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1、课题课题2 2 月季的花药培养月季的花药培养1 1、被子植物定义：、被子植物定义：凡是种子有果皮包被着，凡是种子有果皮包被着，胚珠有子房壁包被着的植物，就叫做被子植物胚珠有子房壁包被着的植物，就叫做被子植物被子植物和裸子植物被子植物和裸子植物2 2、裸子植物定义：、裸子植物定义：凡是胚珠裸露，外面没有凡是胚珠裸露，外面没有子房壁包被，种子外面没有果皮包被的植物称子房壁包被，种子外面没有果皮包被的植物称为裸子植物为裸子植物实例：哈密瓜、杏、桃子实例：哈密瓜、杏、桃子实例：松、紫衫、铁树实例：松、紫衫、铁树被子植物被子植物哈密瓜哈密瓜桃子桃子裸子植物裸子植物月季：被子植物月季：被子植物花丝花丝花药
2、花药一、被子植物的花粉发育一、被子植物的花粉发育雄雄蕊蕊被子植物的花粉被子植物的花粉发育育花丝：支撑着花药的结构花丝：支撑着花药的结构 花药：花药：囊状结构囊状结构，内有很多花粉粒，内有很多花粉粒花粉是花粉母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉花粉是花粉母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是是单倍体的生殖细胞单倍体的生殖细胞。花粉的发育要经历：小孢子四分体时期、单核期（居中、花粉的发育要经历：小孢子四分体时期、单核期（居中、靠边）、双核期靠边）、双核期雄雄蕊蕊花花粉粉粒粒 小孢子小孢子四分体时期四分体时期 单核单核居中期居中期 单核单核靠边期靠边期双核期双核期小孢子小孢子母细胞母细胞1 1
3、1 1花粉花粉花粉花粉母细胞母细胞母细胞母细胞4 4 4 4个小个小个小个小 孢子孢子孢子孢子减数减数减数减数分裂分裂分裂分裂有丝有丝有丝有丝分裂分裂分裂分裂4 4 4 4个营养细胞核个营养细胞核个营养细胞核个营养细胞核4 4 4 4个生殖细胞核个生殖细胞核个生殖细胞核个生殖细胞核有丝有丝有丝有丝分裂分裂分裂分裂8 8 8 8个精子个精子个精子个精子4 4 4 4个个花花个个花花粉粉 粒粒粉粉 粒粒二、产生花粉植株的两种途径二、产生花粉植株的两种途径移栽移栽花药中花药中的花粉的花粉胚状体胚状体脱脱分分化化 愈伤组织愈伤组织 花药中花药中的花粉的花粉脱脱分分化化分分化化丛芽丛芽 再再分分化化丛芽
4、丛芽 诱诱导导生根生根取决于：培养基中激素种类及其浓度配比取决于：培养基中激素种类及其浓度配比二倍体二倍体单倍体单倍体愈伤组织：在人工愈伤组织：在人工培养基上由外植体培养基上由外植体长出来的一团无序长出来的一团无序生长的薄壁细胞生长的薄壁细胞（细胞排列疏松、（细胞排列疏松、无规则）。无规则）。体细胞胚：体细胞胚：在组织培养过程中，某些体细胞在形态上在组织培养过程中，某些体细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，被称为亦与合子胚类似，被称为体细胞胚体细胞胚体细胞胚体细胞胚。花粉胚：花粉胚：最后发育成单倍体植株最后发育
5、成单倍体植株胚状体胚状体植物类型植物类型:不同种植物诱导成功率不同不同种植物诱导成功率不同生理状态生理状态：花期早期的花药反应能力较好花期早期的花药反应能力较好花粉发育时期花粉发育时期：单核靠边期单核靠边期三、影响花药培养的因素三、影响花药培养的因素其他因素其他因素完全未开放的月季花蕾（选）完全未开放的月季花蕾（选）略微开放的月季花蕾略微开放的月季花蕾为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。四、实验操作四、实验操作（一）材料的选取（一）材料的选取焙花青焙花青-铬矾法铬矾法 蓝黑色蓝黑色最常用：醋酸洋红
6、法最常用：醋酸洋红法 红色红色1 1、方法、方法醋酸洋红的配置醋酸洋红的配置2 2、醋酸洋红法、醋酸洋红法染色操作染色操作3 3、焙花青、焙花青铬钒法铬钒法卡诺氏固定液的配制方法卡诺氏固定液的配制方法焙花青焙花青铬钒溶液的配制方法铬钒溶液的配制方法染色操作染色操作（二）材料的消毒（二）材料的消毒1 1、酒精处理、酒精处理酒精：酒精：70%70%的酒精的酒精浸泡，浸泡，3030秒秒无菌水清洗无菌水清洗无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分2 2、消毒液处理、消毒液处理 放入放入质量分数为质量分数为0.1%0.1%的氯化汞的氯化汞溶液中溶液中2424分钟分钟（也可质量分数（也可质
7、量分数为为1%1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液粉溶液）无菌水冲洗无菌水冲洗3535次次（三）接种和培养（三）接种和培养要彻底去除花丝要彻底去除花丝1 1、剥取花药（无菌条件）、剥取花药（无菌条件）勿损伤花药勿损伤花药注意：注意：每瓶每瓶接种花药接种花药7-107-10个个。2 2、接种、接种培养条件：温度培养条件：温度：2525左右，不需要光照左右，不需要光照3 3、培养、培养培养培养注意：注意：必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开主要原因：主要原因：营养核和生殖核融合营养核和生殖核融合4 4、鉴定和筛选、鉴定和筛选选材是否恰当选材是否
8、恰当 选材是否成功是花药培养成功的选材是否成功是花药培养成功的关键。应学会通过显微镜观察处于适关键。应学会通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。宜发育期的花粉。五：课题成果评价五：课题成果评价无菌技术是否过关无菌技术是否过关 如果出现了污染现象，说明某些如果出现了污染现象，说明某些操作步骤，如培养基灭菌、花蕾消毒操作步骤，如培养基灭菌、花蕾消毒或接种等有问题。或接种等有问题。接种是否成功接种是否成功 如果接种的花药长出愈伤组织如果接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体，花药培养的第一或释放出胚状体，花药培养的第一步就成功了。要适时转换培养基，步就成功了。要适时转换培养基，以便愈伤组织或胚状体进一步
9、分化以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株。成再生植株。植物组织培养技术与花药培养技术的异同点：植物组织培养技术与花药培养技术的异同点：项目项目项目项目相同点相同点相同点相同点不同点不同点不同点不同点植物组织植物组织植物组织植物组织培养技术培养技术培养技术培养技术离体的植物组织离体的植物组织离体的植物组织离体的植物组织经脱分化形成愈经脱分化形成愈经脱分化形成愈经脱分化形成愈伤组织，再分化伤组织，再分化伤组织，再分化伤组织，再分化成丛芽，诱导出成丛芽，诱导出成丛芽，诱导出成丛芽，诱导出根，然后进行移根，然后进行移根，然后进行移根，然后进行移栽。栽。栽。栽。外植体为体细胞，染色体数外植体为体细胞
10、，染色体数外植体为体细胞，染色体数外植体为体细胞，染色体数无需加倍。无需加倍。无需加倍。无需加倍。花药培养花药培养花药培养花药培养技术技术技术技术取材为花药，培养的为单倍取材为花药，培养的为单倍取材为花药，培养的为单倍取材为花药，培养的为单倍体幼苗，植株弱小，高度不体幼苗，植株弱小，高度不体幼苗，植株弱小，高度不体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，育，必须用秋水仙素处理，育，必须用秋水仙素处理，育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植使染色体加倍，恢复正常植使染色体加倍，恢复正常植使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种。株的染色体数，而且为纯种。株的染色体数，而且为纯种。株的染色体数，而且为纯种。