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1、一、培养基中的主要成分及其作用一、培养基中的主要成分及其作用（一）、营养物质（一）、营养物质 N源、源、C源、无机盐、生长因子、水源、无机盐、生长因子、水第一节第一节 培养基培养基1、常用的、常用的N源物质源物质蛋白胨蛋白胨 牛肉膏牛肉膏 肉浸汁肉浸汁 酵母膏酵母膏（1）蛋白胨）蛋白胨有：有：普通蛋白胨普通蛋白胨 示胨示胨 胰蛋白胨胰蛋白胨（2）、牛肉浸液）、牛肉浸液成份：成份：含氮物：含氮物：肌酸、肌酸、嘌吟、核苷酸尿酸肌吟、核苷酸尿酸肌肽等等 糖糖类物物质：葡萄糖、肝糖、：葡萄糖、肝糖、P-已糖已糖 生生长因子：硫胺、核黄素、泛酸、叶酸等因子：硫胺、核黄素、泛酸、叶酸等8种种B族族维生素生
2、素（3）、）、组织浸液浸液 组织浸液，主要为微生物生长繁殖提供可溶性含氮物质、核酸降解物、维生素及无机盐等，补充蛋白胨营养成分的不足部分。包括动物组织浸液、植物组织浸液、微生物细胞浸液。2、糖、醇类物质、糖、醇类物质单糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖单糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖 双糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖双糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖 多糖：淀粉、纤维素、菊糖多糖：淀粉、纤维素、菊糖 醇类：甘露醇、卫茅醇、甘油醇类：甘露醇、卫茅醇、甘油（二）、水（二）、水用蒸馏水，不能用自来水用蒸馏水，不能用自来水（三）、凝固剂（三）、凝固剂l琼脂、明胶、血清等琼脂、明胶、血清等 要求：清一色、杂质少要求：清一
3、色、杂质少（四）、抑制剂（四）、抑制剂1 1、作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的检出率、作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的检出率、作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的检出率、作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的检出率 2 2、种类：、种类：、种类：、种类：盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒酸钠等盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒酸钠等盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒酸钠等盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒酸钠等 染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红染色剂类：
4、煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红 胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸盐盐盐盐 抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素（五）、指示剂
5、（五）、指示剂1 1、作用：用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质、作用：用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质、作用：用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质、作用：用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质和含氮化合物，产酸产碱的能力。和含氮化合物，产酸产碱的能力。和含氮化合物，产酸产碱的能力。和含氮化合物，产酸产碱的能力。2 2、常用的指示剂：、常用的指示剂：、常用的指示剂：、常用的指示剂：酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复红、伊红、美蓝、孔雀绿等红、伊红、美蓝
6、、孔雀绿等红、伊红、美蓝、孔雀绿等红、伊红、美蓝、孔雀绿等二、培养基的类型二、培养基的类型 在实验室中配制的适合微生物生长繁殖或累积代谢产物的任何营养基质，都叫做培养基(Media)。由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多。我们可根据某种标准，将种类繁多的培养基划分为若干类型。l l（一）、根据培养基的物理状态来区分（一）、根据培养基的物理状态来区分固体培养基固体培养基 液体培养基液体培养基 半固体培养基半固体培养基 1 1、液体培养基、液体培养基 主要用于增菌培养、鉴别性培养主要用于增菌培养、鉴别性培养2 2、固体培养基、固体培养基 用作微生物的分离、鉴
7、定、检验杂菌、计用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定等数、保藏、生物测定等 3 3、半固体培养基、半固体培养基 观察微生物的动力，有时用来观察微生物的动力，有时用来保藏菌种。保藏菌种。（二）、根据培养基的用途来区分（二）、根据培养基的用途来区分 l l增殖培养基增殖培养基 l l选择培养基选择培养基 l l鉴别培养基鉴别培养基 1 1、增殖培养基、增殖培养基 在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物，这种培养基速度，逐渐淘汰其它微生物，这种培养基
8、称为增殖培养基。称为增殖培养基。增菌、运送用培养基增菌、运送用培养基B2胆盐乳糖培养基（BL）大肠杆菌增菌B3亚硒酸盐增菌培养基沙门氏菌增菌B4亚硒酸盐半胱氨酸增菌培养基食品中沙门氏菌增菌B5四硫磺酸钠亮绿基础培养基沙门氏菌增菌B6GN肉汤培养基志贺氏菌增菌B7碱性蛋白胨水培养基霍乱弧菌增菌B87.5%氯化钠肉汤培养基金黄色葡萄球菌增菌B9缓冲蛋白胨水培养基沙门氏菌增菌B10血液增菌培养基血液中细菌增菌B11SCDLP液体基础培养基化妆品中细菌增菌2 2、选择培养基培养基 l l在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长的培养基，称之为选择培养基。分离培养用的培养基分离培养用的培养基名
9、名称称 用用 途途SSSS琼脂培养基琼脂培养基 沙门氏和志贺氏菌属分离沙门氏和志贺氏菌属分离HEHE琼脂培养基琼脂培养基志贺氏菌分离鉴别志贺氏菌分离鉴别伊红美蓝琼脂培养基伊红美蓝琼脂培养基 大肠杆菌、产气杆菌分离鉴别大肠杆菌、产气杆菌分离鉴别麦康凯琼脂培养基（麦康凯琼脂培养基（MacCMacC）肠道致病菌分离肠道致病菌分离甘露醇高盐琼脂培养基）甘露醇高盐琼脂培养基）绿脓杆菌分离鉴别绿脓杆菌分离鉴别XLDXLD琼脂培养基琼脂培养基志贺氏、沙门氏菌分离志贺氏、沙门氏菌分离中国蓝琼脂培养基中国蓝琼脂培养基肠道菌分离鉴别肠道菌分离鉴别碱性琼脂培养基碱性琼脂培养基霍乱弧菌分离霍乱弧菌分离高盐蔡氏琼脂培养
10、基高盐蔡氏琼脂培养基真菌、酵母菌分离真菌、酵母菌分离3 3、鉴别培养基培养基 l l在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助开快速鉴别某种微生物。这样的培养基称之为鉴开快速鉴别某种微生物。这样的培养基称之为鉴开快速鉴别某种微生物。这样的培养基称之为鉴开快速鉴别某种微生物。这样的培养基称之为鉴别培养基。别
11、培养基。别培养基。别培养基。鉴别用培养基鉴别用培养基名名名名 称称称称用用用用 途途途途蛋白胨水培养基蛋白胨水培养基蛋白胨水培养基蛋白胨水培养基靛基质和霍乱红试验靛基质和霍乱红试验靛基质和霍乱红试验靛基质和霍乱红试验乳糖胆盐发酵培养基乳糖胆盐发酵培养基乳糖胆盐发酵培养基乳糖胆盐发酵培养基大肠杆菌发酵乳糖试验大肠杆菌发酵乳糖试验大肠杆菌发酵乳糖试验大肠杆菌发酵乳糖试验0.5%0.5%0.5%0.5%乳糖乳糖乳糖乳糖发发酵培养基酵培养基酵培养基酵培养基肠道菌生化试验（复发酵）肠道菌生化试验（复发酵）肠道菌生化试验（复发酵）肠道菌生化试验（复发酵）半固体培养基半固体培养基半固体培养基半固体培养基动力
12、试验和菌种保存动力试验和菌种保存动力试验和菌种保存动力试验和菌种保存三糖铁琼脂培养基（三糖铁琼脂培养基（三糖铁琼脂培养基（三糖铁琼脂培养基（TSTTSTTSTTST）肠杆菌糖发酵及硫化氢反应肠杆菌糖发酵及硫化氢反应肠杆菌糖发酵及硫化氢反应肠杆菌糖发酵及硫化氢反应氰化钾基础培养基氰化钾基础培养基氰化钾基础培养基氰化钾基础培养基沙门氏菌分离沙门氏菌分离沙门氏菌分离沙门氏菌分离脱羧酶试验对照培养基脱羧酶试验对照培养基脱羧酶试验对照培养基脱羧酶试验对照培养基细菌脱羧酶试验细菌脱羧酶试验细菌脱羧酶试验细菌脱羧酶试验（三）培养基制备的基本方法和注意事项（三）培养基制备的基本方法和注意事项 l l培养基的制
13、备记录培养基的制备记录 l l培养基成分的称取培养基成分的称取 l l培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化 l l培养基培养基pHpH的初步调正的初步调正 l l培养基的过滤澄清培养基的过滤澄清 l l培养基的分装培养基的分装 l l培养基的灭菌培养基的灭菌 l l培养基的质量测试培养基的质量测试 l l培养基的保存培养基的保存 1 1、培养基的制、培养基的制备记录 每次制备培养基均应有记录，包括培养基名称，配方及每次制备培养基均应有记录，包括培养基名称，配方及每次制备培养基均应有记录，包括培养基名称，配方及每次制备培养基均应有记录，包括培养基名称，配方及其来源，和各种成份的牌号，
14、最终其来源，和各种成份的牌号，最终其来源，和各种成份的牌号，最终其来源，和各种成份的牌号，最终pHpHpHpH值、消毒的温度和时值、消毒的温度和时值、消毒的温度和时值、消毒的温度和时间制备的日期和制备者等。间制备的日期和制备者等。间制备的日期和制备者等。间制备的日期和制备者等。记录应记录应复制一份，原复制一份，原复制一份，原复制一份，原记记录录保存保存保存保存备查备查，复制，复制，复制，复制记录记录随制好的随制好的随制好的随制好的培养基一同存放、以防发培养基一同存放、以防发培养基一同存放、以防发培养基一同存放、以防发生混乱。生混乱。生混乱。生混乱。l l 2 2、培养基成分的称取、培养基成分的
15、称取培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上面做出记号，并将所需称取的药品一次取成分即在配方上面做出记号，并将所需称取的药品一次取成分即在配方上面做出记号，并将所需称取的药品一次取成分即在配方上面做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，
16、置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后，还应进行一次检查。取完毕后，还应进行一次检查。取完毕后，还应进行一次检查。取完毕后，还应进行一次检查。l l 3 3、培养基各成份的混合和溶化、培养基各成份的混合和溶化指示剂应在调节好指示剂应在调节好PHPH值后再加入；值后再加入；煮溶后要煮溶后要补加足水份；加足水份；不能把培养基煮焦，焦化的不能使用不能把培养基煮焦，焦化的不能使用。4 4、培养基、培养基pHpH的校正的校正 灭菌后灭菌后P
17、HPH值会下降值会下降0.10.10.20.2，在做培养基校正在做培养基校正PHPH值时，应比实际值时，应比实际值高值高0.10.10.20.2；PHPH调整后，整后，还应将培养基煮沸。将培养基煮沸。5 5、培养基的、培养基的过滤澄清澄清 l l液体培养基可用滤纸过滤法液体培养基可用滤纸过滤法液体培养基可用滤纸过滤法液体培养基可用滤纸过滤法 l l 琼脂培养基琼脂培养基琼脂培养基琼脂培养基,可用中间夹有薄层吸水棉可用中间夹有薄层吸水棉可用中间夹有薄层吸水棉可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤的双层纱布过滤的双层纱布过滤的双层纱布过滤、培养基的分装、培养基的分装斜面：斜面：1/管管 半固体培养基
18、：半固体培养基：1/3管管 高层斜面：高层斜面：1/41/3管管 平板：平板：1315ml7 7、培养基的、培养基的灭菌菌（1）含糖类或明胶的培养基：）含糖类或明胶的培养基：113灭菌灭菌15分钟或分钟或115灭菌灭菌10分钟。分钟。（2）无糖培养基：）无糖培养基：121灭菌灭菌1520分钟。分钟。（3）血液、体液和抗生素等以无菌操作技血液、体液和抗生素等以无菌操作技术抽取后再加入冷却至约术抽取后再加入冷却至约50左右的培养左右的培养基中。基中。（4）琼脂斜面培养基应在灭菌后冷至琼脂斜面培养基应在灭菌后冷至55-60时取出，再摆置成适当斜面。时取出，再摆置成适当斜面。8 8、培养基的、培养基的
19、质量量测试（）如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培（）如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培（）如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培（）如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终pHpH。（）将全部培养基放入（）将全部培养基放入（）将全部培养基放入（）将全部培养基放入36361 1C C恒温箱培养过夜，如恒温箱培养过夜，如恒温箱培养过夜，如恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。发现有菌生长，即弃去。发现有菌生长，即弃去。发现有菌生长，
20、即弃去。（）用有关的标准菌株接种（）用有关的标准菌株接种（）用有关的标准菌株接种（）用有关的标准菌株接种1212管或瓶培养基，培管或瓶培养基，培管或瓶培养基，培管或瓶培养基，培养养养养2424242448484848小时，如无菌生长或生长不好。应追查小时，如无菌生长或生长不好。应追查小时，如无菌生长或生长不好。应追查小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。养基即应弃去，不能使用。养基即应弃去，不能使用。养基即应
21、弃去，不能使用。9 9、培养基的保存、培养基的保存 （1 1）基础培养基不能超过两周）基础培养基不能超过两周 （2 2）生化试验培养基不宜超过一周，）生化试验培养基不宜超过一周，（3 3）选择性或鉴别性培养最好当天使用，）选择性或鉴别性培养最好当天使用，倾注的平板培养基不宜超过倾注的平板培养基不宜超过3天。天。培养基配制器材培养基、玻璃器皿天平秤、药匙培养基配制仪器杀菌锅(Autoclave)无菌操作台(Laminarflow)培养基的配制装水1.以量筒量筒装取适当量蒸蒸馏馏水水于玻璃容器中2.于玻璃容器上标示培养基名称培养基配制秤药1.放上秤药纸並归零归零 2.以秤药匙舀出适当量药品(请看培
22、养基配方上說明)培养基配制溶解培养基傾倒培养基時小心不要沾到玻璃壁上注意事項配药结束1.清理配药桌面与天平2.清洗秤药匙，擦干放回3.药品放回药品柜培养基配制分装1.调整分注器分注器(Dispensette)刻度2.分装试管3.盖上试管盖放入杀菌锅杀菌锅(Autoclave)灭菌培养基配制灭菌加水盖过铁板放东西关门调整温度时间关紧泻压伐注意事項杀菌锅的使用注意事項杀菌锅使用灭菌结束后，等压力降回零压力降回零时才可打开门进入杀菌锅之物品，盖子不可关太紧或太松注意事項杀菌锅使用拿灭菌后物品请记得带耐热手套培养基配制平板培养基灭过菌之固体培养基于无菌操作台无菌操作台(Laminar flow)內倒制
23、平板培养基(Plate)日光燈UV燈風扇思考题1、加入培养基中的抑制剂有什么作用，常用的、加入培养基中的抑制剂有什么作用，常用的抑制剂有哪些？抑制剂有哪些？2 2、在制、在制备培养基培养基时，将各成，将各成份溶化份溶化时要注意哪要注意哪些问题？些问题？3 3、在制、在制备培养培养基基时，如何，如何进行培养基行培养基pHpH的初步的初步调正？调正？4 4、如何、如何选择培养基的培养基的灭菌条件？菌条件？5 5、如何、如何进行培养基的保存？行培养基的保存？第二节、微生物检验的基本操作技术第二节、微生物检验的基本操作技术主要内容主要内容l l无菌技术l lM的接种与分离技术l l微生物的培养方法l
24、l微生物的生长现象与观察一、无菌技术一、无菌技术（一）什么是无菌技术（一）什么是无菌技术l l指在微生物实验工作中，控制或指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。系列操作方法和有关措施。（二）无菌环境（二）无菌环境l无菌室无菌室 l无菌柜无菌柜 l超净工作台超净工作台1、无菌室、无菌室（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间（2）无菌室的消毒和防污染无菌室的消毒和防污染l l每日（使用前）紫外线照射（每日（使用前）紫外线照射（12小时）小时）.l l每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸
25、（每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）小时）.l l每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。行消毒。2、超净工作台、超净工作台超净台的使用与保养超净台的使用与保养:（1）风速保持在）风速保持在0.32-0.48米米/秒秒;（2）使用前开启紫外灯照射）使用前开启紫外灯照射30分钟以上分钟以上;（3）让超净台预工作）让超净台预工作1015分钟分钟;（4）使用完毕后，用）使用完毕后，用70%酒精将台面和台内酒精将台面和台内四周擦拭干净四周擦拭干净.（三）无菌器材（三）无菌器材l l灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣
26、等等.l l消毒器材：无菌室内的凳子、试管架、消毒器材：无菌室内的凳子、试管架、天平、工作台、手等天平、工作台、手等（四）无菌操作（四）无菌操作1、目的：、目的：（1）是保证待检物品不被环境中微生物的）是保证待检物品不被环境中微生物的污染；污染；（2）是防止被检微生物在操作中污染环境）是防止被检微生物在操作中污染环境或感染操作人员。或感染操作人员。2、进入无菌室前的准备、进入无菌室前的准备（1）、定期检查无菌环境的空气是否符合规）、定期检查无菌环境的空气是否符合规定；定；（2）、用紫外线灭菌处理）、用紫外线灭菌处理3060分钟；分钟；（3）、检查无菌器材是否完备；）、检查无菌器材是否完备；（4
27、）、洗手消毒；）、洗手消毒；（5）、手部消毒后，再穿戴无菌工作服。）、手部消毒后，再穿戴无菌工作服。3、检验操作过程的无菌操作要求（1）、在操作中不应有大幅度或快速的动作；）、在操作中不应有大幅度或快速的动作；（2）、使用玻璃器皿应轻取轻放。）、使用玻璃器皿应轻取轻放。（3）、在正火焰上方操作；）、在正火焰上方操作；（4）、接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌；）、接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌；（5）、在接种培养物时，协作应轻、准）、在接种培养物时，协作应轻、准。（6）、致病菌不能用嘴直接吸吹吸管。）、致病菌不能用嘴直接吸吹吸管。（7）、）、带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于带有菌液的吸
28、管、玻片等器材应及时置于盛有盛有5%5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。来苏尔溶液的消毒桶内消毒。l l 无菌操作无菌操作无菌操作无菌操作斜面接种时的无菌操作(1)接种灭菌(2)开启棉塞(3)管口灭菌(4)挑起菌苔(5)接种(6)塞好棉塞1.接种环前端铁丝部分以酒精灯烧红烧红灭灭菌菌，后端铁棒部分过火无菌操作取菌技巧12.试管前端过火3.打开试管盖无菌操作取菌技巧14.试管傾斜傾斜，放入接种环无菌操作取菌技巧15.试管前端过火，盖上试管盖6.接种环烧红灭菌无菌操作取菌技巧12.自Plate上取单一菌落(方法一：盖子微开遮住培养基，避免空气中菌体掉入)(方法二：plate反面拿起)无无菌操作菌操作 取
29、菌技巧取菌技巧 2 1.挤出安全吸安全吸球球內空气，插上灭过菌之玻璃吸管2.向上为吸，向下为放无菌操作取菌技巧31.调整Pipetman刻度(P1000吸取范围2001000l)2.插上灭过菌之Tip(用力插紧)无菌操作取菌技巧43.按钮压至第一段(不可压至最底)4.深入液面下24mm无菌操作取菌技巧45.慢慢释放按钮，即可吸取液体无菌操作取菌技巧4操作时离火源遙远试管直放，空气中菌体容易掉入无菌操作错误示范无菌操作错误示范安全吸球倒放，菌液容易流入吸球內安全吸球隨意放置桌面，菌液容易流出至桌上无菌操作错误示范Pipetman倒放，菌液容易流入Pipetman內注意事項生物性废弃物生物性废弃物
30、生物性废弃物放至正确位置以便灭菌二、微生物的接种与分离技术二、微生物的接种与分离技术（一）、接种（一）、接种l l将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。体内的过程叫做接种。、接种工具和方法、接种工具和方法接种和分离工具接种和分离工具 1 1接种接种针针 2.2.接种接种环环 3.3.接种接种钩钩 4.5.4.5.玻璃涂棒玻璃涂棒 6.6.接种圈接种圈 7.7.接种接种锄锄 8.8.小解剖刀小解剖刀 常用的接种方法有以下几种：）划线接种）划线接种）三点接种）三点接种）穿刺接种）穿刺接种）浇混接种）浇混接种）涂布接种
31、）涂布接种）液体接种）液体接种）注射接种）注射接种）活体接种）活体接种l l(二二)、分离、分离纯化化、倾注平板法、倾注平板法、涂布平板法、涂布平板法倾注平板法（a）涂布平板法（b）图解1.菌悬液2.熔化的培养基3.培养物4.无菌水、平板划线法、平板划线法平板划线分离法1.斜线法2.曲线法3.方格法4.放射法5.四格法 平板划线法：平板划线法：1、倒平板，标记培养基名称，编号和实验日期。、倒平板，标记培养基名称，编号和实验日期。2、划线方法、划线方法 稀释混合平板法稀释混合平板法：1、先加菌、先加菌 2、倒平板时注意培养基温度、倒平板时注意培养基温度 3、混合均匀、混合均匀 三、微生物的培养方
32、法三、微生物的培养方法l l一般培养法（需氧培养）一般培养法（需氧培养）l l厌氧培养法厌氧培养法 l lCO2培养法培养法（一）、一般培养法（需氧培养）（一）、一般培养法（需氧培养）培养温度培养温度:2537（二）、厌氧培养方法（二）、厌氧培养方法1、简易的厌氧培养法：、简易的厌氧培养法：（1）庖肉培养法）庖肉培养法（2）铁丝圈厌氧培养法）铁丝圈厌氧培养法（3）焦性没食子酸法）焦性没食子酸法 2、厌氧罐法、厌氧罐法 3、厌氧手套箱法、厌氧手套箱法A、厌氧缸法厌氧缸法l l厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培法使缸内造成厌
33、氧环境，从而将厌氧菌培养出来。养出来。l l接种好标本的平板或液体培养基试管，可接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养。放入厌氧缸内培养。B、厌氧罐法、厌氧罐法使用：l l装入待培养的对象，然后密闭罐盖，接着可装入待培养的对象，然后密闭罐盖，接着可采用抽真空采用抽真空灌氮灌氮抽真空抽真空灌氮灌氮抽真空抽真空灌混合气灌混合气(N2 CO2 H2=80 10 10，V/V)。C、厌氧手套箱、厌氧手套箱（三）、二氧化碳培养法（三）、二氧化碳培养法1、烛缸法：2、二氧化碳置換法3、化学法：每一升用重碳酸钠0.4克与浓盐酸0.35亳升加入4、二氧化碳培养箱法二氧化碳培养箱二氧化碳培养箱二氧
34、化碳培养法二氧化碳培养法四、四、微生物微生物培养特性观察培养特性观察与记录与记录在固体培养基上，观察：在固体培养基上，观察：菌落大小、形菌落大小、形菌落大小、形菌落大小、形态态、颜颜色（色素是水溶性色（色素是水溶性色（色素是水溶性色（色素是水溶性还还是脂溶是脂溶是脂溶是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等；及迁移性等；及迁移性等；及迁移性等；在液体培养中：在液体培养中：表面生表面生长情况（菌膜、情况（菌膜、环）混）混浊度及沉淀等。度及
35、沉淀等。半固体培养基穿刺接种：半固体培养基穿刺接种：观察运察运动、扩散情况。散情况。1.点状 2.圆形 3.丝状 4.不规则形 5.假根状 6.纺锤状 7.扁平 8.隆起 9.凸起 10.垫状 11.脐状 12.边缘整齐 13.波状 14.裂片状 15.啮蚀状 16.丝状 17.卷发状 18.丝线状 19.刺毛状 20.串珠状 21.疏展状 22.树根状 23.假根状 24.丝状 25.串珠状 26.乳头状 27.绒毛状 28.树根状 29.量杯状 30.萝卜状 31.漏斗状 32.囊状 33.层状 34.絮状 35.环状 36.蹼状 37.膜状检验程序检验程序检样处理检样处理检样稀释检样稀释平板接种培养平板接种培养计数报告计数报告无菌取样无菌取样样品均质样品均质样品接种样品接种恒温培养恒温培养结果观察结果观察样液稀释样液稀释思考题 1、什么是无菌技术？、什么是无菌技术？2 2、如何做好、如何做好无菌室的消毒和防污染工作？无菌室的消毒和防污染工作？3 3、如何做好、如何做好超净台的使用与保养？超净台的使用与保养？4、无菌操作的目的是什么？、无菌操作的目的是什么？5、进入无菌室前要做好哪些准备工作？、进入无菌室前要做好哪些准备工作？6、验操作过程的无菌操作要求包括哪些内容？、验操作过程的无菌操作要求包括哪些内容？