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1、第三节第三节 植物离体培养体系的建立植物离体培养体系的建立一、植物组织培养的阶段划分：一、植物组织培养的阶段划分：通常将组织培养过程划分为四个阶段通常将组织培养过程划分为四个阶段1、起始培养阶段（诱导阶段）、起始培养阶段（诱导阶段）2、增殖培养阶段、增殖培养阶段3、生根培养阶段、生根培养阶段4、驯化移栽、驯化移栽 Stage0Selection&preparationofthemotherplantsterilizationoftheplanttissuetakesplaceStageI-InitiationofcultureexplantplacedintogrowthmediaStageI
2、I-Multiplicationexplanttransferredtoshootmedia;shootscanbeconstantlydividedStageIII-RootingexplanttransferredtorootmediaStageIV-Transfertosoilexplantreturnedtosoil;hardenedoff Steps of Micropropagation二、外植体起始培养（无菌体系建立）二、外植体起始培养（无菌体系建立）起始培养阶段是指无菌体系的诱导和起始培养阶段是指无菌体系的诱导和建立过程。主要受外植体、培养基、环建立过程。主要受外植体、培养基、
3、环境条件等因素的影响。境条件等因素的影响。（一）外植体的起始培养过程（一）外植体的起始培养过程1、起始培养的一般过程：起始培养的一般过程：A、选取适宜的基因型（品种）；选取适宜的基因型（品种）；B、选取适宜的外植体；常用外植体有选取适宜的外植体；常用外植体有茎尖、茎尖、茎段、节间、叶片、叶柄等。茎段、节间、叶片、叶柄等。C、流水冲洗外植体；流水冲洗外植体；D、外植体切割、分离及灭菌处理；外植体切割、分离及灭菌处理；E、外植体接种于诱导培养基。外植体接种于诱导培养基。F、环境条件控制促进外植体的生长。环境条件控制促进外植体的生长。2、接种外植体的生长过程：、接种外植体的生长过程：A细胞分裂的启动
4、；细胞分裂的启动；B细胞增殖；细胞增殖；C组织和器官的形成。组织和器官的形成。（二）影响外植体起始培养的因素：（二）影响外植体起始培养的因素：1、影响外植体起始的因素、影响外植体起始的因素A A 外植体的遗传基础及生理影响外植体的遗传基础及生理影响B B 培养基组成成分：矿物盐类、微量有机成分、生培养基组成成分：矿物盐类、微量有机成分、生长调节物质、碳源、琼脂、活性炭、酚类化合物、多长调节物质、碳源、琼脂、活性炭、酚类化合物、多胺等。胺等。C C 培养条件：光照、温度、湿度培养条件：光照、温度、湿度 A外植体外植体(1)外植体种类及基因型外植体种类及基因型(2)外植体供体植株和外植体的来源与生
5、理状态外植体供体植株和外植体的来源与生理状态(3)外植体大小外植体大小(4)外植体的极性外植体的极性外植体种类及基因型外植体种类及基因型a.单子叶植物不易诱导器官发生。单子叶植物不易诱导器官发生。b.b.木本植物较难诱导。木本植物较难诱导。c.c.存在基因型差异（如番茄存在基因型差异（如番茄29%63%）d.d.开始生长季节取材容易诱导。开始生长季节取材容易诱导。外植体状态：外植体状态：外植体大小：外植体大小：外植体越小成苗能力越弱，较大的外植体外植体越小成苗能力越弱，较大的外植体增殖较快。增殖较快。外植体极性：外植体极性：当外植体以形态学的基部接种于培养基上当外植体以形态学的基部接种于培养基
6、上时，从远离基部的表面诱导出芽、苗数目较时，从远离基部的表面诱导出芽、苗数目较多。多。B、培养基培养基a培养基类型培养基类型:b碳碳源的影响源的影响:C、植物生长调节物质植物生长调节物质a细胞分裂素和生长素类细胞分裂素和生长素类b赤霉素类赤霉素类c乙烯及其生物合成抑制剂乙烯及其生物合成抑制剂d其他有机化合物其他有机化合物细胞分裂素和生长素：细胞分裂素和生长素：a.部分植物单独使用细胞分裂素（部分植物单独使用细胞分裂素（CTK）可以形成可以形成无根无根苗苗b.部分植物无根苗的形成需要细胞分裂素和生长素配部分植物无根苗的形成需要细胞分裂素和生长素配合使用。合使用。c.外源外源CTK与生长素必须维持
7、适当比例以改变内源激与生长素必须维持适当比例以改变内源激素平衡，促进器官发生。素平衡，促进器官发生。d.不同细胞分裂素对分化的作用效果不同不同细胞分裂素对分化的作用效果不同e.苯基脲衍生物具有较高的细胞分裂素活性苯基脲衍生物具有较高的细胞分裂素活性（4PU、CPPU、TDZ）赤霉素类：赤霉素类：赤霉素与促进细胞伸长和开花反应，组织培赤霉素与促进细胞伸长和开花反应，组织培养条件下只在少数植物上对芽的诱导有促进作养条件下只在少数植物上对芽的诱导有促进作用。用。如马铃薯、甜菜、樱桃等。如马铃薯、甜菜、樱桃等。乙烯及其生物合成抑制剂：乙烯及其生物合成抑制剂：具有促进和抑制两方面的影响，但抑制作用具有促
8、进和抑制两方面的影响，但抑制作用多于促进作用。因此在某些植物种类，乙烯抑多于促进作用。因此在某些植物种类，乙烯抑制剂可以促进芽的形成。制剂可以促进芽的形成。AgNO3、CoCl、AVG其他有机化合物：其他有机化合物：腺嘌呤衍生物具有促进器官分化作用。腺嘌呤衍生物具有促进器官分化作用。椰子汁等物质也具有促进分化的功能。椰子汁等物质也具有促进分化的功能。3.培养条件及其他因素培养条件及其他因素（1）光照）光照通常通常10005000Lx16小时光照。小时光照。非洲菊非洲菊1000lx，洋葱洋葱16小时，马铃薯连续小时，马铃薯连续光照，葡萄要求短日照。光照，葡萄要求短日照。光质也影响芽的再生，蓝光有
9、利于器官发光质也影响芽的再生，蓝光有利于器官发生，烟草实验，而红光有利于根的发生。生，烟草实验，而红光有利于根的发生。（2）温度）温度大部分植物要求大部分植物要求25oC，少数要求较低少数要求较低温度（温度（1520oC）或较高的温度（或较高的温度（30oC）如菖蒲、水仙、洋葱、龟背竹等。如菖蒲、水仙、洋葱、龟背竹等。变温处理对有些植物器官发生有促进作变温处理对有些植物器官发生有促进作用，如豌豆。用，如豌豆。（3）湿度：）湿度：培养室相对湿度以培养室相对湿度以7080为适宜，培为适宜，培养容器内要保持适宜湿度，防止过于干燥或湿养容器内要保持适宜湿度，防止过于干燥或湿度过大。度过大。（4）气体：）气体：要注意保持培养容器内良好的通气性。维要注意保持培养容器内良好的通气性。维持适宜的氧气和二氧化碳浓度，防止有害气体持适宜的氧气和二氧化碳浓度，防止有害气体的积累。的积累。如何进行外植体的起始培养（无菌体系的建立）？如何进行外植体的起始培养（无菌体系的建立）？1、选择适宜的外植体；、选择适宜的外植体；2、选择适宜的培养基；、选择适宜的培养基；3、创造适宜的环境条件、创造适宜的环境条件20050926