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1、第二章第二章 植物组织培养的基本技术植物组织培养的基本技术一、植物组织培养实验室的结构及设计要求一、植物组织培养实验室的结构及设计要求：完整的植物组织培养室通常包括完整的植物组织培养室通常包括洗涤室、化学实验室、洗涤室、化学实验室、接种室、培养室、细胞学实验室接种室、培养室、细胞学实验室等部分。可以根据实际需等部分。可以根据实际需要和条件进行设计。要和条件进行设计。但从功能上至少包括化学实验室或准备室、接种室以及但从功能上至少包括化学实验室或准备室、接种室以及培养室三部分，并且按顺序排列。培养室三部分，并且按顺序排列。在化学实验室与接种室在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间。之间应留有缓冲空
2、间。第一节第一节 实验室结构、仪器设备及操作技术实验室结构、仪器设备及操作技术（一）化学实验室（准备室）：（一）化学实验室（准备室）：1.主要功能：主要功能：用于培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和灭用于培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等工作。菌、试管苗的出瓶及整理等工作。2.主要仪器设备及用品：主要仪器设备及用品：冰箱、天平、高压灭菌锅、冰箱、天平、高压灭菌锅、pH计、干燥箱、实验计、干燥箱、实验台、水槽、凉干架、药品柜、离心机、水浴锅、微波台、水槽、凉干架、药品柜、离心机、水浴锅、微波炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、移液器、各种玻璃炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、移
3、液器、各种玻璃器皿（烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）及器皿（烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）及培养基分装用品等。培养基分装用品等。百分之一天平百分之一天平千分之一天平千分之一天平万分之一天平万分之一天平各种型号的高压灭菌锅各种型号的高压灭菌锅 移液器移液器（二）接种室（无菌操作室）：（二）接种室（无菌操作室）：1、功能：、功能：植物材料的灭菌、接种以及培养物植物材料的灭菌、接种以及培养物的继代转接等。的继代转接等。接种室要求保持洁净，与化学实验室之间应接种室要求保持洁净，与化学实验室之间应设置缓冲室。设置缓冲室。2、仪器设备及用品：、仪器设备及用品：超净工作台、紫外灯、小推车、搁架
4、、磁盘、超净工作台、紫外灯、小推车、搁架、磁盘、接种工具（各种镊子、解剖刀、手术剪、普通剪接种工具（各种镊子、解剖刀、手术剪、普通剪刀接种针、酒精灯、手持喷雾器、细菌过滤器等）刀接种针、酒精灯、手持喷雾器、细菌过滤器等）等。等。超净工作台超净工作台（三）培养室：（三）培养室：1、功能：主要用于植物材料的培养。、功能：主要用于植物材料的培养。要求室内洁净并能保持一定的温度、光要求室内洁净并能保持一定的温度、光照以及湿度以适合植物材料的生长和分化。照以及湿度以适合植物材料的生长和分化。2、仪器设备及用品：、仪器设备及用品：培养架及灯管、摇床（振荡器）、空调、培养架及灯管、摇床（振荡器）、空调、自动
5、定时器、加湿及除湿器、光照培养箱、自动定时器、加湿及除湿器、光照培养箱、温湿度计灯等。温湿度计灯等。培养架培养架光照培养箱光照培养箱恒温振荡器恒温振荡器 多用振荡器多用振荡器（四）细胞学实验室：（四）细胞学实验室：1、功能：主要用于培养材料的显微观、功能：主要用于培养材料的显微观察及照相等。察及照相等。2、仪式设备及用品：、仪式设备及用品：体视显微镜、普通显微镜、倒置显微镜、荧光体视显微镜、普通显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜、配套显微照相装置、普通相机或数码相机、显微镜、配套显微照相装置、普通相机或数码相机、切片机及配套制片及染色用品等切片机及配套制片及染色用品等。体视显微镜体视显微镜普通光学
6、显微镜普通光学显微镜倒置显微镜倒置显微镜倒置荧光显微镜倒置荧光显微镜二、实验室基本操作：二、实验室基本操作：（一）洗涤：（一）洗涤：1.普通器皿：采用洗衣粉、洗洁精等中性洗普通器皿：采用洗衣粉、洗洁精等中性洗涤剂洗涤。涤剂洗涤。2.难清洗器皿及移液管等：用水清洗后再用难清洗器皿及移液管等：用水清洗后再用重铬酸钾洗液浸泡，最后清水冲洗，或用超声重铬酸钾洗液浸泡，最后清水冲洗，或用超声波仪清洗。波仪清洗。（二）灭菌：（二）灭菌：1、器具灭菌：培养皿、解剖刀、镊子等、器具灭菌：培养皿、解剖刀、镊子等用品。用品。（1）干热灭菌：铝箔包好后，放于恒温干燥箱内，）干热灭菌：铝箔包好后，放于恒温干燥箱内，1
7、50 保温保温2小时，成本较高。小时，成本较高。（2）高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌锅内）高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌锅内120 15152020分钟分钟。（3）灼烧灭菌：接种时，解剖刀及镊子等浸入）灼烧灭菌：接种时，解剖刀及镊子等浸入95乙醇，然后取出在酒精灯火焰上灼烧杀菌。乙醇，然后取出在酒精灯火焰上灼烧杀菌。2、培养基灭菌：、培养基灭菌：采用高压蒸汽灭菌。采用高压蒸汽灭菌。120 1520分钟。分钟。培养基体积越大，灭菌时间越长。培养基体积越大，灭菌时间越长。3、不耐高温化合物：、不耐高温化合物：采用过滤灭菌，如采用过滤灭菌，如IAA等。等。4、外植体的表面灭菌：、外植体的表面灭菌：采用采用7
8、075乙醇（乙醇（10-30秒）、有效氯秒）、有效氯1的次氯酸的次氯酸钠（钠（5-30分钟）、分钟）、0.10.2%的氯化汞（的氯化汞（2-15分钟）等。分钟）等。杀菌剂中加入几滴吐温杀菌剂中加入几滴吐温20或或80（Tween20或或80）效）效果较好。果较好。（三）无菌操作：（三）无菌操作：1、保持接种室的无污染环境，保持接种室的无污染环境，定期熏蒸或喷雾处理，定期熏蒸或喷雾处理，进行消毒。接种前打开超净工作台及紫外灯照射进行消毒。接种前打开超净工作台及紫外灯照射20-30分分钟，关闭紫外等灯后使气体散出后开始操作。钟，关闭紫外等灯后使气体散出后开始操作。2、保持超净工作台的洁净保持超净工
9、作台的洁净：接种前用：接种前用70乙醇擦拭台乙醇擦拭台面或用喷壶喷雾，操作前，将手和手臂用面或用喷壶喷雾，操作前，将手和手臂用70乙醇消毒，乙醇消毒，所需试验用品用乙醇擦拭后放入超净工作台。所需试验用品用乙醇擦拭后放入超净工作台。3、点燃酒精灯，进行操作，、点燃酒精灯，进行操作，接种材料前后，灼烧瓶口，接种材料前后，灼烧瓶口，工具要灼烧彻底，防止交叉污染。工具要灼烧彻底，防止交叉污染。4、保持培养室的洁净，发现污染及时挑出保持培养室的洁净，发现污染及时挑出，并在灭菌后，并在灭菌后清洗，以减少污染源。清洗，以减少污染源。5、操作中穿工作服、戴口罩、工作帽，操作中穿工作服、戴口罩、工作帽，出入接种室换拖出入接种室换拖鞋以保持接种室的洁净。鞋以保持接种室的洁净。20050912