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1、环境工程微生物实验报告 Final approval draft on November 22,2020环境工程微生物实践（实验）报告环境工程微生物实践（实验）报告实践（实验）项目名称：放线菌形态观察的实验学号实践（实验）地点姓名班级指导老师15-环工马老师化生实验楼实践（实317验）时间一、一、实践目的（实验原理与目的实践目的（实验原理与目的）原理原理：放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝和生长在培养基表面的气生菌丝。有些气生菌丝分化成各种孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等。孢子常呈圆形、椭圆形或杆形。气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为
2、分类的重要依据。目的目的：放线菌自然生长状态的观察二、二、实践内容（实验内容与步骤）实践内容（实验内容与步骤）1.实验准备（一）培养基制作高氏一号培养基：准备可溶性淀粉 10g、硫酸铁 0.25g、硝酸钾 0.5g、琼脂 10g、氯化钠 0.25g、磷酸钾 0.25g、硫酸镁 0.25g、蒸馏水 500ml（二）溶液或试剂10%酚酞液，盛 9ml 无菌水的试管，盛 90ml 无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，4%水琼脂。（三）.仪器无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、无菌培养皿、土样。（四）.流程倒平板制备梯度稀释液涂布培养观察2.操作步骤：（一）来源土壤中放线菌丰富，品种齐全，可以筛选出新的放线菌。
3、我们选择的是从实验室楼下的土壤中取样 10g。（二）培养基的制备1 1、称量和溶化、称量和溶化按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。然后再称取其他各成分，并依次溶化，对微量成分 FeSO4 7 H2 O 可先配成高浓度的贮备 液，按比例换算后再加入。待所有试剂完全溶解后，补充水分到所需的总体积。配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在加热融化，最后补充所损失的水分。2 2、调、调 pHpH用试纸测培养基的原始 PH,如果偏酸，用滴管向培养基中加入 1mol/LNa0H,边滴边搅拌，并随时用 pH
4、试纸测其 pH,直至 pH 达 7.6。反之，用1mol/LHCI 进行调节。3 3、分装和加塞、分装和加塞将配制的培养基装入磨口三角瓶内，在瓶口上塞上橡胶塞。4 4、包扎、包扎加塞后，外包一层报纸，其外再用一根麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。5 5、灭菌、灭菌将上述培养基以 120,20min,0.103MPa 高压蒸汽灭菌。6 6、无菌检查、无菌检查将灭菌培养基放入 25的培养箱中培养 1h，以检查灭菌是否彻底。(三)分离1 1、倒平板、倒平板将高氏 I 号培养基加热熔化待冷却至 55-60c 时倒入培养皿。倒平板的方法：右手持培养基的试管或三角瓶置于火焰旁边。用左手将试
5、管塞或瓶塞拔出，试管口或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基 15ml-20ml，加盖后平置于桌面上，待凝固后即为平板。2 2、制备土壤稀释液、制备土壤稀释液称取土样 10g，去花坛等地方的土样，选好采样地点，除去表层 5cm。用无菌器具规范采样几十克，装入无菌塑料袋扎好。采样后应尽快分离。振摇匀 20min，使土壤与水充分混匀，将细胞分散。放入盛有 90ml 无菌水的三角瓶中，充分混合。用一支 1ml 无菌吸管从三角瓶中吸取 1ml 土壤悬液盛入放有 9ml 无菌水的试管中充分混匀，然后从此试管中吸取 1ml 加入另一盛有 9ml 无菌水的试管中，混合
6、均匀，以此类推，制成 101、102、103、104、105、106共六种不同稀释度的土壤溶液。3 3、涂布、涂布将上述每种的三个平板底面分别用记号笔写上 10、10、10 三种稀释度，然后用无菌吸管分别由 104、105、106三管土壤稀释液中各吸取 0.1ml，小心的滴在对应平板培养基表面中央位置。用无菌涂布器涂布。右手拿无菌涂布器放在平板培养基表面上，将细菌悬液先沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀，室温下静置 5-10min，使菌液浸入培养基。4 4、培养、培养将高氏 I 号培养基平板倒置与 28培养箱中培养 24 h。5 5、挑菌落、挑菌落将培养出的单个菌落分别挑取少许细胞接种到培养基斜面上，置 28温室培养。若发现有杂菌，须再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。三、三、实践工艺流程（实验结果与数据处理）实践工艺流程（实验结果与数据处理）四、四、结果分析（分析与讨论结果分析（分析与讨论）菌落特征培养基菌落形态颜色气味五、五、总结总结。六、六、注意事项注意事项卡那霉素链霉菌卡特利链霉菌高氏一号培养基同心圆放射状表面干燥呈粉状深黄色淡白色土腥味浅黄色卡那霉素链霉菌456教师评语：签名：日期：年月日