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1、细胞培养常用试剂第1页，共15页，编辑于2022年，星期一Hanks液D-Hanks液PBSEDTA胰蛋白酶青霉素、链霉素第2页，共15页，编辑于2022年，星期一Hanks液与D-Hanks液Hanks液是常见的平衡盐溶液(BSS)之一。D-Hanks液则是无钙镁离子的Hanks液（也有资料认为除了不含钙镁离子之外也不含葡萄糖）。BSS与细胞生长状态下的pH值、渗透压及无菌状态一致，且配方简单，是组织培养基本用液，常用于配制培养基及其他用液，或洗细胞等，细胞在这种BSS中可生存几个小时。第3页，共15页，编辑于2022年，星期一Hanks液配方Hanks液（原液）原液甲：NaCl160gKC
2、l8gMgSO47H2O2gMgCl26H2O2g上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。CaCl22.8g溶于100ml双蒸水上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4保存。原液乙：Na2HPO412H2O3.04gKH2PO41.2g葡萄糖20g加入800ml双蒸水，溶解。0.4%酚红溶液100ml上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4保存。使用时甲，乙原液按下列比例配成Hanks液使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，20min灭菌，放4冰箱保存，使用前用NaHCO3调整pH值。第4页，共15页，编辑于2022年，星期一D-Hanks液配方
3、D-Hanks液NaCl4.5gKCl0.2gNaHCO30.175gNa2HPO412H2O0.076gKH2PO40.03g葡萄糖0.5g0.4%酚红2.5ml将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中，最后加双蒸水定容至500ml，以5.6%NaHCO3调整pH值至7.4，4冰箱保存备用。第5页，共15页，编辑于2022年，星期一酚红在低pH值时呈现黄色,在pH6.6至8.0间会呈现橙色，在高pH值时呈现红色。酚红只是起指示酸碱度的作用，有酚红较方便但没有也无妨。有人主张最好不用酚红，可能对细胞生长不利，有时也会影响一些检测结果。此外酚红有雌激素样作用，所以如果做相关的实验最好不加。第6页，共1
4、5页，编辑于2022年，星期一对于Hanks与D-hanks液的配制，不同的文献有不同的配方我们可以看到，两者最主要的区别就是D-hanks液中没有钙镁离子。第7页，共15页，编辑于2022年，星期一Hanks液与D-Hanks液用途上的比较Hanks液是组织培养基本用液，常用于配制培养基及其他用液，或洗涤组织、细胞等。细胞在Hanks液中可以在一段时间内维持一定的活力。另外Hanks液还可以用于终止EDTA的作用。配制胰酶液或者是胰酶/EDTA的基础液都是D-hanks液，而不能使用Hanks液。这是由于钙离子和镁离子会影响胰蛋白酶的活性，也会阻碍EDTA的作用。第8页，共15页，编辑于20
5、22年，星期一PBS磷酸盐缓冲液磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於它们是二级解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽：NaH2PO4：pKa12.12，pKa27.21Na2HPO4：pKa17.21，pKa212.32配酸性缓冲液：用NaH2PO4，pH14，配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH68，配碱性缓冲液：用Na2HPO4，pH1012。因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，一般情况下用钾盐比钠盐好（使用SDS-PAGE时除外）。第9页，共15页，编辑于2022年，星期一PBS与Hanks液的用途区别PBS：磷酸缓冲盐溶液具有pH缓冲作用的等渗盐溶液。多用
6、于非活体。Hanks：平衡盐溶液无机盐和葡萄糖浓度接近大部分动物（植物）细胞的水平，可作为动（植）物细胞短期培养（保存）。多用于活体。Hanks液中盐成分较PBS复杂，且有葡萄糖，可为细胞提供简单的营养，而PSB中只有磷酸根，钠，钾，氯离子，只是最简单的盐平衡缓冲液，不能为细胞提供暂时的营养。第10页，共15页，编辑于2022年，星期一其他缓冲系统碳酸盐缓冲系统一般细胞培养液的pH在7.0-7.4之间。由于碳酸盐pH缓冲系统是一种生理pH缓冲系统，大多数培养液用它来保持稳定的pH。为了维持稳定的pH，培养箱中的二氧化碳需要维持在2-10%之间，以保持培养液中溶解的二氧化碳的浓度。第11页，共1
7、5页，编辑于2022年，星期一HEPES缓冲系统HEPES，即4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES在pH7.2-7.4之间有很强的缓冲能力，当透气的培养器皿被拿到二氧化碳培养箱外面的时候，由于空气中二氧化碳浓度很低，培养液中碳酸盐缓冲系统就会失去效果，这时候HEPES缓冲系统就能继续保持pH的稳定。第12页，共15页，编辑于2022年，星期一EDTA与胰蛋白酶EDTA，常用的阳离子螯合剂。组织细胞间存在钙黏蛋白（一类Ca2+依赖的细胞黏着糖蛋白）。而EDTA可以通过螯合金属离子，破坏Ca2+或Mg2+依赖性的细胞黏着。胰蛋白酶水解细胞间的蛋白质，方便形成细胞悬液。第13页，共15页，编辑于2022年，星期一消化细胞时可以只使用胰蛋白酶，也可以胰蛋白酶与EDTA同时使用。胰蛋白酶的消化作用可以通过加入血清终止。EDTA的作用可以通过加入Hanks液终止。第14页，共15页，编辑于2022年，星期一青霉素与链霉素一般合称双抗。青霉素主要对革兰氏阳性菌有效。链霉素对许多革兰阴性杆菌作用良好第15页，共15页，编辑于2022年，星期一