《蛋白质氨基酸》PPT课件.ppt

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1、第第4 4章章 蛋白质、氨基酸含量的检测蛋白质、氨基酸含量的检测主要内容主要内容 第一节第一节 蛋白质的定量测定方法蛋白质的定量测定方法 第二节第二节 氨基氮含量的检测方法氨基氮含量的检测方法 第三节第三节 多种氨基酸的分离和测定多种氨基酸的分离和测定 第四节第四节 味精纯度的测定方法味精纯度的测定方法第一节第一节 蛋白质含量的测定蛋白质含量的测定一、蛋白质概况一、蛋白质概况 蛋蛋白白质质是是含含氮氮的的有有机机化化合合物物，分分子子量量很很大大。主主要要由由C、H、O、N、S五五种种元元素素组组成成。某某些些蛋蛋白白质中还含有微量的质中还含有微量的 P、Cu、Fe、I 等。等。样样品品中中蛋

2、蛋白白质质含含量量的的测测定定，主主要要（也也是是最最常常用用的的）用用凯凯氏氏定定氮氮法法测测定定总总氮氮量量，然然后后乘乘一一个个蛋蛋白白质质换换算算系系数数。这这里里也也包包括括非非蛋蛋白白的的氮氮，所所以以只只能能称称为为粗蛋白的含量。粗蛋白的含量。具体测定方法具体测定方法（一一）凯凯氏氏定定氮氮法法最最常常用用的的，国国内内外外应应用用普普遍遍 （GB/T5009.5GB/T5009.52008 2008 第一法）。第一法）。（二）分光光度法（二）分光光度法（GB/T5009.5GB/T5009.52008 2008 第二法）第二法）（三）电位滴定法（三）电位滴定法（四）双缩脲反应（

3、四）双缩脲反应（五）杜马斯燃烧法（五）杜马斯燃烧法(SN/T2115-2008)(SN/T2115-2008)进出口食品和饲料中总氮及粗蛋白的检测方法进出口食品和饲料中总氮及粗蛋白的检测方法杜马斯燃烧法杜马斯燃烧法 二二 、蛋白质含量的定量测定蛋白质含量的定量测定 一些蛋白质的含氮量一般为一些蛋白质的含氮量一般为 15%-17.6%15%-17.6%，有的上下浮动有的上下浮动 可以测出总氮可以测出总氮 N N（一）凯氏定氮法（一）凯氏定氮法 丹麦化学家Johan Kieldahl（克达尔）(1849-1900)研制了今天人所共知的分析有机物中氮含量的凯氏法。于于18831883年提出，年提出，

4、现发展为常量、微量、自动定氮仪法及改现发展为常量、微量、自动定氮仪法及改良凯氏法。只介绍前三种。良凯氏法。只介绍前三种。=N6.25=N6.25=蛋白质含量蛋白质含量 丹麦分析化学家。丹麦分析化学家。18491849年生于亚格普里斯年生于亚格普里斯,1900,1900年年7 7月月1818日卒于齐斯维勒莱厄。日卒于齐斯维勒莱厄。18731873年在哥本哈根大学毕业年在哥本哈根大学毕业后后,做过农业中学的教师。做过农业中学的教师。18751875年任卡尔斯堡研究所化年任卡尔斯堡研究所化学部负责人学部负责人,1876,1876年任所长年任所长,在研究所工作近在研究所工作近2020年。他年。他是丹麦

5、皇家科学院院士是丹麦皇家科学院院士,1884,1884年哥本哈根大学授予他名年哥本哈根大学授予他名誉博士学位。他主要研究发酵化学。誉博士学位。他主要研究发酵化学。18831883年发明测定年发明测定有机化合物中氮含量的方法有机化合物中氮含量的方法:他将一定质量的试样与硫他将一定质量的试样与硫酸作用酸作用,使试样中的氮全部转变为硫酸铵使试样中的氮全部转变为硫酸铵,然后往硫酸然后往硫酸铵溶液中加入碱铵溶液中加入碱,再将生成的氨蒸馏到一定体积的标准再将生成的氨蒸馏到一定体积的标准酸溶液中酸溶液中,再滴定过量的酸再滴定过量的酸,就能测出试样的含氮量。就能测出试样的含氮量。此法普遍用于化学和医学研究及农

6、业生产和药物工业。此法普遍用于化学和医学研究及农业生产和药物工业。后人称此法为克氏定氮法。此法所用的仪器是一种梨后人称此法为克氏定氮法。此法所用的仪器是一种梨形长颈烧瓶形长颈烧瓶,容量通常约容量通常约300300毫升毫升,微量分析用的可以小微量分析用的可以小到到1010毫升毫升,后人称这种烧瓶为克氏烧瓶。后人称这种烧瓶为克氏烧瓶。常量凯氏定氮法常量凯氏定氮法1.1.原理原理 样样品品与与浓浓硫硫酸酸和和催催化化剂剂一一同同加加热热消消化化，使使蛋蛋白白质质分分解解，其其中中碳碳和和氢氢被被氧氧化化为为二二氧氧化化碳碳和和水水逸逸出出，而而样样品品中中的的有有机机氮氮转转化化为为氨氨与与硫硫酸酸

7、结结合合成成硫硫酸酸铵铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出。然后加碱蒸馏，使氨蒸出。用用H3BO3吸吸收收后后再再以以标标准准盐盐酸酸溶溶液液滴滴定定。根根据据标准酸消耗量可以计算出蛋白质的含量。标准酸消耗量可以计算出蛋白质的含量。也也可可以以用用过过量量的的标标准准H2SO4或或标标准准盐盐酸酸溶溶液液吸吸收后再以标准收后再以标准NaOH溶液滴定过量的酸。溶液滴定过量的酸。整个过程分三步：消化、蒸馏、吸收与滴定整个过程分三步：消化、蒸馏、吸收与滴定、消化消化 总反应式：总反应式：（1 1）加硫酸钾）加硫酸钾 作为增温剂，提高溶液沸点，作为增温剂，提高溶液沸点，纯硫酸沸点纯硫酸沸点 340340，加入硫

8、酸钾之后可以提高，加入硫酸钾之后可以提高至至400400以上。也可加入硫酸钠，氯化钾等提以上。也可加入硫酸钠，氯化钾等提高沸点，但效果不如硫酸钾。高沸点，但效果不如硫酸钾。2NH2（CH2）2COOH+13H2SO4 （NH4）2SO4+6CO2+12SO2+16H2O一定要用浓硫酸一定要用浓硫酸（98%）（2 2）加硫酸铜加硫酸铜 作为催化剂。还可以作消化作为催化剂。还可以作消化终点指示剂（做蒸馏时碱性指示剂）。还可以终点指示剂（做蒸馏时碱性指示剂）。还可以加氧化汞、汞（均有毒，价格贵）、硒粉、二加氧化汞、汞（均有毒，价格贵）、硒粉、二氧化钛。氧化钛。（3 3）加氧化剂）加氧化剂 如双氧水、

9、次氯酸钾等加速有如双氧水、次氯酸钾等加速有机机 物氧化速度。物氧化速度。右图为消化装右图为消化装置置、蒸馏蒸馏 消化液消化液 +400g/L400g/L氢氧氢氧化钠加热蒸化钠加热蒸馏，放出氨馏，放出氨气。气。、吸收与滴定吸收与滴定（1 1）用）用20g/Lg/L硼酸吸收，用盐酸标准溶液滴定，硼酸吸收，用盐酸标准溶液滴定，指示剂用混合指示剂（甲基红指示剂用混合指示剂（甲基红溴甲酚绿混合溴甲酚绿混合指示剂）或亚甲基蓝指示剂）或亚甲基蓝甲基红。甲基红。指示剂指示剂 紫红色紫红色 亮绿色亮绿色 暗灰色暗灰色（酸）（酸）（碱）（碱）（酸）（酸）2NH3+4H3BO3=（NH4）2B4O7+5H2O（NH

10、4）2B4O7+2HCl+5H2O =2NH4Cl+4H3BO3或（或（2 2）用过量的用过量的 H2SO4 或或 HCl 标准溶液吸收，标准溶液吸收，再用再用 NaOH 标准溶液滴定过剩的酸液。标准溶液滴定过剩的酸液。吸收吸收 滴定滴定结果计算：结果计算：蛋白质（蛋白质（%）=100 注注意意：F F氮氮换换算算为为蛋蛋白白质质的的系系数数，一一般般为为 6.256.25，玉玉米米、高高粱粱为为6.246.24，大大豆豆及及其其制制品品为为5.715.71，大麦为，大麦为5.835.83。说明：说明：整个消化过程要在通风橱进行。整个消化过程要在通风橱进行。消消化化时时不不要要用用强强火火，应

11、应保保持持和和缓缓沸沸腾腾，以以免免粘粘贴贴在在凯凯氏氏瓶瓶内内壁壁上上的的含含氮氮化化合合物物在在无无硫硫酸酸存在的情况下消化不完全而造成氮损失。存在的情况下消化不完全而造成氮损失。消化时，作空白试验。消化时，作空白试验。消化时应注意不时转动凯氏烧瓶，以便利用冷消化时应注意不时转动凯氏烧瓶，以便利用冷凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下，并促进其消凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下，并促进其消化完全。化完全。当样品消化液不易澄清透明时，可将凯氏烧瓶当样品消化液不易澄清透明时，可将凯氏烧瓶冷却，加入冷却，加入30过氧化氢过氧化氢 2-3 mL 后再继续加后再继续加热消化热消化。一般消化至呈透明后，继

12、续消化一般消化至呈透明后，继续消化30分钟即可，分钟即可，但对于含有特别难以氨化的氮化合物的样品但对于含有特别难以氨化的氮化合物的样品如含赖氨酸、组氨酸、色氨酸、酪氨酸或脯氨如含赖氨酸、组氨酸、色氨酸、酪氨酸或脯氨酸等时，需适当延长消化时间。有机物如分解酸等时，需适当延长消化时间。有机物如分解完全，消化液呈蓝色或浅绿色，但含铁量多时，完全，消化液呈蓝色或浅绿色，但含铁量多时，呈较深绿色。呈较深绿色。蒸馏装置不能漏气。蒸馏装置不能漏气。蒸馏前若加碱量不足，消化液呈蓝色不生成氢蒸馏前若加碱量不足，消化液呈蓝色不生成氢氧化铜沉淀，此时需再增加氢氧化钠用量。氧化铜沉淀，此时需再增加氢氧化钠用量。蒸馏完

13、毕后，应先将冷凝管下端提离液面清洗蒸馏完毕后，应先将冷凝管下端提离液面清洗管口，再蒸管口，再蒸1 1分钟后关掉热源否则可能造成吸收分钟后关掉热源否则可能造成吸收液倒吸。液倒吸。硼酸吸收液的温度不能超过硼酸吸收液的温度不能超过4040。混合指示剂在混合指示剂在pH5.2pH5.2时为紫红色，时为紫红色，pH5.4pH5.4时为暗时为暗灰色，灰色，pH5.6pH5.6时为亮绿色，时为亮绿色，变色点为变色点为pH5.4pH5.4，指，指示剂变色范围很窄，灵敏度高。示剂变色范围很窄，灵敏度高。微量凯氏定氮法微量凯氏定氮法1 1、原理及适用范围同前、原理及适用范围同前2 2、与常量法不同点：、与常量法不

14、同点：加入硼酸量由加入硼酸量由50 ml 10 ml,滴定用盐酸浓度由滴定用盐酸浓度由0.1 mol/L 0.01 mol/L,常量法全量蒸馏，微量法少部分蒸馏。常量法全量蒸馏，微量法少部分蒸馏。微量法用微量滴定管滴定。微量法用微量滴定管滴定。3 3、蒸馏装置下图、蒸馏装置下图 。问题问题：用微量凯氏定氮法测定一样品的蛋白质含量时，：用微量凯氏定氮法测定一样品的蛋白质含量时，测定结果比实际值偏低，试分析其可能的原因？测定结果比实际值偏低，试分析其可能的原因？应用实例应用实例：1 1、酱油中全氮含量的测定、酱油中全氮含量的测定 2 2、乳与乳制品中非蛋白氮含量的测定（、乳与乳制品中非蛋白氮含量的

15、测定（GB/T 21704-2008）3 3、麦芽中库尔巴哈值、麦芽中库尔巴哈值;蛋白质区分蛋白质区分 （1 1）库尔巴哈值：制麦过程中蛋白质的溶解度，）库尔巴哈值：制麦过程中蛋白质的溶解度，用可溶性氮占总氮的比值表示。用可溶性氮占总氮的比值表示。（2）啤酒中）啤酒中蛋白质区分蛋白质区分自动凯氏定氮法自动凯氏定氮法1 1、原理及适用范围、原理及适用范围:同前同前 2 2、特点：、特点：（1 1）消化装置用优质玻璃制成的凯氏消化瓶，红外）消化装置用优质玻璃制成的凯氏消化瓶，红外线加热的消化炉。线加热的消化炉。（2 2）快速：一次可同时消化）快速：一次可同时消化8-248-24个样品。个样品。（3

16、 3）自动：自动加碱蒸馏，自动吸收和滴定，自动）自动：自动加碱蒸馏，自动吸收和滴定，自动数字显示装置。可计算总氮百分含量并记录，几分钟数字显示装置。可计算总氮百分含量并记录，几分钟完成完成1 1个样。个样。福斯2300北京福德泰和科技有限公司北京福德泰和科技有限公司产品名称：产品名称：凯氏定氮仪凯氏定氮仪（二）分光光度法（乙酰丙酮比色法）（二）分光光度法（乙酰丙酮比色法）1 1、原理、原理 （1 1）样品消化）样品消化 硫酸铵。硫酸铵。（2 2）在）在pH4.8pH4.8的乙酸钠的乙酸钠-乙酸缓冲溶液中，铵与乙酰乙酸缓冲溶液中，铵与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色的丙酮和甲醛反应生成黄色的3,5-3

17、,5-二乙酰二乙酰-2,6-2,6-二甲基二甲基-1,4-1,4-二氢化吡啶化合物。二氢化吡啶化合物。（3 3）在波长）在波长400nm400nm处测定吸光度，与标准系列比较处测定吸光度，与标准系列比较定量。定量。（4 4）结果乘以换算系数，即为蛋白质含量。）结果乘以换算系数，即为蛋白质含量。2 2、方法特点、方法特点 （1 1）操作简便）操作简便 （2 2）适合大批量样品蛋白质的测定）适合大批量样品蛋白质的测定（三）电位滴定法（三）电位滴定法 1 1、原理、原理 （1 1）样品消化）样品消化 硫酸铵。硫酸铵。（2 2）中和样品至）中和样品至pH8.2。（3 3）4 NH4+6HCHO (CH

18、2)6N4+2H+6H2O （4）2H+OH-H2O 2 2、方法特点、方法特点（四）双缩脲法（四）双缩脲法 传传统统的的凯凯氏氏定定氮氮法法应应用用范范围围广广，灵灵敏敏度度高高、准确，不要大仪器，但费时间，有环境污染。准确，不要大仪器，但费时间，有环境污染。新开发的：双缩脲法（由农业部于发布并实施）新开发的：双缩脲法（由农业部于发布并实施）适合于乳与乳制品中蛋白质含量的测定。适合于乳与乳制品中蛋白质含量的测定。1.1.原理原理脲脲（尿尿素素）NHNH2 2COCONHNH2 2 加加热热至至150150 160160时时，两两分子缩合成双缩脲。分子缩合成双缩脲。双双缩缩脲脲能能和和硫硫酸酸

19、铜铜的的碱碱性性溶溶液液生生成成紫紫色色络络合合物物，这这种种反应叫双缩脲反应。（缩二脲反应）反应叫双缩脲反应。（缩二脲反应）蛋蛋白白质质分分子子中中含含有有肽肽键键 COCONHNH 与与双双缩缩脲脲结结构构相相似似。在在同同样样条条件件下下也也有有呈呈色色反反应应，在在一一定定条条件件下下，其其颜颜色色深深浅浅与与蛋蛋白白质质含含量量成成正正比比，可可用用分分光光光光度度计计来来测测其吸光度，确定含量。（其吸光度，确定含量。（540nm540nm）NH2CONHCONH2 +NH3NH2CONH2+NH2CONH22.2.应用应用 乳乳与与乳乳制制品品中中蛋蛋白白质质的的测测定定 双双缩缩

20、脲脲比比色色法法（NY/T 1678-2008NY/T 1678-2008）（五）（五）杜马斯燃烧法杜马斯燃烧法 1 1、原理、原理 待测样本在纯氧（待测样本在纯氧（99.99%99.99%）环境中高温）环境中高温燃烧，将其所含的有机氮和无机氮全部转化成燃烧，将其所含的有机氮和无机氮全部转化成氮的氧化物后被还原剂还原成氮气。最后，用氮的氧化物后被还原剂还原成氮气。最后，用TCDTCD检测器检测氮气含量，计算蛋白质含量。检测器检测氮气含量，计算蛋白质含量。2 2、特点：杜马斯燃烧法不仅能够在、特点：杜马斯燃烧法不仅能够在4 46 6分钟分钟内准确地测定出样品的总氮含量，而且还能测内准确地测定出样

21、品的总氮含量，而且还能测定出凯氏法所不能测定的硝态氮。还能减少对定出凯氏法所不能测定的硝态氮。还能减少对环境的污染以及对人类健康的危害。环境的污染以及对人类健康的危害。第二节第二节 氨基氮含量的检测方法氨基氮含量的检测方法一、甲醛滴定法一、甲醛滴定法 1.1.原理：氨基酸本身既有碱性原理：氨基酸本身既有碱性 NHNH2 2，又有，又有 酸性酸性 COOH COOH，成中性内盐，加入甲醛溶，成中性内盐，加入甲醛溶液后，与液后，与 NHNH2 2 结合，碱性消失，再用结合，碱性消失，再用强碱来滴定强碱来滴定 COOH COOH 基。基。2 2特点：适用于发酵工业，如发酵液中含氨基氮量，特点：适用于

22、发酵工业，如发酵液中含氨基氮量，其发酵过程中氨基氮量减少情况等（适于游离氨基其发酵过程中氨基氮量减少情况等（适于游离氨基酸的测定）酸的测定）。3 3、应用实例、应用实例 酿造酱油（酿造酱油（GB18186-2000 GB18186-2000）氨基氮含量的测定）氨基氮含量的测定 （1 1）试剂）试剂 a)a)甲醛溶液：甲醛溶液：37374040；b)0.05mol/Lb)0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液氢氧化钠标准滴定溶液 （2 2）分析步骤分析步骤 吸取吸取5.0mL5.0mL样品，置于样品，置于100mL100mL容量瓶中，加水至刻度，容量瓶中，加水至刻度，混匀后吸取混匀后吸取20.0

23、mL20.0mL，置于，置于200mL200mL烧杯中，加水烧杯中，加水60mL60mL水，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液水，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液c(NaOH)=0.05mol/Lc(NaOH)=0.05mol/L滴定至酸度计指示滴定至酸度计指示pHpH8.28.2 记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液（记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液（0.05mol/L0.05mol/L）的）的毫升数，可计算总酸含量毫升数，可计算总酸含量。加入加入10.0mL10.0mL甲醛溶液，混匀。再用氢氧化钠标准滴甲醛溶液，混匀。再用氢氧化钠标准滴定溶液（定溶液（0.05mol/L0.05mol/L）继续滴定至

24、）继续滴定至pHpH9.2,9.2,记下消记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液（耗氢氧化钠标准滴定溶液（0.05mol/L0.05mol/L）的毫升数。）的毫升数。同时取同时取80mL80mL水，先用氢氧化钠溶液（水，先用氢氧化钠溶液（0.05mol/L0.05mol/L）调节调节pHpH为为8.28.2，再加入，再加入10.0mL10.0mL甲醛溶液，用氢氧化甲醛溶液，用氢氧化钠标准滴定溶液（钠标准滴定溶液（0.05mol/L0.05mol/L）滴定至）滴定至pH=9.2pH=9.2，同，同时做试剂空白试验。时做试剂空白试验。二、茚三酮比色法二、茚三酮比色法 1 1、原理：原理：茚三酮与样品中的茚三

25、酮与样品中的-氨基氮氨基氮反应，得到还原茚三酮，再与氨和未还原反应，得到还原茚三酮，再与氨和未还原的茚三酮反应，生成蓝紫色络合物，其颜的茚三酮反应，生成蓝紫色络合物，其颜色深浅与色深浅与-氨基氮含量成正比。在氨基氮含量成正比。在570nm570nm下，测定吸光度，计算样品中的下，测定吸光度，计算样品中的-氨基氮氨基氮含量。含量。2 2、操作过程、操作过程（1 1）取）取7 7支试管并编号，于支试管并编号，于0 0号试管中加入蒸号试管中加入蒸馏水馏水2.00 mL2.00 mL，于，于1 1、2 2、3 3号试管中分别加入样号试管中分别加入样液液2.00 mL2.00 mL，4 4、5 5、6

26、6号试管中分别加入甘氨酸号试管中分别加入甘氨酸标准使用液标准使用液2.00 mL2.00 mL。（2 2）7 7支试管中各加入发色剂支试管中各加入发色剂1.00 mL1.00 mL，混匀，混匀，盖塞，将试管放入沸水浴中，准确加热盖塞，将试管放入沸水浴中，准确加热16min16min，（3 3）在）在2020水浴中冷却水浴中冷却20min20min。再各加入碘酸。再各加入碘酸钾稀释溶液钾稀释溶液5.00 mL5.00 mL，充分摇匀。，充分摇匀。（4 4）用空白液管调节仪器零点，于）用空白液管调节仪器零点，于570nm570nm波长波长下，测量吸光度。下，测量吸光度。3 3、计算、计算4 4、应

27、用、应用 啤酒生产中：麦汁、麦芽中啤酒生产中：麦汁、麦芽中-氨基氨基氮的测定氮的测定 第三节第三节 多种氨基酸的分离和测定多种氨基酸的分离和测定一、氨基酸自动分析仪法一、氨基酸自动分析仪法 原理：原理：1 1、使用阳离子交换树脂（聚苯乙烯、使用阳离子交换树脂（聚苯乙烯经交联再磺化）在色谱柱进行分离；经交联再磺化）在色谱柱进行分离；2 2、洗脱下来的氨基酸可用茚三酮显、洗脱下来的氨基酸可用茚三酮显色，从而定量各种氨基酸。色，从而定量各种氨基酸。10-3二、HPLC第四节第四节 味精纯度的测定方法味精纯度的测定方法GB/T8967-2007分析方法分析方法 1 1、高氯酸非水溶液滴定法、高氯酸非水

28、溶液滴定法 原理：在乙酸存在下，用高氯酸标准原理：在乙酸存在下，用高氯酸标准溶液滴定样品中的谷氨酸钠，以电位滴溶液滴定样品中的谷氨酸钠，以电位滴定法确定其终点，或以定法确定其终点，或以-萘酚苯基甲醇萘酚苯基甲醇为指示剂，滴定溶液至绿色为终点。为指示剂，滴定溶液至绿色为终点。2 2、旋光法、旋光法本章复习题本章复习题1 1、为什么凯氏定氮法测定出的蛋白质含量为粗蛋白、为什么凯氏定氮法测定出的蛋白质含量为粗蛋白含量？含量？2 2、凯氏定氮法测定蛋白质的原理及所用试剂的作用、凯氏定氮法测定蛋白质的原理及所用试剂的作用？3 3、用微量凯氏定氮法测定一样品的蛋白质含量时，、用微量凯氏定氮法测定一样品的蛋

29、白质含量时，测定结果比实际值偏低，试分析其可能的原因？测定结果比实际值偏低，试分析其可能的原因？4 4、试述粗蛋白质测定中，样品消化过程中必须注意、试述粗蛋白质测定中，样品消化过程中必须注意的事项？的事项？5 5、试比较凯氏定氮法与其他几种常用蛋白质定量方、试比较凯氏定氮法与其他几种常用蛋白质定量方法的优缺点？法的优缺点？6 6、说明甲醛滴定法测定氨基氮的原理及操作要点？、说明甲醛滴定法测定氨基氮的原理及操作要点？7 7、双缩脲法测定蛋白质原理？、双缩脲法测定蛋白质原理？8 8、味精纯度的测定方法有哪些？、味精纯度的测定方法有哪些？作业题作业题1 1、常用的样品预处理方法有哪些？其中有机物破坏、常用的样品预处理方法有哪些？其中有机物破坏法各有什么优缺点？法各有什么优缺点？2 2、试述蓝、试述蓝-爱侬法测定葡萄酒中总糖的原理及注意爱侬法测定葡萄酒中总糖的原理及注意事项？事项？3 3、用微量凯氏定氮法测定一样品的蛋白质含量时，、用微量凯氏定氮法测定一样品的蛋白质含量时，测定结果比实际值偏低，试分析其可能的原因？测定结果比实际值偏低，试分析其可能的原因？