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1、动物实验操作动物实验操作第1页，本讲稿共67页大鼠生物学特性大鼠生物学特性l l大鼠汗腺极不发达，仅在爪垫上有汗腺，尾巴是散热器官。大鼠汗腺极不发达，仅在爪垫上有汗腺，尾巴是散热器官。大鼠汗腺极不发达，仅在爪垫上有汗腺，尾巴是散热器官。大鼠汗腺极不发达，仅在爪垫上有汗腺，尾巴是散热器官。l l大鼠无呕吐反应，对许多药物易产生耐药性。大鼠无呕吐反应，对许多药物易产生耐药性。大鼠无呕吐反应，对许多药物易产生耐药性。大鼠无呕吐反应，对许多药物易产生耐药性。l l对营养缺乏敏感，可发生典型的缺乏症状。对营养缺乏敏感，可发生典型的缺乏症状。对营养缺乏敏感，可发生典型的缺乏症状。对营养缺乏敏感，可发生典型
2、的缺乏症状。l l大鼠无胆囊，胆汁通过总胆管进入十二指肠。大鼠无胆囊，胆汁通过总胆管进入十二指肠。大鼠无胆囊，胆汁通过总胆管进入十二指肠。大鼠无胆囊，胆汁通过总胆管进入十二指肠。l l大鼠神经系统与人类相似。大鼠神经系统与人类相似。大鼠神经系统与人类相似。大鼠神经系统与人类相似。第2页，本讲稿共67页动物实验基本技能n编号与标记方法n大鼠的抓取n大鼠麻醉n供试品给予方法n采集体液n大鼠的采血第3页，本讲稿共67页一、编号与标记方法n n染色法染色法染色法染色法n n穿耳孔法穿耳孔法穿耳孔法穿耳孔法n n标牌法标牌法标牌法标牌法n n烙印法烙印法烙印法烙印法n n剪毛法剪毛法剪毛法剪毛法第4页，
3、本讲稿共67页n n在每组动物不超过在每组动物不超过在每组动物不超过在每组动物不超过l0l0l0l0只或一个实验不超过只或一个实验不超过只或一个实验不超过只或一个实验不超过40404040只的情只的情只的情只的情况下适用况下适用况下适用况下适用n n实验动物：大鼠、小鼠实验动物：大鼠、小鼠实验动物：大鼠、小鼠实验动物：大鼠、小鼠n n染色剂：染色剂：染色剂：染色剂：3-53-53-53-5苦味酸溶液，可染成黄色苦味酸溶液，可染成黄色苦味酸溶液，可染成黄色苦味酸溶液，可染成黄色染色法：单色涂染法第5页，本讲稿共67页n n涂染原则：从左到右、从上到下涂染原则：从左到右、从上到下涂染原则：从左到右
4、、从上到下涂染原则：从左到右、从上到下n n左前肢为左前肢为左前肢为左前肢为1 1 1 1号、左侧腹部号、左侧腹部号、左侧腹部号、左侧腹部2 2 2 2号、左后肢号、左后肢号、左后肢号、左后肢3 3 3 3号，号，号，号，n n两耳后部两耳后部两耳后部两耳后部4 4 4 4号、背部号、背部号、背部号、背部5 5 5 5号、后肢背部号、后肢背部号、后肢背部号、后肢背部6 6 6 6号，号，号，号，n n右前肢右前肢右前肢右前肢7 7 7 7号、右侧腹部号、右侧腹部号、右侧腹部号、右侧腹部 8 8 8 8号、右后肢号、右后肢号、右后肢号、右后肢9 9 9 9号号号号n n头部为头部为头部为头部为4
5、0404040号、尾巴根为号、尾巴根为号、尾巴根为号、尾巴根为10101010号。号。号。号。方法步骤第6页，本讲稿共67页n n在每组动物不超过在每组动物不超过在每组动物不超过在每组动物不超过100100100100只的情况下适用只的情况下适用只的情况下适用只的情况下适用n n实验动物：大鼠、小鼠实验动物：大鼠、小鼠实验动物：大鼠、小鼠实验动物：大鼠、小鼠n n常常常常用用用用染染染染色色色色剂剂剂剂：3-53-53-53-5苦苦苦苦味味味味酸酸酸酸溶溶溶溶液液液液，可可可可染染染染成成成成黄黄黄黄色色色色，作作作作为为为为“个个个个”位数位数位数位数n n常常常常用用用用染染染染色色色色剂
6、剂剂剂：0.5%0.5%0.5%0.5%中中中中性性性性红红红红或或或或品品品品红红红红溶溶溶溶液液液液，可可可可染染染染成成成成红红红红色色色色，作为作为作为作为“十十十十”位数位数位数位数染色法：双色涂染法第7页，本讲稿共67页n n用两种颜色同时进行染色标记用两种颜色同时进行染色标记用两种颜色同时进行染色标记用两种颜色同时进行染色标记 n n用苦味酸用苦味酸用苦味酸用苦味酸(黄色黄色黄色黄色)染色标记作为个位数，个位数的染色染色标记作为个位数，个位数的染色染色标记作为个位数，个位数的染色染色标记作为个位数，个位数的染色标记方法同单色涂染法标记方法同单色涂染法标记方法同单色涂染法标记方法同
7、单色涂染法n n用品红用品红用品红用品红(红色红色红色红色)染色标记作为十位数染色标记作为十位数染色标记作为十位数染色标记作为十位数方法步骤第8页，本讲稿共67页n n左前肢为左前肢为左前肢为左前肢为10101010号、号、号、号、左侧腹部左侧腹部左侧腹部左侧腹部20202020号、左后肢号、左后肢号、左后肢号、左后肢30303030号号号号n n两耳后部两耳后部两耳后部两耳后部40404040号、号、号、号、背部背部背部背部50505050号、号、号、号、后肢背部后肢背部后肢背部后肢背部60606060号号号号n n右前肢右前肢右前肢右前肢70707070号、右侧腹部号、右侧腹部号、右侧腹部
8、号、右侧腹部 80808080号、右后肢号、右后肢号、右后肢号、右后肢90909090号号号号n n第第第第100100100100号不作染色标记号不作染色标记号不作染色标记号不作染色标记方法步骤第9页，本讲稿共67页n n穿耳孔法穿耳孔法穿耳孔法穿耳孔法：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定号码的方法。原则是：左耳代表十位，或缺口表示一定号码的方法。原则是：左耳代表十位，或缺口表示一定号码的方法。原则是：左耳代表十位，或缺口表示一定号码的方法。原则是：左耳代
9、表十位，右耳代表个位。实验动物：兔、犬、猪右耳代表个位。实验动物：兔、犬、猪右耳代表个位。实验动物：兔、犬、猪右耳代表个位。实验动物：兔、犬、猪n n标牌法标牌法标牌法标牌法：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。实验动物：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。实验动物：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。实验动物：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。实验动物：犬、猴犬、猴犬、猴犬、猴n n烙印法烙印法烙印法烙印法n n剪毛法剪毛法剪毛法剪毛法其它方法第10页，本讲稿共67页器材：器材：器材：器材：大鼠饲养盒大鼠饲养盒大鼠饲养盒大鼠饲养盒 +面罩面罩面罩面罩 1 1 1 1套套套套方法步骤：方法步骤：方法步骤：方
10、法步骤：n n首先戴好防护手套首先戴好防护手套首先戴好防护手套首先戴好防护手套n n用右手拇指和食指抓住小鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大鼠用右手拇指和食指抓住小鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大鼠用右手拇指和食指抓住小鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大鼠用右手拇指和食指抓住小鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大鼠饲养盒的面罩上饲养盒的面罩上饲养盒的面罩上饲养盒的面罩上n n左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行n n以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮
11、肤，其余三指和手掌以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌握住大鼠背部皮肤，完成抓取固定握住大鼠背部皮肤，完成抓取固定握住大鼠背部皮肤，完成抓取固定握住大鼠背部皮肤，完成抓取固定二、大鼠的抓取第11页，本讲稿共67页n n动物全身麻醉分四期：动物全身麻醉分四期：动物全身麻醉分四期：动物全身麻醉分四期：第一期：第一期：第一期：第一期：随意兴奋期，出现运动与运动失调随意兴奋期，出现运动与运动失调随意兴奋期，出现运动与运动失调随意兴奋期，出现运动与运动失调 第二期：第
12、二期：第二期：第二期：不随意兴奋期，由意识完全丧失至规则的自动呼吸开始时止不随意兴奋期，由意识完全丧失至规则的自动呼吸开始时止不随意兴奋期，由意识完全丧失至规则的自动呼吸开始时止不随意兴奋期，由意识完全丧失至规则的自动呼吸开始时止 第三期：第三期：第三期：第三期：外科麻醉期外科麻醉期外科麻醉期外科麻醉期 第四期：第四期：第四期：第四期：延髓麻醉期，进入此期，麻醉已严重过量延髓麻醉期，进入此期，麻醉已严重过量延髓麻醉期，进入此期，麻醉已严重过量延髓麻醉期，进入此期，麻醉已严重过量三、实验动物麻醉第12页，本讲稿共67页n n麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通过吸入、注射（静麻醉方法：全身麻醉和局部
13、麻醉，通过吸入、注射（静麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通过吸入、注射（静麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通过吸入、注射（静脉、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方法使动物麻脉、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方法使动物麻脉、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方法使动物麻脉、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方法使动物麻醉醉醉醉n n常用麻醉药物：乙醚（吸入），戊巴比妥钠、硫贲常用麻醉药物：乙醚（吸入），戊巴比妥钠、硫贲常用麻醉药物：乙醚（吸入），戊巴比妥钠、硫贲常用麻醉药物：乙醚（吸入），戊巴比妥钠、硫贲妥钠、氯胺酮（静脉），普鲁卡因、利多卡因（局妥钠、氯胺酮（静脉），普鲁卡因、利多卡因（局妥钠、氯胺
14、酮（静脉），普鲁卡因、利多卡因（局妥钠、氯胺酮（静脉），普鲁卡因、利多卡因（局麻）麻）麻）麻）麻醉方法与麻醉药第13页，本讲稿共67页种类种类种类种类戊巴比妥戊巴比妥戊巴比妥戊巴比妥硫贲妥钠硫贲妥钠硫贲妥钠硫贲妥钠盐酸氯胺酮盐酸氯胺酮盐酸氯胺酮盐酸氯胺酮水合氯醛水合氯醛水合氯醛水合氯醛乌拉坦乌拉坦乌拉坦乌拉坦mg/kgmg/kg途径途径途径途径mg/kgmg/kg途径途径途径途径mg/kgmg/kg途径途径途径途径mg/kgmg/kg途径途径途径途径mg/kgmg/kg途径途径途径途径小鼠小鼠小鼠小鼠35355050IVIVIPIP25255050I.V.I.V.IPIP22-4422-44I
15、MIM400400IPIP-大鼠大鼠大鼠大鼠25255050IVIVIPIP20204040IVIVIPIP22-4422-44IMIM300300IPIP0.750.75IPIP豚鼠豚鼠豚鼠豚鼠30304040IVIVIPIP20205555IVIVIPIP22-4422-44IMIM200-300200-300IPIP1.51.5IPIP家兔家兔家兔家兔30304040IVIVIPIP2020IVIV22-4422-441.01.0IVIVIPIP狗狗狗狗3030IVIV2525IVIV125125IVIV1.01.0IVIV猪猪猪猪45k45kg g30-2030-201515IVIVI
16、VIV10-910-95 5IVIVIVIV10-1510-1510-1510-15IMIMIMIM常用麻醉药剂量与注射途径第14页，本讲稿共67页n n麻醉前应禁食麻醉前应禁食麻醉前应禁食麻醉前应禁食8h8h8h8h以上以上以上以上n n麻醉前应准确称体重麻醉前应准确称体重麻醉前应准确称体重麻醉前应准确称体重n n注意麻醉剂量注意麻醉剂量注意麻醉剂量注意麻醉剂量n n麻醉过程中注意观察动物的反应情况麻醉过程中注意观察动物的反应情况麻醉过程中注意观察动物的反应情况麻醉过程中注意观察动物的反应情况n n注意保温注意保温注意保温注意保温n n静脉注射时必须缓慢，静脉注射时必须缓慢，静脉注射时必须缓
17、慢，静脉注射时必须缓慢，n n在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平注意事项第15页，本讲稿共67页n n原原原原理理理理：是是是是使使使使用用用用非非非非挥挥挥挥发发发发性性性性麻麻麻麻醉醉醉醉药药药药对对对对动动动动物物物物进进进进行行行行全全全全麻麻麻麻术术术术的的的的方方方方法法法法n n器材：器材：器材：器材：3 3 3 3戊巴比妥钠、注射器戊巴比妥钠、注射器戊巴比妥钠、注射器戊巴比妥钠、注射器大鼠的麻醉第16页，本讲稿共67页n n用左手
18、将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部n n右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺n n针头刺入皮下后进针针头刺入皮下后进针针头刺入皮下后进针针头刺入皮下后进针3mm3mm3mm3mm左右，接着使注射针头与皮肤呈左右，接着使注射针头与皮肤呈左右，接着使注射针头与皮肤呈左右，接着使注
19、射针头与皮肤呈45454545度度度度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失抗感消失抗感消失抗感消失n n固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液后即可注射药液后即可注射药液后即可注射药液大鼠麻醉步骤
20、第17页，本讲稿共67页n n经口给药经口给药n n注射给药注射给药 1.1.1.1.皮下注射给药皮下注射给药皮下注射给药皮下注射给药 2.2.2.2.皮内注射给药皮内注射给药皮内注射给药皮内注射给药 3.3.3.3.肌肉注射给药肌肉注射给药肌肉注射给药肌肉注射给药 4.4.4.4.静脉注射给药静脉注射给药静脉注射给药静脉注射给药 5.5.5.5.腹腔注射给药腹腔注射给药腹腔注射给药腹腔注射给药四、供试品给予方法第18页，本讲稿共67页n n自动口服给药自动口服给药自动口服给药自动口服给药n n灌胃给药灌胃给药灌胃给药灌胃给药:是借器械将药物直接灌入动物胃内的是借器械将药物直接灌入动物胃内的是
21、借器械将药物直接灌入动物胃内的是借器械将药物直接灌入动物胃内的方法，此法可以准确控制给药量，但如果操作方法，此法可以准确控制给药量，但如果操作方法，此法可以准确控制给药量，但如果操作方法，此法可以准确控制给药量，但如果操作不当易造成动物死亡不当易造成动物死亡不当易造成动物死亡不当易造成动物死亡经口给药第19页，本讲稿共67页n n将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量的药液将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量的药液将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量的药液将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量的药液n n操作前，大致量一下从口到胃的距离，估计灌胃针头插入的深度操作前，大致量一下从口到胃的距离，估计灌胃针头
22、插入的深度操作前，大致量一下从口到胃的距离，估计灌胃针头插入的深度操作前，大致量一下从口到胃的距离，估计灌胃针头插入的深度n n左左左左手手手手捉捉捉捉持持持持动动动动物物物物，使使使使头头头头部部部部向向向向上上上上；右右右右手手手手持持持持针针针针，把把把把灌灌灌灌胃胃胃胃针针针针头头头头的的的的前前前前端端端端放放放放进进进进动动动动物物物物的的的的口口口口腔腔腔腔，顺顺顺顺着着着着上上上上腭腭腭腭部部部部插插插插入入入入咽咽咽咽部部部部，顺顺顺顺咽咽咽咽后后后后壁壁壁壁轻轻轻轻轻轻轻轻往往往往下下下下推推推推，灌灌灌灌胃胃胃胃针针针针会会会会顺顺顺顺着着着着食食食食管管管管滑滑滑滑入入
23、入入动动动动物物物物的的的的胃胃胃胃内内内内，此此此此时时时时没没没没有有有有抵抵抵抵触触触触感感感感n n用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的药液灌入动物的用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的药液灌入动物的用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的药液灌入动物的用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的药液灌入动物的胃中胃中胃中胃中灌胃给药第20页，本讲稿共67页n n剂量：小鼠约剂量：小鼠约剂量：小鼠约剂量：小鼠约0.1-0.5ml0.1-0.5ml0.1-0.5ml0.1-0.5ml10g10g10g10g体重，最大体积为体重，最大体积为体重，最大体积为体重，最大体积为1.0ml/1
24、.0ml/1.0ml/1.0ml/只；只；只；只；大鼠约大鼠约大鼠约大鼠约1-2 ml1-2 ml1-2 ml1-2 ml100g100g100g100g体重，最大体积为体重，最大体积为体重，最大体积为体重，最大体积为1.0ml/1.0ml/1.0ml/1.0ml/只只只只n n注意：在灌胃过程中，避免误插入气管注意：在灌胃过程中，避免误插入气管注意：在灌胃过程中，避免误插入气管注意：在灌胃过程中，避免误插入气管灌胃给药第21页，本讲稿共67页1.皮下注射给药n n原原原原理理理理：将将将将药药药药液液液液注注注注入入入入皮皮皮皮下下下下结结结结缔缔缔缔组组组组织织织织，经经经经毛毛毛毛细细细
25、细血血血血管管管管、淋淋淋淋巴管吸收进入血液循环巴管吸收进入血液循环巴管吸收进入血液循环巴管吸收进入血液循环n n器材：器材：器材：器材：1m11m11m11m1注射器注射器注射器注射器1 1 1 1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘支、生理盐水、烧杯、酒精、碘支、生理盐水、烧杯、酒精、碘支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球酒、棉球酒、棉球酒、棉球注射给药第22页，本讲稿共67页n n注射部位：颈背部、腋下、腹侧和后肢的皮下注射部位：颈背部、腋下、腹侧和后肢的皮下注射部位：颈背部、腋下、腹侧和后肢的皮下注射部位：颈背部、腋下、腹侧和后肢的皮下n n常常常常规规规规消毒注射部位的皮肤，用注射消毒注射部
26、位的皮肤，用注射消毒注射部位的皮肤，用注射消毒注射部位的皮肤，用注射针头针头针头针头取一取一取一取一锐锐锐锐角角角角角度角度角度角度刺入皮下刺入皮下刺入皮下刺入皮下.n n将将将将针针针针头头头头轻轻轻轻轻轻轻轻向向向向左左左左右右右右摆摆摆摆动动动动，易易易易摆摆摆摆动动动动则则则则表表表表示示示示已已已已刺刺刺刺入入入入皮皮皮皮下下下下，再轻轻再轻轻再轻轻再轻轻抽吸抽吸抽吸抽吸，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。n n注射量：注射量：注射量：注射量：0.01ml0.01ml0.01m
27、l0.01ml0.03ml0.03ml0.03ml0.03mlg g g g体重体重体重体重皮下注射方法步骤第23页，本讲稿共67页n n此法用于观察皮肤血管通透性变化或皮肤反应此法用于观察皮肤血管通透性变化或皮肤反应此法用于观察皮肤血管通透性变化或皮肤反应此法用于观察皮肤血管通透性变化或皮肤反应n n注射部位：动物背部，脱毛，用针头平直进入皮内注射部位：动物背部，脱毛，用针头平直进入皮内注射部位：动物背部，脱毛，用针头平直进入皮内注射部位：动物背部，脱毛，用针头平直进入皮内n n注射药液后，皮肤表面鼓起小泡，停片刻拔出针头注射药液后，皮肤表面鼓起小泡，停片刻拔出针头注射药液后，皮肤表面鼓起小
28、泡，停片刻拔出针头注射药液后，皮肤表面鼓起小泡，停片刻拔出针头2.皮内注射给药第24页，本讲稿共67页n n原原原原理理理理：将将将将药药药药液液液液注注注注入入入入动动动动物物物物的的的的肌肌肌肌肉肉肉肉组组组组织织织织，经经经经毛毛毛毛细细细细血血血血管管管管吸吸吸吸收进入血液循环收进入血液循环收进入血液循环收进入血液循环 n n器材：器材：器材：器材：1ml1ml1ml1ml注射器注射器注射器注射器1 1 1 1支、生理盐水、烧杯、酒精、支、生理盐水、烧杯、酒精、支、生理盐水、烧杯、酒精、支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球碘酒、棉球碘酒、棉球碘酒、棉球n n注射部位：注射部位：注射部位
29、：注射部位：一般选择肌肉丰富而无大血管通过的臀部或一般选择肌肉丰富而无大血管通过的臀部或一般选择肌肉丰富而无大血管通过的臀部或一般选择肌肉丰富而无大血管通过的臀部或大腿外测，回抽无血即可注射大腿外测，回抽无血即可注射大腿外测，回抽无血即可注射大腿外测，回抽无血即可注射3.肌肉注射给药第25页，本讲稿共67页n n原理：将药液注入小鼠的尾静脉原理：将药液注入小鼠的尾静脉原理：将药液注入小鼠的尾静脉原理：将药液注入小鼠的尾静脉n n器材：器材：器材：器材：1m11m11m11m1注射器注射器注射器注射器1 1 1 1支、生理盐水、烧杯、金属笼或大小支、生理盐水、烧杯、金属笼或大小支、生理盐水、烧杯
30、、金属笼或大小支、生理盐水、烧杯、金属笼或大小鼠器鼠器鼠器鼠器 、酒精、碘酒、棉球、酒精、碘酒、棉球、酒精、碘酒、棉球、酒精、碘酒、棉球 4.静脉注射给药第26页，本讲稿共67页n n将大小鼠放在金属笼或小鼠固定器中，通过金属笼或将大小鼠放在金属笼或小鼠固定器中，通过金属笼或将大小鼠放在金属笼或小鼠固定器中，通过金属笼或将大小鼠放在金属笼或小鼠固定器中，通过金属笼或大小鼠固定器大小鼠固定器大小鼠固定器大小鼠固定器的孔拉出鼠尾巴的孔拉出鼠尾巴的孔拉出鼠尾巴的孔拉出鼠尾巴n n用左手捏住鼠尾巴中下部，用用左手捏住鼠尾巴中下部，用用左手捏住鼠尾巴中下部，用用左手捏住鼠尾巴中下部，用75757575酒
31、精棉球反复擦拭尾部；酒精棉球反复擦拭尾部；酒精棉球反复擦拭尾部；酒精棉球反复擦拭尾部；注射时，以左手拇指和中指注射时，以左手拇指和中指注射时，以左手拇指和中指注射时，以左手拇指和中指捏住鼠尾两侧，用食指从下面托起尾巴，以无名指夹住尾巴的末梢。捏住鼠尾两侧，用食指从下面托起尾巴，以无名指夹住尾巴的末梢。捏住鼠尾两侧，用食指从下面托起尾巴，以无名指夹住尾巴的末梢。捏住鼠尾两侧，用食指从下面托起尾巴，以无名指夹住尾巴的末梢。n n右手持右手持右手持右手持4 4 4 4号号号号针头针头针头针头的注射器，使的注射器，使的注射器，使的注射器，使针头针头针头针头与静脉平行与静脉平行与静脉平行与静脉平行(小于
32、小于小于小于30303030度角度角度角度角)；从鼠尾巴下从鼠尾巴下从鼠尾巴下从鼠尾巴下1/41/41/41/4处进针，处进针，处进针，处进针，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，即可注入药物仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，即可注入药物仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，即可注入药物仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，即可注入药物 n n拔出针头后，用干棉球压住注射部位约拔出针头后，用干棉球压住注射部位约拔出针头后，用干棉球压住注射部位约拔出针头后，用干棉球压住注射部位约l-2minl-2minl-2minl-2min
33、，防止出血，防止出血，防止出血，防止出血n n注射量：小鼠注射量：小鼠注射量：小鼠注射量：小鼠 0.005m10.005m10.005m10.005m10.01 m10.01 m10.01 m10.01 m1g g g g体重。体重。体重。体重。大鼠大鼠大鼠大鼠1.0-2.01.0-2.01.0-2.01.0-2.0 m1m1m1m1100100g g g g体重体重体重体重静脉注射方法步骤第27页，本讲稿共67页n n原理：原理：原理：原理：将药液注入大鼠的腹腔将药液注入大鼠的腹腔将药液注入大鼠的腹腔将药液注入大鼠的腹腔n n器材：器材：器材：器材：注射器注射器注射器注射器1 1 1 1支、
34、生理盐水、烧杯支、生理盐水、烧杯支、生理盐水、烧杯支、生理盐水、烧杯5.腹腔注射给药第28页，本讲稿共67页n n用用用用左左左左手手手手将将将将大大大大鼠鼠鼠鼠捉捉捉捉持持持持保保保保定定定定，使使使使鼠鼠鼠鼠腹腹腹腹部部部部朝朝朝朝上上上上，鼠鼠鼠鼠头头头头略略略略低低低低于于于于尾尾尾尾部部部部；右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺n n针头刺入皮下后进针针头刺入皮下后进针针头刺入皮下后进针针头刺入皮下后进针3mm3mm3mm
35、3mm左右，接着使注射针头与皮肤呈左右，接着使注射针头与皮肤呈左右，接着使注射针头与皮肤呈左右，接着使注射针头与皮肤呈45454545度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失入腹膜腔后抵抗感消失入腹膜腔后抵抗感消失入腹膜腔后抵抗感消失n n固固固固定定定定针针针针头头头头，保保保保持持持持针针针针尖尖尖尖不不不不动动动动，回回回回抽抽抽抽针针针针栓栓栓栓，如如如如无无无无回回回回血血血血、肠肠肠肠液液液液和尿液后即可
36、注射药液和尿液后即可注射药液和尿液后即可注射药液和尿液后即可注射药液n n注射量：注射量：注射量：注射量：0.010.010.010.010.02m10.02m10.02m10.02m1g g g g体重体重体重体重腹腔注射方法步骤第29页，本讲稿共67页n n胸水胸水胸水胸水n n腹水腹水腹水腹水n n消化液消化液消化液消化液n n尿液尿液尿液尿液n n骨髓液骨髓液骨髓液骨髓液n n动物精液动物精液动物精液动物精液n n乳汁乳汁乳汁乳汁五、采集体液第30页，本讲稿共67页n n代谢笼法代谢笼法代谢笼法代谢笼法:此法较常用于大、小鼠，成熟小鼠尿量此法较常用于大、小鼠，成熟小鼠尿量此法较常用于大
37、、小鼠，成熟小鼠尿量此法较常用于大、小鼠，成熟小鼠尿量1-3ml/24h1-3ml/24h1-3ml/24h1-3ml/24h，大，大，大，大鼠为鼠为鼠为鼠为55-75ml/24h55-75ml/24h55-75ml/24h55-75ml/24hn n导尿法：导尿法：导尿法：导尿法：常用于雄兔、犬等动物，要轻度麻醉，可以采到无污染的尿常用于雄兔、犬等动物，要轻度麻醉，可以采到无污染的尿常用于雄兔、犬等动物，要轻度麻醉，可以采到无污染的尿常用于雄兔、犬等动物，要轻度麻醉，可以采到无污染的尿液液液液n n压迫膀胱法：压迫膀胱法：压迫膀胱法：压迫膀胱法：此法适用于兔、猫、犬等大动物此法适用于兔、猫、
38、犬等大动物此法适用于兔、猫、犬等大动物此法适用于兔、猫、犬等大动物n n输尿管插管法输尿管插管法输尿管插管法输尿管插管法n n膀胱插管法膀胱插管法膀胱插管法膀胱插管法n n膀胱穿刺法膀胱穿刺法膀胱穿刺法膀胱穿刺法n n剖腹采尿法剖腹采尿法剖腹采尿法剖腹采尿法n n反射排尿法反射排尿法反射排尿法反射排尿法尿液的采集第31页，本讲稿共67页n n眼眶后静脉丛眼眶后静脉丛眼眶后静脉丛眼眶后静脉丛(窦窦窦窦)取血取血取血取血n n器器器器材材材材：毛毛毛毛细细细细管管管管(玻玻玻玻璃璃璃璃或或或或塑塑塑塑料料料料均均均均可可可可)、1 1 1 1肝肝肝肝素素素素溶溶溶溶液液液液、干燥皿、乙醚、试管、干
39、棉球干燥皿、乙醚、试管、干棉球干燥皿、乙醚、试管、干棉球干燥皿、乙醚、试管、干棉球六、大鼠的采血第32页，本讲稿共67页n n先将毛细管浸泡在先将毛细管浸泡在先将毛细管浸泡在先将毛细管浸泡在1 1 1 1肝素溶液中数分钟，取出干燥备用肝素溶液中数分钟，取出干燥备用肝素溶液中数分钟，取出干燥备用肝素溶液中数分钟，取出干燥备用n n将大鼠进行麻醉，使大鼠保持侧卧位将大鼠进行麻醉，使大鼠保持侧卧位将大鼠进行麻醉，使大鼠保持侧卧位将大鼠进行麻醉，使大鼠保持侧卧位n n左左左左手手手手拇拇拇拇指指指指、食食食食指指指指抓抓抓抓住住住住两两两两鼠鼠鼠鼠耳耳耳耳之之之之间间间间的的的的颈颈颈颈部部部部头头头
40、头皮皮皮皮，并并并并轻轻轻轻轻轻轻轻向向向向下下下下压压压压迫迫迫迫颈颈颈颈部部部部两两两两侧，致大鼠静脉血侧，致大鼠静脉血侧，致大鼠静脉血侧，致大鼠静脉血回流障碍，眼球外突，眶后静脉回流障碍，眼球外突，眶后静脉回流障碍，眼球外突，眶后静脉回流障碍，眼球外突，眶后静脉丛丛丛丛充血充血充血充血n n右右右右手手手手持持持持毛毛毛毛细细细细管管管管由由由由大大大大鼠鼠鼠鼠的的的的目目目目内内内内眦眦眦眦部部部部插插插插入入入入结结结结膜膜膜膜，使使使使毛毛毛毛细细细细管管管管与与与与眶眶眶眶壁壁壁壁平平平平行行行行地地地地向喉头方向推进，深度约向喉头方向推进，深度约向喉头方向推进，深度约向喉头方向
41、推进，深度约3 3 3 35mm5mm5mm5mmn n轻轻旋动毛细管，使其穿破静脉丛，让血流顺毛细管流出轻轻旋动毛细管，使其穿破静脉丛，让血流顺毛细管流出轻轻旋动毛细管，使其穿破静脉丛，让血流顺毛细管流出轻轻旋动毛细管，使其穿破静脉丛，让血流顺毛细管流出n n采血量：采血量：采血量：采血量：0.40.40.40.40.6ml0.6ml0.6ml0.6ml次次次次方法步骤第33页，本讲稿共67页第34页，本讲稿共67页脑立体定位技术脑立体定位技术某些颅外标记与颅内结构具有相对固定的位某些颅外标记与颅内结构具有相对固定的位某些颅外标记与颅内结构具有相对固定的位某些颅外标记与颅内结构具有相对固定的
42、位置关系，确定脑内功能核团的位置置关系，确定脑内功能核团的位置置关系，确定脑内功能核团的位置置关系，确定脑内功能核团的位置核团微量注射核团微量注射核团微量注射核团微量注射电位引导电位引导电位引导电位引导核团的刺激或损毁核团的刺激或损毁核团的刺激或损毁核团的刺激或损毁第35页，本讲稿共67页脑立体定位仪脑立体定位仪第36页，本讲稿共67页脑立体定位仪的调试脑立体定位仪的调试:摆稳定位仪，用水平仪测水平。检验电极移动架上各个轴向滑尺是否保持互相垂直，微量注射器针尖是否光滑垂直。检查定位仪各衔接部位的螺丝有无松动。检查头部固定装置两侧是否对称。检查耳杆使两耳杆尖端相对,以此判定耳杆固定的准确程度。第
43、37页，本讲稿共67页鼠颅的固定鼠颅的固定:将麻醉大鼠置于脑立体定位仪上，鼠颅依靠两耳杆及切牙钩三点固定。脑立体定位仪坐标脑立体定位仪坐标“0”点的测得点的测得:按照Paxinos大鼠脑立体定位图谱，以颅骨前囟即冠矢点作为前后方向的“0”参照点，当微量注射器的针尖对准冠矢点时,读取立体定位仪三维坐标上标尺的数值，此数值即是“0”点坐标。第38页，本讲稿共67页第39页，本讲稿共67页第40页，本讲稿共67页第41页，本讲稿共67页第42页，本讲稿共67页第43页，本讲稿共67页生物信号在体检测遥控系统生物信号在体检测遥控系统第44页，本讲稿共67页第45页，本讲稿共67页Illustratio
44、n of the high fidelity recording provided by the C10 telemeter,which allows for the accurate measurement of pulse pressures in mice despite their high heart rate(10 per second!).第46页，本讲稿共67页Bursts of renal sympathetic nerve activity made in a conscious,freely behaving rat 64 days following telemeter
45、 implantation第47页，本讲稿共67页PowerLab 系统第48页，本讲稿共67页第49页，本讲稿共67页第50页，本讲稿共67页第51页，本讲稿共67页Faraday cageVibration Isolation TableMicroscopeMicro-Manipulators Remote ControllerAmplifiersCCD Camera膜片钳系统膜片钳系统第52页，本讲稿共67页Micro-ManipulatorsDAD-VC systemCCDCamera第53页，本讲稿共67页第54页，本讲稿共67页第55页，本讲稿共67页第56页，本讲稿共67页第57
46、页，本讲稿共67页活体生物发光和荧光成像技术活体生物发光和荧光成像技术第58页，本讲稿共67页5959理想的光源：萤火虫荧光素酶（luciferase）基因、细胞、活体都可被荧光素酶基因标记。活体生物发光成像系统原理活体生物发光成像系统原理遗传学标记实时、原位多波长检测标记癌细胞标记细菌标记转基因鼠第59页，本讲稿共67页6060荧光素酶的表达荧光素酶的表达 将荧光素酶基因连接于启动子下游，稳定整合到细胞染色体内，使荧光素酶得到持续表达。启动子染色体体内表达外源注入底物活跃细胞体内发光第60页，本讲稿共67页6161活体成像技术的主要应用活体成像技术的主要应用n 标记细胞标记细胞 癌症及药物研
47、究癌症及药物研究n 标记病毒标记病毒,DNA,RNADNA,RNA 病毒学及基因治疗病毒学及基因治疗n 转基因动物模型转基因动物模型蛋白质相互作用、代谢、发育、内分泌学，蛋白质相互作用、代谢、发育、内分泌学，等等等等n 标记基因标记基因n siRNAsiRNA研究的应用研究的应用n 干细胞干细胞,免疫免疫n 其它其它n 细胞凋亡细胞凋亡n 组织特异性基因表达组织特异性基因表达n 标记细菌标记细菌第61页，本讲稿共67页6262体内药物分析的生物发光检测1x106 ，PC-3M-Luc肿瘤细胞，皮下注射14天21天28天35天雄性SCID小鼠处理方式 细胞数无治疗对照 2.2x1095-FU治疗
48、 2.8x108丝裂酶素 3.6x106治疗 小鼠#6 n=7 小鼠#40 n=8(从第11天开始给药)小鼠#31 n=8(从第11天开始给药)第62页，本讲稿共67页6363乳腺癌原位接种乳腺癌原位接种PNAS2010,10第63页，本讲稿共67页6464U87 U87 脑胶质瘤成像脑胶质瘤成像 cancer research 2011,8cancer research 2011,8cancer research 2011,8cancer research 2011,8PTAofU87humangliomasinmousebrains.A,representativebioluminescenceimagesofnudemicebearingU87-TGLtumorswithdifferenttreatments(seeMaterialsandMethods).第64页，本讲稿共67页6565肿瘤转移肿瘤转移第65页，本讲稿共67页6666基因治疗载体的构建基因治疗载体的构建AdTSTA-FL的表达活性比AdCMV-FL高100倍以上AdTSTA-FL（107）AdCMV-FL（107）Days 5 7 10 13800600400200500400300200100103105第66页，本讲稿共67页第67页，本讲稿共67页