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1、实验九 过氧化氢酶的活性测定过氧化氢酶的活性测定紫外吸收法紫外吸收法v原原理：理：v H2O2在在240nm波长下有强烈吸收，过氧化波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。材料与设备 实验材料实验材料:海桐叶海桐叶实实验验器器材材：紫紫外外分分光光光光度度计计；离离心心机机；研研钵钵；0.5ml刻刻度度吸吸管管2支支，2ml刻刻度度吸吸管管1支支；10ml试管试管3支；恒温水浴；支；恒温水浴；
2、试试 剂剂：O.1mol/LO.1mol/L过过氧氧化化氢氢；，0.1mo1/L0.1mo1/L磷磷酸酸缓冲液缓冲液,pH7.0pH7.0、pH7.8 pH7.8 操作步骤：1 1 称称 取取 植植 物物 材材 料料 0.30.3g g，加加 入入，0.1mo1/L0.1mo1/L磷磷酸酸缓缓冲冲液液 (pH7.0)(pH7.0)6ml(6ml(分分三三次次加加入入，最最后后两两次次用用于于洗洗研研钵钵)，在在研研钵钵中中研研磨磨成成匀匀浆浆，以以 6000r6000rmin min 离离心心1515分分钟钟，倾倾出上清液出上清液(即为粗酶液即为粗酶液)。操作步骤：2.测测定定：取取10ml试
3、试管管支支，按按下下表表顺顺序序加加入入试试剂。剂。紫外吸收法紫外吸收法测测定定H H2 2O O2 2样样品液配置表品液配置表管 号S1粗酶液(ml)0.2pH7.8 PBS(ml)1.5蒸馏水(ml)1.0操作步骤：3 3测定测定v逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，加完立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测2min，记录数据。4.按下式计算酶活性。结结果果计计算：算：以以1min1min内内A A240240减少减少0.10.1的的酶酶量量为为1 1个个酶酶活活单单位（位（u u）。）。过过氧化氧化氢氢酶酶活性活性(u/gFW/min)=(u/gFW/min)=Vt粗酶提取液总体积（粗酶提取液总体积（ml）；）；V1测定用粗酶液体积（测定用粗酶液体积（ml）；）；FW样品鲜重（样品鲜重（g）；）；0.1A240每下降每下降0.1为为1个酶活单位（个酶活单位（u）；）；t加过氧化氢到最后一次读数时间加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。）。作 业：1.写实验报告写实验报告2.问题：问题：（1）影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些）影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些?（2）过氧化氢酶与哪些生化过程有关）过氧化氢酶与哪些生化过程有关?