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1、南昌大学实验报告南昌大学实验报告实验四实验四微生物数量的测定微生物数量的测定学生姓名：学号：专业班级：实验类型：验证 综合 设计 创新实验日期：实验成绩：一、实验目的：一、实验目的：1 了解血球计数板测定微生物数量的原理；2 了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算；二、实验基本原理：二、实验基本原理：镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌泡子可采用血球计数板；一般细菌则采用彼得罗夫霍泽(Petroff Hausser)细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄
2、，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上有 4 条槽而构成 3 个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个方格网。每个方格网共分 9 大格，其中间的一大格(又称为计数室)常被用作微生物的计数。计数室的刻度有两种：一种是大方格分为 16 个中方格，而每个中方格又分成 25 个小方格；另一种是一个大方格分成 25 个中方格，而每个中方格又分成 16 个小方格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即每个大方格都由 400 个小方格组成。每个大方格边长为 1mm，则每一大方格的面积为 1m
3、m2，每个小方格的面积为 1400mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与计数室底部之间的高度为 0.1mm，所以每个计数室(大方格)的体积为 0.1mm3，每个小方格的体积为 l4000mm3。使用血球计数板直接计数时，先要测定每个小方格(或中方格)中微生物的数量，再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。本方法适用于细胞数较多的样品测定（每毫升 10 10 以上），当样品中的细胞浓56度较低时，须选择其他方法测定，否则因误差太大而影响实验结果。图血球计数板的构造 a.平面图(中间平台分为两半，各刻有一个方格网)b.侧面图(中间平台与盖玻片之间有高度为 0.1 毫米的间隙)血球计数板计数网的
4、分区和分格三、主要仪器设备及耗材：三、主要仪器设备及耗材：显微镜、血球计数板、盖玻片（22mm22mm）、吸水纸、滴管、擦镜纸、酵母菌液四、实验步骤：四、实验步骤：(1)取洁净的血球计数板一块，在计数室上盖上一块盖玻片。(2)将酵母菌液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多)，使菌液沿两玻片间自行渗入计数室，勿使产生气泡，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。也可以将菌液直接滴加在计数室上，然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。(3)静置约 5 分钟，先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察计数。(4)计数时用 16 中格的计数板，要按对角线方位，取左
5、上、左下、右上、右下的4 个中格(即 100 小格)的酵母菌数。如果是 25 中格计数板。除数上述四格外，还需数中央 1中格的酵母菌数(即 80 小格)。由于菌体在计数室中处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，因而观察时必须不断调节微调螺旋，方能数到全部菌体，防止遗漏。如菌体位于中格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。(5)凡酵母菌的芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复分数 2-3 次(每次数值不应相差过大，否则应重新操作)，取其平均值，按下述公式计算出每毫升菌液所含酵母菌细胞数。每毫升菌液含细胞数平均每小格酵母细胞数40010000稀
6、释倍数a、1625 的计数板计算公式：每毫升菌液含细胞数=(100 小格酵母细胞数/100)40010000稀释倍数=4100 小格酵母细胞数104稀释倍数b、2516 的计数板计算公式：每毫升菌液含细胞数=(80 小格酵母细胞数/80)40010000稀释倍数=580 小格酵母细胞数104稀释倍数(6)血球计数板用后，在水龙头上用水柱冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或吹风机吹干。五、实验数据及处理结果五、实验数据及处理结果微生物的显微计数（微生物的显微计数（25251616）1 室2 室123455 中方格总数细胞数/mL六、思考讨论题1、讨论本次实验结果的误差来源七、实验体会及对实验改进的建议