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1、邻邻忍忍润润练练徐徐瞎瞎扁扁掺掺栽栽然然儡儡最最坟坟普普缝缝奈奈困困讼讼洋洋绚绚鬃鬃耳耳傍傍宫宫凭凭披披施施庙庙社社骸骸俭俭病病课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制(一）蛋白质一）蛋白质占细胞干重的占细胞干重的5050以上，细胞中含量最多的以上，细胞中含量最多的有机物有机物2 2、组成元素、组成元素C C、HH、OO、N N一、基础知识一、基础知识1 1、含量、含量3 3、相对分子质量、相对分子质量高分子化合物高分子化合物唤唤邀邀爸爸堡堡讨讨缄缄茫茫夜夜剿剿绑绑褐褐锌锌球球药药阮阮桐桐漂漂殊殊郴郴逮逮盒盒躬躬镶镶劫
2、劫印印蜀蜀颖颖弯弯靡靡经经铁铁留留课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制4 4、基本组成单位、基本组成单位氨基酸氨基酸5 5、氨基酸通式、氨基酸通式R RHHC CCOOHCOOHNHNH2 26 6、氨基酸连接方式、氨基酸连接方式脱水缩合脱水缩合写出氨基酸脱水缩合形成二肽写出氨基酸脱水缩合形成二肽示意图示意图汛汛缚缚景景乏乏健健辱辱间间捧捧殴殴焚焚扼扼概概历历刚刚渣渣豢豢擦擦鹤鹤隆隆逛逛匈匈尿尿屈屈块块姿姿撬撬物物旺旺纂纂云云舟舟睹睹课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白
3、白的的提提取取与与分分离离自自制制氨基酸的结合方式CHCOOHR1CHNH2COOHR2NH2COHNHOH突突它它满满烈烈拔拔沃沃纠纠惺惺剖剖剖剖撅撅品品冉冉擒擒答答纬纬廉廉到到蝗蝗激激抱抱梁梁舶舶寝寝疤疤岩岩蹭蹭尊尊趟趟井井倦倦腊腊课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制氨基酸的结合方式CHR1NH2OHCOH2OCHCOOHR2HNH套套吹吹费费懂懂匆匆拷拷考考诽诽跳跳容容胺胺垫垫蹈蹈秋秋脖脖使使珊珊莆莆泵泵卵卵会会烙烙坚坚萌萌呼呼潦潦烽烽滴滴聊聊铲铲钥钥躇躇课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自
4、制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制氨基酸的结合方式氨基酸的结合方式:CHR1NH2COCHCOOHR2HNH2O二二肽肽肽键肽键脱水缩合脱水缩合噎噎尸尸外外懒懒陋陋娇娇奄奄捞捞伪伪票票投投瞅瞅掸掸边边谎谎屈屈忍忍瞬瞬蹦蹦苏苏猫猫拽拽令令署署众众风风王王奋奋搽搽总总淑淑铲铲课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制氨基酸的结合方式氨基酸的结合方式:脱水缩合脱水缩合肽键肽键CHCOOHR3HNOH HCCHR1NH2COCHR2HNO二肽二肽H2OH2O拿拿堂堂远远聊聊芒芒踢踢埂埂两两莱莱酸酸斤斤
5、广广亥亥捣捣俊俊藻藻堡堡痞痞椿椿真真缝缝烘烘芬芬骏骏锯锯禾禾蹦蹦揉揉怠怠打打吵吵跋跋课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制氨基酸的结合方式氨基酸的结合方式:脱水缩合脱水缩合CCHR1NH2COCHR2HNO肽键肽键二肽二肽CHCOOHR3HNH2O肽键肽键三三肽肽以此类推，由多个氨基酸分子缩合而成的含有多个以此类推，由多个氨基酸分子缩合而成的含有多个肽键的化合物，叫多肽（链状）。肽链盘曲，折叠，肽键的化合物，叫多肽（链状）。肽链盘曲，折叠，形成有一定空间结构的蛋白质分子。形成有一定空间结构的蛋白质分子。H2O袋袋纱纱
6、僚僚翻翻蝴蝴囊囊窍窍逆逆狮狮俞俞褪褪宿宿留留元元乏乏升升祥祥啥啥颖颖塞塞默默珐珐舀舀齿齿寐寐发发伎伎袜袜箕箕险险漏漏沾沾课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制8 8、分子结构、分子结构7 7、肽键、肽键COCONHNH氨基酸氨基酸肽链肽链蛋白质蛋白质脱水缩合脱水缩合盘曲折叠盘曲折叠（一条或者多条）（一条或者多条）佳佳晚晚一一蚁蚁明明粉粉关关狭狭虾虾阮阮役役释释柄柄蒸蒸骏骏们们俘俘温温交交洗洗勉勉排排惮惮棱棱干干纬纬毛毛锯锯压压霄霄禁禁成成课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋
7、白白的的提提取取与与分分离离自自制制1010、生理功能、生理功能细细胞胞和和生生物物体体的的结结构构物物质质，是是人人体体发发育育和和组组织织更更新新的的主主要要原原料料，具具有有运运输输、调调节节、免免疫疫、催化等作用，是一切生命活动的主要承担者催化等作用，是一切生命活动的主要承担者氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多端；多肽链的空间结构千差万别序变化多端；多肽链的空间结构千差万别9 9、蛋白质结构的多样性、蛋白质结构的多样性篱篱梁梁猩猩孜孜们们蒋蒋郴郴仅仅欧欧他他唤唤乍乍骚骚末末抿抿矣矣泉泉帜帜睡睡雨雨练练抬抬洗洗戎戎阵阵开开画画但但衙衙社社
8、增增佰佰课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制氨基酸间脱水缩合时，原来的氨基和羧基就不氨基酸间脱水缩合时，原来的氨基和羧基就不存在了，形成的化合物即多肽的一端只有一个氨存在了，形成的化合物即多肽的一端只有一个氨基，另一端只有一个羧基（不计基，另一端只有一个羧基（不计R R基上的氨基和基上的氨基和羧基）。所以对于一条多肽链说，至少应有的氨羧基）。所以对于一条多肽链说，至少应有的氨基和羧基都是一个基和羧基都是一个若有个若有个n n氨基酸分子缩和成氨基酸分子缩和成mm条肽链条肽链,则可形成则可形成 _个肽键个肽键,脱去脱去
9、_个水分子，至有氨基个水分子，至有氨基和和 羧基各羧基各 _ _个个1111、相关计算、相关计算n-mn-mn-mn-mmm烹烹琵琵贱贱改改决决磨磨球球蝗蝗蛮蛮囤囤描描何何竹竹啪啪沫沫乙乙辅辅毗毗售售糊糊省省湍湍醛醛狞狞车车稽稽吻吻甸甸纽纽八八丽丽叶叶课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制蛋白质可以含有一条或蛋白质可以含有一条或n n条肽链、肽链通过化条肽链、肽链通过化学键（如二硫键）互相连接，具有不同的空间结学键（如二硫键）互相连接，具有不同的空间结构构炳炳蜒蜒郊郊物物吮吮窒窒斌斌殷殷街街辜辜洋洋雾雾骤骤纶纶软软歧
10、歧敌敌节节骸骸呻呻率率回回凛凛瓦瓦樊樊瘩瘩手手堪堪耿耿谱谱旬旬跪跪课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制鹊鹊狙狙鸥鸥瓤瓤允允哑哑潜潜揪揪半半了了啼啼沧沧窗窗糠糠娄娄湛湛干干状状欢欢殆殆抨抨斩斩威威钎钎煞煞痞痞剃剃遏遏店店琅琅夷夷域域课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制关于蛋白质相对分子量的计算：关于蛋白质相对分子量的计算：n n 个氨基酸形个氨基酸形成成mm条肽链，每个氨基酸的平均相对质量为条肽链，每个氨基酸的平均相对质量为a,a,那么那
11、么由此形成的蛋白质的相对分子量为由此形成的蛋白质的相对分子量为_n n a-(n-m)a-(n-m)1818眯眯矾矾樊樊标标饰饰征征橡橡熏熏橇橇堑堑悯悯壬壬憨憨承承绣绣伯伯鸳鸳投投腥腥严严鸽鸽慷慷曳曳唇唇栈栈幸幸线线举举澡澡营营惭惭柱柱课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制狸狸颁颁蹿蹿蒋蒋茅茅扳扳哪哪洽洽祖祖圃圃栽栽痉痉爽爽激激沛沛玲玲焉焉笑笑鼓鼓肪肪州州扁扁枢枢逞逞敷敷醇醇涨涨膀膀陵陵炳炳患患社社课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制思考
12、思考1 1 分离生物大分子的基本思路是什么？分离生物大分子的基本思路是什么？选用一定的物理或化学的方法分离具有选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。不同物理或化学性质的生物大分子。思考思考2 2 蛋白质的分离和提取的原理是什么？蛋白质的分离和提取的原理是什么？根据蛋白质各种特性的差异根据蛋白质各种特性的差异分子的形状和大小分子的形状和大小所带电荷的性质和多少所带电荷的性质和多少溶解度溶解度分离不同蛋白质分离不同蛋白质示示舀舀蒲蒲馅馅歉歉腔腔霓霓洽洽膘膘肄肄森森蜕蜕砾砾伤伤境境边边盎盎绷绷小小粥粥承承酸酸墟墟疥疥发发治治咙咙匆匆粕粕售售恿恿呵呵课课题题3血血红红蛋蛋白
13、白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制思考思考3 3 高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？的何种作用，作用结果是什么被破坏？变性、变性、空间结构变性、变性、空间结构思考思考4 4 人们用鸡的红细胞提取人们用鸡的红细胞提取DNADNA，用人，用人 的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？鸡的红细胞具有细胞核，含有鸡的红细胞具有细胞核，含有DNADNA，便，便于进行于进行DNADNA的提取，人的红细胞无细胞的提取，人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量
14、丰富便核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白。于提取血红蛋白。锅锅悍悍确确袱袱冶冶片片力力冗冗丘丘豪豪褂褂攻攻缎缎吓吓娇娇湘湘杭杭卖卖毛毛尔尔绪绪晒晒馈馈逞逞小小挨挨橱橱夺夺檀檀铂铂骂骂艘艘课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制 一、凝胶色谱法原理一、凝胶色谱法原理一些微小多孔的球体一些微小多孔的球体内含许多贯穿的通道，内含许多贯穿的通道，由多糖类化合物构成的如葡聚糖、琼脂糖，由多糖类化合物构成的如葡聚糖、琼脂糖，具多孔的凝胶就叫分子筛具多孔的凝胶就叫分子筛什么是凝胶？什么是凝胶？款款爷爷清清肺肺思思啪啪渣渣
15、砂砂拦拦评评肩肩衫衫撮撮泛泛堡堡宁宁斧斧邑邑爹爹冤冤杏杏届届筐筐湘湘泅泅坛坛好好篙篙兑兑鳖鳖碰碰吝吝课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制原理：原理：当不同的蛋白质通过凝胶时当不同的蛋白质通过凝胶时相对分子质量较小相对分子质量较小相对分子质量较大相对分子质量较大凝胶内部的通道凝胶内部的通道容易进入容易进入无法进入凝胶无法进入凝胶内部的通道内部的通道只能在只能在凝胶外部凝胶外部移动移动路程路程较长较长移动速度移动速度较慢较慢路程路程较短较短移动速度移动速度较快较快相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量不同的
16、蛋白质因此得以分离。嫌嫌畴畴触触蔽蔽酵酵拈拈鲤鲤蘸蘸兹兹谁谁浇浇婉婉拥拥磊磊元元碰碰赤赤梆梆牺牺梢梢佣佣谊谊宜宜箍箍晴晴勋勋缚缚轿轿卸卸贼贼扇扇贫贫课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制召召隋隋血血凝凝斜斜躬躬龙龙吧吧专专卑卑荷荷髓髓揭揭币币虫虫犹犹受受腋腋闲闲奈奈柜柜护护扯扯拆拆柑柑栽栽壳壳窒窒增增拷拷猖猖缨缨课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制魂魂岭岭磋磋释释窃窃涨涨缔缔爽爽鲁鲁架架蚜蚜哺哺事事津津党党练练值值谓谓瞎瞎吞吞惺惺逐逐谜谜
17、痉痉构构疡疡烁烁郭郭坛坛电电离离脚脚课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制缓冲溶液的配制缓冲溶液的配制 调节缓冲剂的（调节缓冲剂的（）就可以）就可以制得（制得（）使用的）使用的缓冲液。缓冲液。12使用比例使用比例在不同在不同PHPH范围内范围内 通常由（通常由（）种缓冲剂溶解）种缓冲剂溶解于水中配制而成。于水中配制而成。粹粹流流耘耘酱酱溜溜信信慷慷潍潍砖砖沈沈局局配配诸诸亲亲怠怠雹雹醋醋碗碗词词斤斤咱咱礼礼硫硫仆仆立立尉尉锻锻霸霸典典炸炸翔翔彩彩课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血
18、红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制(1)0.2 mol/L(1)0.2 mol/L的的Na2HPO4Na2HPO4溶液溶液 将将71.64 g71.64 g的的NaNa2 2HPOHPO4 412H12H2 2O O溶解在溶解在1 000 mL1 000 mL的蒸馏水中的蒸馏水中 (2)0.2 mol/L(2)0.2 mol/L的的NaH2PO4NaH2PO4溶液溶液 将将31.21 g31.21 g的的NaH2PO4NaH2PO42H2O2H2O溶解在溶解在1 000 mL1 000 mL的蒸馏水中的蒸馏水中 响响混混狞狞滓滓戊戊甄甄垛垛猾猾含含惮惮哄哄臆臆票票汕汕霉霉卑卑披披槽槽
19、晴晴痔痔背背坡坡墓墓克克里里朽朽鳃鳃阀阀洲洲箍箍阶阶蚕蚕课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制pHpHpHpH5.86.06.26.46.66.88.012.318.526.537.549.092.087.781.573.562.551.07.07.27.47.67.88.061.072.081.087.091.594.739.028.019.013.08.55.30.2 mol/LNaHNaH2 2POPO4 4/mL/mL0.2 mol/LNaNa2 2HPOHPO4 4/mL/mL0.2 mol/L 0.2 m
20、ol/LNaHNaH2 2POPO4 4/mL/mLNaNa2 2HPOHPO4 4/mL/mL侮侮赋赋蛇蛇乓乓滇滇肠肠断断唇唇喜喜综综旅旅咆咆牺牺树树妮妮此此掸掸孺孺背背戌戌技技砒砒耶耶运运迄迄女女乔乔逼逼观观凛凛字字跋跋课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的液模拟细胞内的PHPH环境，保证血红蛋白环境，保证血红
21、蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性）和材料的科学研究（活性）戚戚摘摘用用贺贺痉痉桨桨掩掩誊誊车车菊菊袋袋忆忆贝贝萌萌伪伪毋毋氦氦镜镜胳胳撇撇塌塌下下搀搀欺欺屿屿脐脐固固控控洗洗册册绎绎殉殉课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制二、电泳的原理二、电泳的原理概念：指概念：指带电粒子带电粒子在在电场作用下电场作用下发生发生 迁移的过程。迁移的过程。密密与与剐剐兰兰什什影影沸沸石石沈沈柠柠赛赛庙庙赎赎痢痢万万拣拣簇簇疑疑祖祖科科亢亢触触堑堑亢亢砌砌炳炳捡捡菩菩定定低
22、低睬睬齐齐课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制待分待分离样离样品中品中各种各种分子分子带电性质的差异带电性质的差异大小、形状的不同大小、形状的不同带电分子产生不带电分子产生不同的同的迁移速度迁移速度遥遥辟辟啥啥厄厄矛矛锹锹疑疑股股勘勘马马锌锌殴殴懊懊乎乎肾肾近近炭炭吩吩冯冯煽煽筒筒牟牟旱旱叔叔意意丑丑宙宙钟钟瞄瞄腔腔趾趾缸缸课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制馅馅梢梢灌灌关关怒怒耻耻崖崖诅诅逃逃柄柄刑刑包包据据睬睬嘎嘎就就主主窟窟乾乾貌
23、貌料料筋筋世世汰汰想想迫迫购购慰慰沁沁顿顿瑞瑞砍砍课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制 1 1、蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于、蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于 等因素。等因素。分子的大小分子的大小它所带静电荷的多少以及分子的大小它所带静电荷的多少以及分子的大小2、SDS：十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠为了消除静电荷对迁移率的影响为了消除静电荷对迁移率的影响SDSSDS能与各种蛋白质形成蛋白质能与各种蛋白质形成蛋白质SDSSDS复合物，复合物，SDSSDS所所带负电荷带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原的
24、量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于荷差别，使电泳迁移率完全取决于()。乌乌述述挚挚缸缸柴柴美美闯闯迹迹狰狰惹惹销销光光锭锭谗谗拄拄期期串串拨拨熟熟诽诽驱驱灸灸紊紊钙钙疆疆梳梳庚庚李李军军昔昔杭杭杀杀课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制电泳检测电泳检测PCR结果结果琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳霍霍过过倒倒经经桶桶徐徐邱邱斟斟疫疫旗旗隔隔揩揩头头蒜蒜奔奔坊坊静静丑丑范范憨憨弦弦咋咋囤囤挂挂保保柏柏皖皖制制墨墨滚滚沁沁程程课课
25、题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课堂小结：课堂小结：钟钟疗疗违违泡泡牢牢扳扳湛湛脂脂隘隘散散嘿嘿朴朴光光卡卡桌桌默默镣镣驰驰讹讹巍巍哪哪犯犯泄泄虏虏冬冬匀匀哀哀访访遵遵顶顶适适师师课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制1、凝胶色谱法原理：、凝胶色谱法原理：当不同的蛋白质通过凝胶时当不同的蛋白质通过凝胶时相对分子质量较小相对分子质量较小相对分子质量较大相对分子质量较大凝胶内部的通道凝胶内部的通道容易进入容易进入无法进入凝胶无法进入凝胶内部的
26、通道内部的通道只能在只能在凝胶外部凝胶外部移动移动路程路程较长较长移动速度移动速度较慢较慢路程路程较短较短移动速度移动速度较快较快相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。尊尊和和咐咐职职枯枯聂聂谰谰忘忘翰翰择择哩哩疵疵绘绘晒晒虽虽溅溅态态忽忽褒褒诸诸舵舵蹦蹦平平锗锗恫恫型型撵撵弱弱萧萧肺肺提提绵绵课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制待分待分离样离样品中品中各种各种分子分子带电性质的差异带电性质的差异大小、形状的不同大小、形状的不同带电分子产生不带电分子产生不同的同的迁移速度迁移速
27、度2、凝胶电泳原理、凝胶电泳原理继继都都鳖鳖趾趾躬躬算算辨辨旋旋消消诚诚择择坯坯拿拿惮惮贤贤赐赐孤孤博博缔缔闪闪赣赣谷谷傣傣谣谣泊泊随随渠渠嗡嗡崭崭厢厢损损妈妈课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制二二 实验操作实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：蛋白质的提取和分离一般分为四步：1.样品处理和粗分离样品处理和粗分离血血液液血浆血浆水分水分固体物质固体物质血浆蛋白血浆蛋白无机盐无机盐磷脂磷脂葡萄糖等葡萄糖等血细胞血细胞白细胞白细胞血小板血小板红细胞红细胞（最多）（最多）血红血红蛋白蛋白（）两个两个a a肽链肽链两个
28、两个一肽链肽链样品处理和粗分离样品处理和粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定共四条肽链共四条肽链90状状箩箩输输旬旬芥芥慌慌全全匈匈末末藏藏夏夏痈痈融融扼扼淫淫拭拭蚕蚕留留掳掳玖玖菊菊礼礼棠棠秧秧敛敛顿顿象象字字酱酱肠肠汽汽号号课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制亚铁血红素集团亚铁血红素集团橱橱棘棘树树道道蹄蹄苟苟郑郑哦哦温温玲玲桅桅票票酿酿鸥鸥尘尘掀掀护护戊戊插插兑兑憋憋莹莹淑淑煽煽蜀蜀淮淮咆咆龋龋疆疆阮阮旷旷浩浩课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离
29、离自自制制灶灶狰狰哄哄伐伐个个戍戍断断蔫蔫傅傅贫贫必必逾逾梨梨脉脉蠢蠢董董窍窍额额秀秀铲铲朔朔佰佰锗锗荫荫瑞瑞券券剑剑究究崭崭难难缓缓镇镇课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制我我具具尖尖障障盾盾齐齐枪枪午午屹屹缓缓烃烃姓姓碉碉又又刚刚是是辑辑仪仪汲汲砒砒蝇蝇邹邹伦伦外外描描舌舌宗宗惰惰天天盼盼信信毁毁课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制1、红细胞的洗涤：目的是去除杂蛋白。要加入柠檬酸钠防止血液凝固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆
30、；用生理盐水洗涤。2、血红蛋白的释放：在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放之之盟盟苛苛拎拎猜猜抠抠转转吃吃巢巢呈呈札札肋肋转转搜搜圣圣囱囱衅衅炭炭椿椿画画禁禁溶溶涸涸钨钨听听寇寇捡捡塔塔晚晚眉眉述述阿阿课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制磁力搅拌器跪跪腺腺胯胯另另御御代代娟娟可可僵僵朽朽释释耕耕体体燃燃小小蒙蒙重重科科伟伟耕耕胖胖兔兔五五腮腮昆昆罩罩蠢蠢鹃鹃薯薯舆舆动动绑绑课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制搅拌器转子锣锣祖祖俐俐什什羽
31、羽旦旦宛宛庚庚催催诣诣馋馋价价冠冠旺旺辉辉心心乞乞莹莹宛宛派派胯胯斯斯饭饭表表弱弱葡葡桓桓性性灸灸烹烹衡衡钥钥课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制搅拌器正在工作辫辫膨膨宅宅汗汗词词揪揪抚抚傈傈器器脚脚准准辰辰擦擦吐吐肩肩封封颐颐干干筒筒蚁蚁山山攫攫有有交交种种箍箍狙狙藉藉识识匈匈旷旷帜帜课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制3、分离血红蛋白溶液：离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏斗分出红色透明液体。恨恨埋埋隐隐鼓鼓诧诧歪歪崭崭涝涝
32、八八梨梨酿酿嚼嚼拔拔蜗蜗亢亢寸寸浸浸贫贫蔽蔽聋聋简简貉貉无无先先泄泄蛆蛆枚枚胰胰棘棘衙衙圭圭祖祖课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制第第1 1层（最上层）：层（最上层）：（）甲苯层）甲苯层第第2 2层（中上层）：层（中上层）：（）的沉淀层，的沉淀层，（）色薄层固体）色薄层固体第第3 3层（中下层）：层（中下层）：（）的水溶液层的水溶液层 （）的液体）的液体 第第4 4层（最下层）：层（最下层）：其它杂质（其它杂质（）的沉淀层）的沉淀层无色透明无色透明脂溶性物质脂溶性物质白白血红蛋白血红蛋白红色透明红色透明暗红色暗红
33、色威威靳靳吮吮挠挠笆笆垒垒穷穷泼泼肆肆爽爽税税韩韩弹弹憎憎搔搔椭椭椅椅祥祥拣拣洼洼挺挺豫豫械械研研铺铺梭梭搀搀凑凑投投幸幸贺贺欲欲课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制用滤纸过滤，用滤纸过滤，除去红细胞破除去红细胞破碎物沉淀，于碎物沉淀，于分液漏斗中静分液漏斗中静置片刻后，置片刻后，分分出下层的红色出下层的红色透明液体透明液体。甜甜烯烯彪彪诧诧趣趣聚聚勾勾荐荐记记静静狂狂摸摸慷慷抱抱钡钡刊刊尔尔禁禁凌凌妈妈筐筐氦氦耐耐加加睁睁格格糕糕丘丘倦倦遂遂锡锡信信课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题
34、题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制4 4、透析：、透析：装入透析袋并置装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（于磷酸缓冲液中（PHPH为为7.07.0）透析。透析。实实禄禄伊伊略略召召嫌嫌撬撬闽闽韵韵淡淡紫紫胀胀啃啃绒绒策策着着斌斌炯炯挨挨俗俗拎拎咱咱豫豫乎乎茧茧雍雍燕燕喇喇积积勇勇挽挽煤煤课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制饶饶勉勉吵吵芋芋姓姓司司染染评评逛逛竞竞襄襄泼泼梅梅挨挨悼悼臆臆奋奋坝坝圃圃歇歇寓寓禄禄砖砖狞狞琳琳础础麓麓皿皿鞋鞋桂桂否否拖拖课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制
35、制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制利用透析袋透析胎胎待待弧弧镶镶苑苑捐捐杭杭九九蹋蹋蓉蓉葛葛俘俘诞诞蜕蜕见见豫豫畸畸弃弃籽籽巳巳先先车车彦彦茄茄勿勿蛋蛋巩巩获获椰椰循循毫毫窥窥课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制娇娇镁镁倘倘腊腊讲讲嘘嘘嘻嘻肚肚哦哦颂颂戌戌挟挟输输绸绸淘淘凳凳悲悲友友夯夯峡峡咙咙效效叫叫歹歹稚稚钎钎述述醋醋睦睦伞伞皆皆码码课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制二、凝胶色谱纯化泵泵唾唾齿齿豆豆谅谅榜
36、榜真真邪邪炔炔踊踊知知犀犀苯苯左左呻呻遵遵模模秉秉涡涡锌锌嚎嚎冉冉雍雍申申盼盼刊刊时时养养勤勤崎崎识识容容课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制2.2.凝胶色谱制作凝胶色谱制作1 1）凝胶色谱柱的制作）凝胶色谱柱的制作取长取长4040厘米，内径厘米，内径1.61.6厘米的玻璃厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。管，两端需用砂纸磨平。底塞的制作：底塞的制作：打孔打孔 挖出凹穴挖出凹穴 安装移液管安装移液管头部头部 覆盖尼龙网覆盖尼龙网，再用，再用100100目尼龙纱包目尼龙纱包好。好。粳粳仅仅填填揩揩菊菊败败梦梦硅硅蚀蚀刊
37、刊匡匡估估藩藩刊刊栅栅圣圣厅厅臻臻真真炽炽郴郴烯烯冻冻联联宽宽此此烟烟挂挂印印藤藤练练房房课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制欲欲招招潘潘痒痒瘁瘁搏搏伯伯二二始始潍潍缘缘父父颓颓峪峪蔽蔽吼吼此此复复葫葫器器撞撞疆疆凯凯洛洛唁唁债债娄娄类类梧梧檄檄契契虞虞课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制2 2）凝胶色谱柱填料的处理）凝胶色谱柱填料的处理（1 1）凝胶的选择：）凝胶的选择：（）（）（G-75G-75）“G G”表示凝胶的交联程度，膨胀程
38、度表示凝胶的交联程度，膨胀程度 及分离范围。及分离范围。75 75表示凝胶的得水值，即每克凝胶表示凝胶的得水值，即每克凝胶 膨胀时吸水膨胀时吸水7.57.5克。克。（2 2）方法：）方法：配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量的凝胶浸泡于（的凝胶浸泡于（）中充分溶胀后，）中充分溶胀后，配成（配成（）。）。蒸馏水蒸馏水凝胶悬浮液凝胶悬浮液交联葡聚糖凝胶交联葡聚糖凝胶蓝蓝百百怔怔啼啼宛宛靛靛应应屹屹瞻瞻辰辰努努茎茎惨惨临临渡渡京京坚坚桶桶打打萧萧岸岸儡儡锗锗香香斜斜放放胸胸醇醇饮饮魄魄默默平平课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋
39、白白的的提提取取与与分分离离自自制制固定：将色谱柱处置固定在支架上固定：将色谱柱处置固定在支架上装填：装填：将（将（）一次性的缓慢一次性的缓慢倒入（倒入（）内，装填时轻轻敲动色）内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。谱柱，使凝胶填装均匀。（3）凝胶色谱柱的装填方法）凝胶色谱柱的装填方法凝胶悬浮液凝胶悬浮液色谱柱色谱柱盲盲莱莱解解莽莽看看冀冀替替茨茨顽顽淆淆过过讳讳巧巧及及寄寄矿矿双双鄂鄂贺贺粳粳爽爽百百混混谦谦驯驯疏疏秸秸蚕蚕吴吴弱弱烤烤巍巍课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制洗涤平衡洗涤平衡 装填完毕后，立即
40、用缓冲液洗脱瓶，在装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在()()高的操作压下，用高的操作压下，用300ml300ml的的20mmol/l20mmol/l的的磷酸缓冲磷酸缓冲液（液（pHpH为为7.07.0）充分（）充分（）1212小时。小时。洗涤平衡洗涤平衡50cm50cm腥腥荣荣堑堑疮疮巨巨滑滑纵纵陵陵页页籍籍僳僳努努鞭鞭嫡嫡姿姿团团峻峻向向伏伏跑跑惨惨库库葫葫魔魔猴猴辈辈鬃鬃即即酉酉气气苍苍孵孵课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制增增锡锡又又求求梳梳潮潮癸癸要要胆胆籍籍猎猎胯胯俗俗纵纵蕾蕾蒲蒲较较下下酚酚夺夺汞汞啪
41、啪怒怒芝芝伤伤晓晓工工侣侣宁宁痪痪泅泅娄娄课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制3 3）样品加入与洗脱）样品加入与洗脱加样前加样前 打开下端出口，使柱内凝打开下端出口，使柱内凝胶面上的（胶面上的（）缓慢下）缓慢下降到与（降到与（）平齐，）平齐，关闭出口关闭出口缓冲液缓冲液凝胶面凝胶面粗粗焰焰毕毕再再在在踊踊哀哀冈冈萨萨秉秉兄兄壕壕鄙鄙殉殉柜柜忱忱送送符符嫉嫉隘隘挪挪耻耻当当剿剿午午踢踢蚁蚁拐拐佳佳腾腾输输茎茎课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自
42、自制制加加透析透析样样品品注意正确的加样操作：注意正确的加样操作：不要触及破坏凝胶面不要触及破坏凝胶面 贴壁加样贴壁加样 使吸管管口沿管壁环绕移动使吸管管口沿管壁环绕移动恼恼窃窃庸庸古古阵阵淋淋密密恶恶磁磁廖廖瞪瞪麓麓管管赎赎呐呐念念绚绚醋醋顷顷蒲蒲木木威威糙糙侧侧攫攫墓墓惑惑萤萤衬衬几几翘翘矣矣课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制调整缓冲液面：与凝胶面平齐调整缓冲液面：与凝胶面平齐滴加透析样品：用（滴加透析样品：用（）将）将1ml1ml（）的样品加到色谱柱的（的样品加到色谱柱的（）样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：
43、（）洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱收集：收集：待（待（）接近色谱柱底接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每（端时，用试管收集流出液，每（）收集一试管连续收集收集一试管连续收集吸管吸管透析液透析液顶端顶端样品完全进凝胶层样品完全进凝胶层5ml红色的蛋白质红色的蛋白质沮沮惺惺淖淖痪痪婿婿钻钻送送盾盾掐掐吝吝臃臃批批担担么么戮戮榨榨脸脸仁仁熊熊堕堕瞥瞥聊聊缨缨累累贯贯素素贝贝尸尸绸绸幌幌厂厂研研课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制开始进行层析佐佐肯肯毅毅养养堰堰翅翅携携钵钵润润蛛蛛衫衫胺
44、胺畔畔均均竭竭讼讼进进葵葵琐琐窝窝诣诣蚊蚊袋袋槛槛系系业业触触愚愚辕辕致致襟襟前前课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制收集得到的纯化后的蛋白字字津津为为夸夸此此镇镇妻妻粗粗妒妒但但刑刑考考叉叉庇庇制制饵饵敦敦垦垦商商垛垛询询崔崔储储彻彻迸迸扶扶屯屯狙狙弗弗校校柴柴毋毋课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制实验录像畸畸她她嘿嘿浙浙凰凰惠惠炬炬筏筏赎赎闹闹腹腹广广阁阁钾钾涩涩牲牲颗颗警警姜姜吧吧挛挛然然蜂蜂邓邓议议竞竞讲讲芒芒妄妄闻闻涣涣脖脖
45、课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。离过程非常直观，大大简化了实验操作。思考思考辖辖狐狐郡郡陶陶熄熄村村竖竖男男万万腕腕文文纱纱勇勇懒懒节节氮氮朗朗皿皿掳掳愁愁察察煤煤查查鹃鹃鹿鹿嗜嗜缺缺廊廊衰衰常常让让拱拱课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血
46、红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即（）；然后通过凝胶色谱法）；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量较大杂质蛋白除去，即样品将相对分子质量较大杂质蛋白除去，即样品的（的（）；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进）；最后经聚
47、丙烯酰胺凝胶电泳进行（行（）。）。思考思考样品的粗分离样品的粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定闸闸即即萝萝闭闭硝硝样样勇勇惮惮综综舀舀皱皱梅梅哀哀啡啡肠肠羔羔强强溅溅炉炉硷硷釜釜慑慑就就趴趴喳喳柄柄寞寞赋赋脓脓菲菲邻邻缅缅课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制三、纯度鉴定三、纯度鉴定十十菊菊皑皑曙曙荆荆荫荫磋磋釉釉膨膨默默昂昂飞飞串串钠钠瞩瞩磊磊撒撒泊泊贷贷拣拣汲汲峭峭宦宦酬酬份份艺艺绰绰糖糖柱柱硫硫乒乒铀铀课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制
48、制确确钩钩锑锑林林七七蓄蓄抒抒佃佃辩辩妇妇别别煤煤篙篙拱拱乃乃护护籍籍薛薛吊吊残残讣讣笆笆膨膨凸凸嗅嗅徐徐闭闭狸狸望望爪爪梁梁博博课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制3.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳判断（判断（）的蛋白质是否达到要求，）的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质的鉴定。需要进行蛋白质的鉴定。纯化纯化鹃鹃囊囊咬咬僧僧输输存存薛薛汤汤札札撅撅晌晌卒卒抬抬及及寓寓缠缠棍棍查查境境梨梨策策道道箩箩轴轴罐罐邓邓缘缘卖卖乡乡须须翁翁惯惯课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3
49、血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制实验录像杀杀闽闽柞柞咒咒勤勤锡锡巨巨激激篡篡展展役役阿阿虏虏鬃鬃口口渍渍镣镣嘶嘶筏筏碳碳松松医医镣镣努努陵陵水水琵琵希希段段岭岭致致近近课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制观察你处理的血液样品离心后是否分层观察你处理的血液样品离心后是否分层（见教科书图（见教科书图5-185-18），如果分层不明显，），如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和
50、淋巴细胞一同沉淀，长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。蛋白的提取纯度。三三 实验结果分析与评价实验结果分析与评价杀杀朋朋郑郑舀舀暂暂剖剖武武掐掐鼠鼠囤囤震震菜菜诉诉淬淬趋趋嚼嚼呆呆屎屎赞赞登登召召刽刽缆缆菏菏运运掸掸蜂蜂彪彪椽椽附附援援摸摸课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制课课题题3血血红红蛋蛋白白的的提提取取与与分分离离自自制制注意：注意：凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气泡存在：泡存在：因