《14增殖资源学实验指导2011.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《14增殖资源学实验指导2011.ppt（33页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、增殖资源学实验指导增殖资源学实验指导教学目标与基本要求 l通过实验掌握增殖水域叶绿素a测定方法、认识常见增殖动物各阶段幼体形态，学习鱼类的临界游泳速度的测定方法，掌握鱼类等增殖对象标志方法，认识鱼类等增殖动物对阴影与岩礁的行为反应，以及增殖对象种群增殖规律。实验内容与安排实验内容与安排l实验一 增殖水域叶绿素a测定 l实验二 增殖动物早期发育与幼体阶段 形态观察 l实验三 鱼类的临界游泳速度的测定l实验四 增殖动物标志方法实践l实验五 鱼类对阴影与黑板的反应行为 的观察 实验一实验一 增殖水域叶绿素增殖水域叶绿素a a测定测定l实验目的：通过本实验让学生掌握增殖水域中叶绿素a常用测定方法分光光
2、度法。l实验原理：以有机溶剂直接提取浮游生物浓缩样中的叶绿素，测定其吸光度，根据叶绿素a在特定波长的吸收，用公式计算其含量。实验仪器与试剂l过滤装置：过滤器、微孔滤膜（50mm，孔径0.45m）、真空泵 l台式医用离心机（最大转速4000r/min）l研钵 l分光光度计（UNIC 7200）及比色皿 l碳酸镁粉末 l95乙醇溶液测样的制备（一）l浓缩：用50mm的微孔滤膜过滤浓缩混匀的适量水样，过滤前加入0.2ml 1（g/ml）碳酸镁悬浮液，水样抽完后，继续抽12min，以减少滤膜上的水分 l提取：将载有浓缩样的滤膜放入有螺帽的离心管中，加入5ml 95%乙醇溶液，再加少许碳酸镁粉末入离心管
3、中，使总体积不超过10ml，盖上管塞，充分振摇后置于常温下暗处820h备用。测样的制备（二）l离心：将离心管放入离心机中，以4000r/min的速度离心10min后，把上清液移入10ml比色管中，加入少量95乙醇溶液于原提取的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心合并上清液，此操作重复23次，直至沉淀物不含色素为止，最后将上清液定容至10ml。叶绿素a的测定l取上清液于1cm或5cm的比色皿中，以95乙醇溶液作参比，读取波长750、663、645和630nm处的吸光度，选择比色皿的光程长度或稀释度，使OD663大于0.2，小于1.0。叶绿素a的计算l根据叶绿素a在特定波长的吸收，用以下公式计算叶绿素a
4、的浓度。l式中：为叶绿素a的浓度（mg/L）；V1为提取液的定容体积（ml）；V2为过滤水样的体积（L）；L为比色皿光程长度（cm）；D为从各波长的吸光度减去750nm处吸光度的校正过的提取液吸光度 实验二 增殖动物早期发育与 幼体阶段形态观察 l实验目的：通过本实验观察让学生了解常见增殖动物的早期发育过程，以及它们各阶段幼体的形态特征，从而掌握常见增殖动物的变态发育过程。l实验材料：中国对虾、三疣梭子蟹、海蜇、刺参等受精卵、胚细胞、各阶段幼体的福尔马林固定标本。l实验仪器：显微镜、解剖镜、解剖针、吸管等 实验内容l观察刺参的胚细胞与各阶段幼体的形态特征；l观察对虾的胚细胞与各阶段幼体的形态特
5、征；l观察三疣梭子蟹的胚细胞与各阶段幼体的形态特征；l观察海蜇的胚细胞与各阶段幼体的形态特征 刺参胚胎与幼体发育图1.2细胞；细胞；2.4细胞；细胞；3.8细胞；细胞；4.16细胞；细胞；5.原肠胚；原肠胚；6.初耳幼体初耳幼体刺参胚胎与幼体发育图7.初耳幼体侧面观；初耳幼体侧面观；8.樽形幼体；樽形幼体；9.五触手幼体；五触手幼体；10.大耳幼体；大耳幼体；11.稚参稚参实验三 鱼类的临界游泳速度的测定 l实验目的：通过本实验让学生了解测定鱼类游泳速度的常用方法，掌握测定鱼类临界游泳速度的Brett法，以了解鱼类的趋流性。实验原理l利用鱼的趋流性，将实验鱼放入水槽或水道中，利用流动的水流迫使
6、鱼在不同的流速下进行游动。以指定的增量按预定的时段对水槽中水流的提速。当实验鱼在新流速下持续稳定游完预定的时间后，再以指定的速度增量提高水流速度，进行下一个时间段的游泳实验。经过几次加速以后，实验鱼疲劳至不能继续稳定游动，最后被冲到水槽观察室后端的网栅上。实验原理（续）l巡航速度根据Brett公式计算如下：Ucrit=Ui+Uii(Ti/Tii)l式中，Ui为鱼类能够游完整个预定时段的最高速度，单位为cm/s；Uii为指定的速度增量，单位为cm/s；Ti为鱼在最后疲劳速度上游动的时间，单位为min；Tii预先指定的时间长度，单位为min。巡航速度可以表示为以cm/s为单位的绝对值，也可以表示成
7、为以BL/S为单位的相对值。实验装置与仪器 l垂直循环回流水槽，流速仪，电子称，直尺 实验操作步骤 l取实验鱼放置到垂直循环水槽观察槽中，以较低的水流速度（0.51BL/S）让鱼适应水槽环境30-60min。l按照指定的Uii、Tii开始实验测定，使鱼在此水流速度下稳定顶流游动30分钟；l继续提高水流速度，然后再次计时，直到鱼疲劳不能游动，被冲到水槽观察室后部的网栅上。l记录此时的Ui和Ti，根据Brett公式计算得出最大巡航游泳速度值。实验四 增殖动物的标志方法 l实验目的：了解常见的增殖动物的标志方法，掌握手动注射人工硅胶萤光标记方法。l实验原理：有形注射人工硅胶标签是一种注射植入生物透明
8、或半透明组织内部但是从体外依然清晰可见的标签。在使用这种人工硅胶标签时，先将两种有机硅材料混合成一种混合液体，然后将这种液体立即注入被标记生物的组织内，液体就会很快凝固形成一种柔软的固体物质，起到标记该生物的作用。实验材料、试剂与器材l实验材料：中国对虾幼虾（4-6cm）l试剂：6种萤光色（红、橙、绿、黄、粉、蓝），4种非萤光色（棕色、黑色、紫色、白色），固化剂（硅胶）l器材：注射器（1ml，0.3ml），混合杯，人工硅胶手动注射管，可变间隔光源灯，标准比色卡。标志原料混合方法（一）（一）l为了使原料混合后能达到理想的效果，我们在操作时必须要把两种原料（有色原料和固化剂）按照10：1的比例均匀
9、混合。l第一步：把装有有色原料的注射器的黑帽拔下，按照注射器上的刻度，按所需量将原料从注射器中注入混合杯中，然后把黑帽重新安放在注射器上。标志原料混合方法（二）（二）l第二步：把装有固化剂的注射器的黑帽拔下，按照注射器上的刻度，释放出相当于有色原料1/10量的固化剂于混合杯中，使其与有色原料混合。l第三步：彻底搅拌使有色原料和固化剂混合均匀。搅拌并且刮擦杯壁和杯底一分钟整，但也不要搅拌过长，以确保各种物质能完全混合。混合均匀以后，混合物在一小时之内（视温度而定）可以被使用注射器注射进入生物体内来做标记。标志原料混合方法（三）（三）l第四步：把一个0.3毫升的注射器针帽摘掉，拔下活塞。使用一个新
10、的1毫升的注射器慢慢的从混合杯中吸取少量原料混合液，接着拔掉这个注射器的针头。1毫升注射器的针管前端恰好能紧紧的插入0.3毫升注射器针管的尾部。用1毫升注射器向0.3毫升的注射器中注入1/3左右的混合液。把这些装载了混合液的0.3毫升注射器放在冰块中或冰箱里，以延长注射器中混合液的可以等待被注射进生物体的时间。标志原料混合方法（四）（四）l第五步：把注射器的活塞重新安装在0.3毫升的注射器上，拔下覆盖在针头上的橙红色针帽。推动活塞，直到针尖上出现一小滴混合液。然后把这些注射器安装到人工硅胶手动注射管内，接着把人工硅胶手动注射管放在合适的位置就行了。手动注射人工硅胶荧光标记 l使用者可以将针头斜
11、刺插入到所希望注射标记的位置，然后一边把针头向外慢慢的抽出一边将人工硅胶注入组织内。在注射时，使用者应随手携带一块海绵或纸巾以方便在每次注射完后擦掉针头上多余的人工硅胶。l在标记注射过程中应该注意在将针头完全抽出组织之前就要停止注入人工硅胶，以避免人工硅胶从针头刺入的伤口中流出堵塞伤口，使伤口无法愈合从而增加了被标记生物的死亡概率，导致标记实验结果不准确。任何一点从伤口流出的人工硅胶都应该被轻轻的沿着标记的方向擦去。标记的检测方法 l虽然有形注射人工硅胶标记通常能在阳光或室内光线下被肉眼观察到，但是通过可变间隔光学技术（VI Light），标记的可视性会更大的提高。这种技术可以在不需要滤光器的
12、条件下使绿、黄、橙、红、粉、蓝色标记闪现更明显的荧光。在这种情况下，一个很小的标记可以在相当大的距离上被看到。在自然光线下模糊的标记也会变得十分醒目。使标记的检测达到最佳效果的措施l选择明显的颜色作为标记色l尽可能选择容易观察的组织进行标记l适当驯化你所标记的动物，让它们习惯带着标记生活l使用标准比色卡正确的辨别颜色l对于比较模糊的标记，应该在可变间隔光学技术下进行荧光观察 可变间隔光学技术的使用 l打开可变间隔光源灯，调整它使其不再闪烁。在使用时，将光线直接对准标记所在处或是你认为的标记所在处。如果在阳光下操作，应该找个阴凉处观察，或用身体遮挡出的阴影也足够了，对于比较模糊的标记最好在黑暗处
13、进行荧光观察。实验五 鱼类趋礁行为反应的观察 l实验目的：通过本实验观察鱼类对礁体的行为反应，测定实验对象对礁体的反应率，以推断实验对象产生聚礁行为的可能性大小。l实验原理：鱼类是凭借视觉、听觉、嗅觉以及对流态变化的感觉来感知鱼礁或其他物体的存在；另一方面，鱼礁也给予鱼类以不同的刺激，诸如视觉、音波、接触和流的刺激等。本实验通过对象鱼对礁体反应行为，模拟鱼对鱼礁的视觉刺激反应。实验材料、设施与设备l实验材料：条石鲷（体长35cm左右），三角形和正方形鱼礁模型。l实验设施与设备：圆形水槽（3m3），数码相机，摄像机。阴影实验操作步骤 l实验用鱼需经1周的室内暂养适应l将经过室内适应性暂养的鱼放入实验水槽中，待鱼稳定后，观测鱼群散布特征，并拍照；l放置1三角形鱼礁模型，然后观察记录鱼群分布特征，以及在礁内和周边滞留的尾次与时间长短，同时进行拍照与录像用以试验结束后的行为分析，该实验持续30min.。l更换正方形鱼礁模型再重复上述实验过程3次。黑板实验操作步骤l实验用鱼需经1周的室内暂养适应l将经过室内适应性暂养的鱼放入实验水槽中，待鱼稳定后，依次向水槽底部放置不同规格的黑板，观测记录鱼类对黑板的反应，同时进行拍照与录像。每次实验持续30min.。共放置5种规格黑板进行实验。数据处理与实验报告 l分析实验记录，计算反应率：l反应率产生反应鱼尾数/参与实验鱼总尾数100l撰写实验报告。