数大于 4000，拖尾因子在之间。分离度R 大于，相对保留时间RRT偏差绝对值不大于20 偏差及处理：分析方法验证过程中出现的所有偏差都要记录并有效评估和处理。再验证 再验证周期为 3 年。验证负责人/日期 审核人/日期 批准人/日期