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1、上课啦上课啦临临 床床 检检 验验 基基 础础clinical laboratory technologyclinical laboratory technology 临床检验的概念临床检验的概念 临床检验的发展简史临床检验的发展简史 临床检验在医学中的作用临床检验在医学中的作用 学习临床检验基础的目的和要求学习临床检验基础的目的和要求 绪绪 论论 INTRODUCTIONINTRODUCTION 一、概念（一、概念（Concept or Definition)Concept or Definition)医学检验学中的重要分支，医学检验学中的重要分支，医学检验专业的主干课程之一医学检验专业的主
2、干课程之一“临床检验学临床检验学”“临床检验基础临床检验基础”RickRick于于19861986曾撰写曾撰写 “医学显微镜技术医学显微镜技术(medical microscopy)(medical microscopy)”19951995年卫生部会议（青岛）年卫生部会议（青岛）专家们推荐使用专家们推荐使用“临床基础检验学临床基础检验学”临床检验基础临床检验基础n借助先进的检测技术，对来自离体的血液、尿借助先进的检测技术，对来自离体的血液、尿液、粪便以及分泌物和排泄物等标本进行理学、液、粪便以及分泌物和排泄物等标本进行理学、化学、病原学和显微镜形态学的检查，以简便、化学、病原学和显微镜形态学的
3、检查，以简便、快速的检测结果，满足临床医学检验筛检疾病快速的检测结果，满足临床医学检验筛检疾病的要求的要求二、简史二、简史 (History)(History)n公元前公元前400年，希腊名医年，希腊名医Hippocrates 感官直觉感官直觉n1717世纪末荷兰人世纪末荷兰人Leeuwenhook Leeuwenhook 显微镜显微镜 n1919世纪末世纪末EhrlichEhrlich和和Romanowsky Romanowsky 染色技术染色技术 n19281928年年 Papanieolaou Papanieolaou 脱落细胞学脱落细胞学n现代技术的发展现代技术的发展 现代医学检验的特
4、点现代医学检验的特点n从手工检测步入仪器自动化、电脑化检测从手工检测步入仪器自动化、电脑化检测n床边检测床边检测n试剂批量化、配套化、专业化和多样化试剂批量化、配套化、专业化和多样化n检验方法的标准化检验方法的标准化n全面的质量管理和质量保证全面的质量管理和质量保证三、应用三、应用(Utilization)1为准确诊断、及时治疗提供证据为准确诊断、及时治疗提供证据 2 为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据3为预防疾病提供资料为预防疾病提供资料4为配合临床科研提供可靠数据为配合临床科研提供可靠数据四、临床检验的一般方法四、临床检验的一般方法n 目视检查：目
5、视检查：直接观察被检标本直接观察被检标本n 理学检查：理学检查：借助物理学方法借助物理学方法n 化学检查：化学检查：用定性和定量分析的方法用定性和定量分析的方法n 显微镜检查：显微镜检查：临检的主要检查手段临检的主要检查手段 n 自动化仪器检查自动化仪器检查要要 求求(Request)1掌握检验的基础理论掌握检验的基础理论2掌握检验的实验技能掌握检验的实验技能3熟悉检验的方法学评价熟悉检验的方法学评价 4.了解检验项目的参考值了解检验项目的参考值5.5.熟悉检验项目的临床意义熟悉检验项目的临床意义 第一章第一章 血液一般检验血液一般检验第一节第一节 血液标本采集与处理血液标本采集与处理 采血方
6、法采血方法 静脉采血静脉采血 皮肤采血皮肤采血 真空采血真空采血 血量量0.1ml的检验项目：的检验项目：RBC计数、计数、WBC计数、计数、BPL计数、计数、Hb测定等测定等皮皮 肤肤 采采 血血 法法Skinpunctureforbloodcollection采血部位WHO推荐采取外周血以左手无名指或中指指尖内侧推荐采取外周血以左手无名指或中指指尖内侧1、手指采血：、手指采血：优点：优点：方便方便获较多血量获较多血量检查结果比较恒定检查结果比较恒定 缺点：缺点：与静脉血仍在某些差异。与静脉血仍在某些差异。2、耳垂采血：、耳垂采血：优点：优点：痛感轻痛感轻 方便方便 适用于反复采集适用于反复
7、采集 缺点：缺点：血循环差血循环差受气温影响大检查结果不恒定受气温影响大检查结果不恒定 RBC、WBC、Hb、Hct结果均比静脉血高，结果均比静脉血高，特别是冬季。特别是冬季。3、其他部位：、其他部位：拇指、拇趾或足跟采血拇指、拇趾或足跟采血 半岁以下婴幼儿半岁以下婴幼儿 皮肤完整处皮肤完整处 严重烧伤者严重烧伤者 采血针采血针 三棱针或专用的三棱针或专用的“采血针采血针”为好，使用前者应高压灭菌，为好，使用前者应高压灭菌，一人一针一人一针。n一、皮肤采血器材（vacuum blood collector）2008-10-21采血器材采血器材注意事项1、采血部位皮肤完整。、采血部位皮肤完整。2
8、、无菌技术操作：防采血部位感染，、无菌技术操作：防采血部位感染，一人一针防肝炎、艾滋病。一人一针防肝炎、艾滋病。3、采血针刺入皮肤应深浅适中。、采血针刺入皮肤应深浅适中。4、多项检查时，采血次序为：、多项检查时，采血次序为：BPL计数（不擦第一滴血）计数（不擦第一滴血）RBC计数、计数、HbWBC计数与分类。计数与分类。5、取血用于自动化血细胞分析仪，要防止棉球纤维混入、取血用于自动化血细胞分析仪，要防止棉球纤维混入 堵塞仪器。堵塞仪器。静静 脉脉 采采 血血 法法 (venipuncture for blood collection)凡需血量较多的检查凡需血量较多的检查0.5ml如：如：ES
9、R、Hct、凝血因子的测定等。、凝血因子的测定等。部位部位 浅表静脉均可浅表静脉均可 常用肘部静脉，不明显时可用手背、踝常用肘部静脉，不明显时可用手背、踝 部，部，幼儿可用颈外静脉。幼儿可用颈外静脉。P4 注意事项注意事项 1、采血前应向病人作适当解释：、采血前应向病人作适当解释：2、检查注射器：、检查注射器：3、止血带压迫时间不能过长：、止血带压迫时间不能过长：4 4、抽血时，只能向外抽，不能向内推：抽血时，只能向外抽，不能向内推：两种采血方法的优缺点比较两种采血方法的优缺点比较皮肤采血皮肤采血静脉采血静脉采血缺点缺点限制了重复实验和追限制了重复实验和追加实验，标本量少，加实验，标本量少，局
10、部炎症可得假结果局部炎症可得假结果，组织液可混入，组织液可混入不同抗凝剂的使用，不同抗凝剂的使用，改变血液性质，影响改变血液性质，影响有形成分的形态有形成分的形态优点优点价廉、快速、操作简价廉、快速、操作简便，标本可直接测定便，标本可直接测定标本代表性大，无组标本代表性大，无组织液影响，适于临床织液影响，适于临床研究，可重复实验和研究，可重复实验和追加其他实验追加其他实验三、真空采血法（三、真空采血法（40年代，美国年代，美国BD公司）公司）（vacuum tube for blood collection）n套筒式和头皮静脉式两种套筒式和头皮静脉式两种n优点：血样无需容器之间的转移，减少优点
11、：血样无需容器之间的转移，减少 溶血现象，保持血液标本的完整溶血现象，保持血液标本的完整 性，使检验结果更加准确，也有性，使检验结果更加准确，也有 利于防止医院内血源性传染病的利于防止医院内血源性传染病的 交叉感染和环境保护。交叉感染和环境保护。缺点：真空采血管价格较高缺点：真空采血管价格较高n2.真空采血器材 I.采血针2008-10-21n II.持针器2008-10-212008-10-21医学全在线网站医学全在线网站 n III.真空采血管2008-10-21血液标本采集的质量保证血液标本采集的质量保证一、采血服务一、采血服务 1.环境要求环境要求 a）空间空间 b）窗口）窗口 2.生
12、物安全生物安全 a）防止交叉感染）防止交叉感染 b）履行环境消毒）履行环境消毒 二、患者状态要求（自学）二、患者状态要求（自学）三、采血操作对检验结果的影响三、采血操作对检验结果的影响1.采血时间采血时间2.采血部位采血部位3.采血体位采血体位4.压脉带使用压脉带使用5.输液输液6.溶血溶血血标本溶血：血标本溶血：注射器和容器：干燥、清洁。注射器和容器：干燥、清洁。抽血速度不能太快。抽血速度不能太快。抽血时避免产生大量泡沬。抽血时避免产生大量泡沬。抽血后应先拔针头，再注入。抽血后应先拔针头，再注入。抗凝不能用力振荡。抗凝不能用力振荡。离心速度不能过高。离心速度不能过高。一、血液标本运输一、血液
13、标本运输 1.1.唯一标识原则唯一标识原则 2.2.生物安全原则生物安全原则 3.3.尽快运输原则尽快运输原则二、标本拒收二、标本拒收 血液标本运输、血液标本运输、保存与保存与处理处理三、血液检验前的预处理三、血液检验前的预处理n1.分离血清或血浆分离血清或血浆n2.分离细胞分离细胞n分离后的标本分离后的标本：一般应置于一般应置于4，保存一个月的标本，保存一个月的标本，应应-20 冰箱。保存冰箱。保存3个月以上的标本，分离个月以上的标本，分离 后应该后应该-70 保存。保存。n立即送检标本立即送检标本n检测后的标本检测后的标本n标本信息的保存标本信息的保存四、血液标本保存四、血液标本保存 二、
14、抗凝剂选择二、抗凝剂选择 1、柠檬酸钠（枸橼酸钠）、柠檬酸钠（枸橼酸钠）a.抗凝原理：螯合钙离抗凝原理：螯合钙离b.使用方法使用方法 配成配成 109 mmol/L的浓度和血液的浓度和血液1：9 106 mmol/L的浓度和血液的浓度和血液1：4化学名：3-羟基-3-羧基戊二酸（三钠盐）c.适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）d.不适用于：不适用于：血细胞计数血细胞计数 2.草酸钠（乙二酸的钠盐）草酸钠（乙二酸的钠盐）a.抗凝原理：草酸钙沉淀抗凝原理：草酸钙沉淀b.使用方法：使用方法：草酸钠草酸钠 0.1mol/L 和血液和血液1：9
15、c.适用范围：适用范围：止血学检验止血学检验(制备正吸浆制备正吸浆)。d.不适用于：不适用于：对凝血因子对凝血因子V保护功能差，保护功能差，影响影响PT测定；沉淀物影响测定；沉淀物影响 自动凝血仪的使用自动凝血仪的使用。3.双草酸盐抗凝剂双草酸盐抗凝剂 a.抗凝原理：抗凝原理：草酸钙沉淀草酸钙沉淀b.使用方法：使用方法：草酸钾草酸钾0.8g,草酸铵草酸铵1.2g（100ml）与血液与血液 1：10 （80C以下烘干）以下烘干）c.适用范围：适用范围：红细胞检验（红细胞比积、计数）红细胞检验（红细胞比积、计数）d.不适于不适于:血小板计数和白细胞分类计数血小板计数和白细胞分类计数,电解质测定电解
16、质测定4.肝素肝素 （含硫酸基团的粘多糖）（含硫酸基团的粘多糖）a.抗凝原理：低浓度时抑制因子抗凝原理：低浓度时抑制因子a、和和PF3之之 间的作用，加强抗凝血酶间的作用，加强抗凝血酶灭活丝灭活丝 氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，还能抑制凝血酶的自我催化及抑制还能抑制凝血酶的自我催化及抑制 因子因子的作用；高浓度时阻断凝血的作用；高浓度时阻断凝血 酶和纤维蛋白的反应。酶和纤维蛋白的反应。b.适用方法：适用方法：1g/L浓度的肝素钠与血液浓度的肝素钠与血液 1：10c.优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易 溶血、能耐高温
17、。溶血、能耐高温。d.适用范围：红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白适用范围：红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白 测定、红细胞比积）和多种生化分析测定、红细胞比积）和多种生化分析 e.不适用于：不适用于：WBC和和BPL计数、血涂片检查、计数、血涂片检查、凝血象检验。凝血象检验。5.乙二胺四乙酸（乙二胺四乙酸（EDTA）盐）盐a.抗凝原理：抗凝原理：螯合钙离子螯合钙离子b.使用方法：使用方法：15g/L浓度浓度EDTA 和血液和血液 1：10c.适用范围：适用范围：对血细胞形态影响小对血细胞形态影响小,适合血常规检查、适合血常规检查、Hctd.不适用于：不适用于：影响血小板聚集和白细胞吞噬功能影响血
18、小板聚集和白细胞吞噬功能,不宜凝血象检查和血小板功能试验。不宜凝血象检查和血小板功能试验。物理方法抗凝物理方法抗凝 脱纤维蛋白：脱纤维蛋白：将血液注入有玻璃珠的器皿中，转动，将血液注入有玻璃珠的器皿中，转动，纤维蛋白缠绕凝固于玻璃球，从而防止血纤维蛋白缠绕凝固于玻璃球，从而防止血 成凝块。适用于免疫学检验和红斑性狼疮成凝块。适用于免疫学检验和红斑性狼疮 细胞检查。细胞检查。第二节第二节 血涂片制备和细胞染色血涂片制备和细胞染色n血涂片的制备方法血涂片的制备方法n血涂片制备的注意事项血涂片制备的注意事项n血液细胞染色血液细胞染色n细胞染色时注意事项细胞染色时注意事项一、血涂片的制备技术一、血涂片
19、的制备技术1.血涂片的用途：血涂片的用途：血细胞形态学检验、网织红、血细胞形态学检验、网织红、异常细胞、寄生虫检验。异常细胞、寄生虫检验。2.血涂片制备步骤：血涂片制备步骤：（手工推片法）手工推片法）一一玻片清洁：玻片清洁：1、新玻片处理：有游离碱质。、新玻片处理：有游离碱质。2、用过玻片处理：、用过玻片处理：3、使用中玻片处理：只能持玻片边缘，、使用中玻片处理：只能持玻片边缘，保持清洁、干燥、保持清洁、干燥、中性、无油腻。中性、无油腻。P 6二二血涂片制作：血涂片制作：挥动使之干燥，而后在血膜上写编号或病人姓名。挥动使之干燥，而后在血膜上写编号或病人姓名。将推玻片向将推玻片向1的方向稍抽回，
20、当血液充满推玻的方向稍抽回，当血液充满推玻片的宽度后，以一定均匀的速度向片的宽度后，以一定均匀的速度向2的方向滑的方向滑动。动。三三影响因素：影响因素：二、血液细胞染色二、血液细胞染色细胞染色技术细胞染色技术（一）染料（一）染料 （天然染料和人工染料）（天然染料和人工染料）发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染 组织亲合。组织亲合。1.碱性染料：碱性染料：为阳离子染料，能接受质子，染细胞核为阳离子染料，能接受质子，染细胞核 的染料。如亚甲蓝、天青。的染料。如亚甲蓝、天青。2.酸性染料：酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧为阴离子染料
21、，能释放质子。主要有荧 烷烷-氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合 细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成分等。嗜酸性颗粒成分等。3.复合染料：复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料（二）细胞染色原理：（二）细胞染色原理：1.物理作用：物理作用：毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等2.化学作用：化学作用：a.染料的化学成分：染料的化学成分：助色基团的存在，碱性染料在溶媒中为阳离子型，助色基团的存在，碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷
22、的酸性物质结合；而酸性易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。b.蛋白质的化学性质：蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸含有不同蛋白质中的氨基酸含有不同 数量的氨基（数量的氨基（-NH2）和）和 羧基（羧基（-COOH），同时还有其他活性基团。在游离状态时，），同时还有其他活性基团。在游离状态时，-NH2获得一个获得一个H+变成带正电的变成带正电的-NH3+，而，而-COOH失去一个失去一个H+变成带负电的变成带负电的-COO-。分别与不同染料结合。分别与不同染料结合。c.周围环境的酸碱度：
23、周围环境的酸碱度：如环境如环境pHpI（pI 为等电点），则蛋白质带正电，结合酸为等电点），则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之，性染料；反之，pH pI，则结合碱性染料。，则结合碱性染料。PHH增多增多易与伊红结合易与伊红结合染色偏红染色偏红 PHH减少减少易与美蓝结合易与美蓝结合偏蓝偏蓝 （三）细胞染色法的类型（三）细胞染色法的类型 1.普通染色法：普通染色法：经物理和经物理和/或化学作用的吸附、结合或化学作用的吸附、结合 2.荧光染色法：荧光染色法：荧光染料，荧光显微镜荧光染料，荧光显微镜 3.细胞活体染色法：细胞活体染色法：活体染料如灿烂甲酚蓝等活体染料如灿烂甲酚蓝等 4.细胞化学染色法
24、：细胞化学染色法：用化学反应显示细胞内某种成分。用化学反应显示细胞内某种成分。细胞免疫化学染色法细胞免疫化学染色法 （应用单克隆抗体技术、酶标记技术）（应用单克隆抗体技术、酶标记技术）瑞氏染色法瑞氏染色法（一）染色原理（一）染色原理 分两相进行，第一相是酸性伊红与细胞中的碱性物质分两相进行，第一相是酸性伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合；碱性染料天青如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合；碱性染料天青 B与细胞中的酸性物质如核染色质、特异中性颗粒、与细胞中的酸性物质如核染色质、特异中性颗粒、血小板结合。第二相是天青血小板结合。第二相是天青B和伊红结合在适宜条件下和伊红结合在适宜条件下形成紫色
25、的天青形成紫色的天青B-伊红复合物，结果使白细胞核染色伊红复合物，结果使白细胞核染色质成紫色（疟原虫的染色质成红色），中性粒细胞的质成紫色（疟原虫的染色质成红色），中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区成紫色。颗粒及血小板颗粒区成紫色。（二）试剂（二）试剂 1.Wright染液染液 瑞氏染粉瑞氏染粉0.1g,甲醇甲醇60.0ml 2.磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液（PBS）：）：（PH6.46.8）磷酸二氢钾（无水）磷酸二氢钾（无水）0.3g，磷酸氢二钠（无水），磷酸氢二钠（无水）0.2g,蒸馏水加到蒸馏水加到1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口备用。，塞紧瓶口备用。1
26、23 3.染色方法：染色方法：a.用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。b.加瑞氏染液覆盖血膜，固定加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min。c.滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色5-10 分钟。分钟。d.用清水冲洗，待干后镜检。用清水冲洗，待干后镜检。4.注意事项：注意事项：a.血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落 b.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一般染液淡、染色时间长些效果好。一般染液淡、染色时间长些效果好。c.染液不能过少，以防蒸发沉
27、淀。染液不能过少，以防蒸发沉淀。d.冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料 沉着。冲洗时间也不能长。沉着。冲洗时间也不能长。e.染色过淡，可复染。染色过淡，可复染。f.染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色 姬姆萨染色法姬姆萨染色法（一）染色原理：（一）染色原理：基本成分仍然是伊红和亚甲蓝，改基本成分仍然是伊红和亚甲蓝，改 进了染料的质量，使细胞核着色好，结构显示更清进了染料的质量，使细胞核着色好，结构显示更清晰，而胞浆和中性颗粒染色较差。晰，而胞浆和中性颗粒染色较差。（二）试剂（二）试剂 Giemsa 甲醇甲醇 纯甘油纯甘油（三）染色方法（三）染色方法 1.甲醇固定干燥血膜甲醇固定干燥血膜3-5min 2.将血膜在染液中浸染将血膜在染液中浸染10-30min 3.流水冲洗流水冲洗,待干后镜检待干后镜检巴氏染色法巴氏染色法 是脱落细胞染色法中较好的染色方法。是脱落细胞染色法中较好的染色方法。