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1、幽门螺杆菌检测幽门螺杆菌检测pptppt课件课件讲课内容讲课内容第一节第一节 幽门螺杆菌特点幽门螺杆菌特点 第二节第二节 幽门螺杆菌感染的检测方法幽门螺杆菌感染的检测方法第三节第三节 幽门螺杆菌检测方法的临床应用幽门螺杆菌检测方法的临床应用123第一节第一节 幽门螺杆菌特点幽门螺杆菌特点 幽门螺杆菌（幽门螺杆菌（Helicobacter pylori Helicobacter pylori 简称简称HPHP），呈），呈弧形或弧形或S S形，有形，有1212个微小弯曲，属个微小弯曲，属微需氧菌微需氧菌，在在pHpH值值为为6868时繁殖时繁殖最为活跃，该菌具有丰富的最为活跃，该菌具有丰富的尿素酶
2、尿素酶，可分，可分解食物中的尿素产生氨，该菌生长于胃粘液深层，胃粘解食物中的尿素产生氨，该菌生长于胃粘液深层，胃粘膜表面，多在胃窦部以胃小凹、上皮皱褶的内折及腺腔膜表面，多在胃窦部以胃小凹、上皮皱褶的内折及腺腔内为多。内为多。H.Pylori感染和十二指肠溃疡感染和十二指肠溃疡H.Pylori感染感染D/G细胞功能改变细胞功能改变遗传易感性遗传易感性壁细胞总体增加壁细胞总体增加B型慢性胃窦炎型慢性胃窦炎 胃泌素胃泌素胃酸分泌量胃酸分泌量H.Pylori的迁移的迁移十二指肠粘膜胃上皮化生十二指肠粘膜胃上皮化生十二指肠球炎十二指肠球炎十二指肠球溃疡十二指肠球溃疡H.Pylori感染和胃癌的关系感染
3、和胃癌的关系浅表性胃炎浅表性胃炎正常胃粘膜正常胃粘膜基因损伤基因损伤H.Pylori感染感染弥漫性胃癌弥漫性胃癌萎缩性胃炎萎缩性胃炎环境因素环境因素胃粘膜肠上皮化生胃粘膜肠上皮化生高高CagA+-HP滴度滴度宿主因素宿主因素 的的H.pylori菌株菌株感染感染肠型早期胃癌肠型早期胃癌进展期胃癌进展期胃癌3.HP的毒力作用的毒力作用取决于取决于定植能力定植能力菌株的基因型菌株的基因型细菌的圆球体样型态细菌的圆球体样型态对抗菌药物的敏感性对抗菌药物的敏感性第二节第二节 幽门螺杆菌感染的检测幽门螺杆菌感染的检测侵入性检测方法非侵入性检测方法l快速尿素酶试验l病理切片染色l培养l黏膜涂片革兰氏染色l
4、基因方法:PCR等l13C-或14C-尿素呼气试验l Hp粪便抗原试验l Hp血清抗体试验试验原理试验原理HP能产生丰富能产生丰富尿素酶，将尿素尿素酶，将尿素分解、产生分解、产生2个个分子的氨，使培分子的氨，使培养基变为碱性，养基变为碱性，酚红呈粉红色。酚红呈粉红色。操作过程操作过程活检同时取活检同时取2块块组织进行检测组织进行检测（胃窦和胃体各（胃窦和胃体各1块），标本放块），标本放置于试剂后观察置于试剂后观察颜色变化。颜色变化。注意事项注意事项检测结果受试剂检测结果受试剂pH值、取材部位、值、取材部位、组织大小、细菌组织大小、细菌量、观察时间、量、观察时间、环境温度等因素环境温度等因素影响
5、影响（一）快速尿素酶试验（一）快速尿素酶试验RUTRUT一一、创伤性检查、创伤性检查 胃镜检查胃黏膜取材胃镜检查胃黏膜取材,直接涂片革兰氏染色，直接涂片革兰氏染色，也可包埋切片，常规也可包埋切片，常规HEHE染色或银染，直接镜检染色或银染，直接镜检观察观察HpHp。直接镜检直接镜检（二）组织学检查（二）组织学检查1.1.免疫组化染色特异性免疫组化染色特异性高。高。2.HE2.HE染色可同时作病理染色可同时作病理诊断；诊断；3.3.荧光原位杂交（荧光原位杂交（FISHFISH）具有较高敏感性）具有较高敏感性1.1.在胃镜取胃粘膜放在转在胃镜取胃粘膜放在转运培养基中。运培养基中。2.2.接种于接种
6、于HpHp牛脑浸液培牛脑浸液培养基，分区划线。养基，分区划线。3.3.置置5-125-12CO2CO2培养箱培养箱35-3735-37，3-5d3-5d形成小的形成小的半透明灰色菌落，有微弱半透明灰色菌落，有微弱的溶血环。的溶血环。培养过程培养过程诊断诊断HpHp最可靠的方法，可最可靠的方法，可作为验证其他诊断性试验作为验证其他诊断性试验的的“金标准金标准”。一般用于药敏试验和科研。一般用于药敏试验和科研。（三）细菌培养（三）细菌培养 幽门螺杆菌的尿素酶幽门螺杆菌的尿素酶(A(A、B B、C C、D)D)基因、基因、16S-rDNA16S-rDNA基因、基因、VacAVacA及及CagACag
7、A基因均已克隆成功，基因均已克隆成功，根据幽门螺杆菌不同的耙基因，根据幽门螺杆菌不同的耙基因，设计不同的引物，从而建立不设计不同的引物，从而建立不同的同的PCRPCR系统，扩增产物可经系统，扩增产物可经凝胶电泳分析凝胶电泳分析.原理与方法原理与方法（四）（四）聚合酶链反应试验聚合酶链反应试验(PCR(PCR检测技术检测技术)1.1.与细菌培养和组织学染色镜检比较与细菌培养和组织学染色镜检比较无明显优越性。无明显优越性。2.2.现在可收集胃液现在可收集胃液PCRPCR检测幽门螺杆菌检测幽门螺杆菌敏感性高，但可能与口腔和胃内其它敏感性高，但可能与口腔和胃内其它尿素酶阳性菌丛起交叉反应尿素酶阳性菌丛
8、起交叉反应注：注：HPHP的基因分型（的基因分型（HPHP菌属亚群）及致病性菌属亚群）及致病性分布比例分布比例VacAVacA基因基因CacACacA基因基因致病性致病性型型56%56%+胃炎、十二指胃炎、十二指肠溃疡肠溃疡、胃癌、胃癌型型16%16%-胃炎胃炎中中间间表达型表达型28%28%+/-+/-+/-+/-VacA基因表达空泡毒素基因表达空泡毒素87KDCagA基因表达细胞毒素相关蛋白基因表达细胞毒素相关蛋白128KDCagA基因仅出现于基因仅出现于VacA产生细胞毒效应时产生细胞毒效应时，是是VacA产产生效果的标志生效果的标志原理和过程原理和过程HPHP能产生丰富尿素酶，能分解胃
9、中能产生丰富尿素酶，能分解胃中的尿素，当的尿素，当整粒整粒摄入含同位素碳摄入含同位素碳-1313的尿素胶囊后，碳的尿素胶囊后，碳-13-13尿素在尿尿素在尿素酶作用下，分解为氨和碳素酶作用下，分解为氨和碳-13-13二氧化碳，碳二氧化碳，碳-13-13二氧化碳被小二氧化碳被小肠上段吸收后，进入血循环，并随肠上段吸收后，进入血循环，并随呼气排出，分析呼气中的碳呼气排出，分析呼气中的碳-13-13就就可诊断该细菌的存在可诊断该细菌的存在特点和注意事项特点和注意事项1.易于操作；可反映全易于操作；可反映全胃胃Hp感染状况。感染状况。2.检测前一个周内应停检测前一个周内应停用抗生素、铋剂、质子用抗生素
10、、铋剂、质子泵抑制剂等药。泵抑制剂等药。3.孕妇、哺乳期妇女及孕妇、哺乳期妇女及儿童不宜做。儿童不宜做。（一）（一）13C-13C-或或14C-14C-尿素呼气试验尿素呼气试验二、非创伤性检查二、非创伤性检查 多采用多采用ELISAELISA双抗体夹双抗体夹心法，或胶体金试条法。心法，或胶体金试条法。留取晨粪便，用稀释液留取晨粪便，用稀释液稀释，再加入试条或微稀释，再加入试条或微孔板检测。孔板检测。原理与方法原理与方法（二）幽门螺杆菌粪便抗原检测（二）幽门螺杆菌粪便抗原检测1.1.粪便抗原检测灵敏度粪便抗原检测灵敏度高、准确性好，高、准确性好，HPHP死亡死亡但抗原成分仍保留下来，但抗原成分仍
11、保留下来，故在治疗前后都可用。故在治疗前后都可用。2.2.适用于所有年龄和类适用于所有年龄和类型的患者（型的患者（儿童儿童）。）。多采用多采用ELISAELISA双抗原夹双抗原夹心法，或胶体金试条法。心法，或胶体金试条法。可快速检测人血清、血可快速检测人血清、血浆或全血中幽门螺杆菌浆或全血中幽门螺杆菌抗体。抗体。原理与方法原理与方法（三）幽门螺杆菌血清抗体检测（三）幽门螺杆菌血清抗体检测1.1.检测的抗体是检测的抗体是IgGIgG，反，反映一段时间内映一段时间内HpHp感染情感染情况，部分试剂盒可同时况，部分试剂盒可同时检测检测CagACagA和和VacAVacA抗体。抗体。2.2.主要适用于
12、流行病学主要适用于流行病学调查。调查。第三节第三节 幽门螺杆菌检测方法的临床应用幽门螺杆菌检测方法的临床应用小结：几种小结：几种HPHP检测方法的比较检测方法的比较方法方法粪粪便便HP抗抗原原检测检测快速尿素快速尿素酶酶试试验验组织组织培养培养银银染法染法血清抗体血清抗体检检C-尿素呼尿素呼吸吸试验试验用途粪便HP抗原检测胃粘膜活组织中HP引起的尿素酶活性化检查胃粘膜活组织中的HP检查胃粘膜组织切片中的HP检测血清或血浆中HP感染引起的IgG检测HP的尿素酶活性样本粪便胃或十二指肠活检组织胃或十二指肠活检组织胃或十二指肠活检组织血清或血浆口服13C-尿素方法酶免疫法PH值变化组织培养组织切片染色法酶免疫法气相色谱/质谱设备或技要求实验技师胃肠专家胃镜取材厌氧培养条件和技术胃肠专家胃镜取材和判断经验实验技师静脉穿刺气相色谱质谱仪结果判定光谱法肉眼观察肉眼观察显微镜观察光谱法或肉眼观察质谱法灵敏度、特异性94%97%81-95.7%65.7-92%82.9%96.3%87.5%89.7%50%70.4%78.1%91.4%