《生工测序部--峰图案例分析 2013-12-01.xls》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生工测序部--峰图案例分析 2013-12-01.xls（6页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、样品类型状态示例峰图菌样、质粒测序成功（收费）测序失败（不收费）非单克隆（收费）特殊结构（收费）PCR已未纯化测序成功（收费）测序失败（不收费）特殊结构（收费）测序双峰（收费）PCR已未纯化 测序失败（不收费）原因分析 测序成功峰图如图所示。1、质粒本身或提取的质粒浓度较低，无法达到测序要求；2、自带测序引物质量较差，测序反应结束之后没有产生足够的模板量，导致测序信号较弱；3、质粒模板与使用的测序引物存在多个结合位点，导致测序过程中扩增出多套模板，出现重叠现象；4、载体信息提供错误或是设计引物存在问题，选用的测序引物与质粒没有结合位点。测序结果在载体序列之后出现重叠的杂峰,这种情况是由于实验过
2、程中存在污染,提供的测序样品并非单克隆导致。建议：重新挑取单克隆样品提供给我们进行测序。测序样品序列中含有特殊结构区域（Poly A/T/C/G），会影响测序仪器对序列的读取，结构后峰形重叠。建议：从另外一个测序方向进行尝试。测序样品序列中含有特殊结构区域（微卫星），会影响测序仪器对序列的读取，结构后峰形重叠。建议：从另外一个测序方向进行尝试。测序样品序列中含有特殊结构区域（回文结构），会影响测序仪器对序列的读取，结构后峰形重叠。建议：从另外一个测序方向进行尝试。测序成功峰图如图所示。PCR样品测序结果基本以“A”结尾（如图260bp短片段，末尾会显示“A”）。1、测序模板浓度较低，无法达到测
3、序要求；2、模板或引物已经降解；3、引物Tm值太低不适合于测序(测序反应的退火温度为52,延伸温度60)；4、测序引物不是PCR产物的扩增引物，引物和模板本身没有结合位点。测序样品序列中含有特殊结构区域（Poly A/T/C/G），会影响测序仪器对序列的读取，结构后峰形重叠。建议：从另外一个测序方向进行尝试。1、已纯化PCR产物：客户回收过程中未有效去除非特异性条带；2、未纯化PCR产物：目的片段附近含有大小相近的非特异性条带，我们通过琼脂糖凝胶回收无法有效去除这种非特异性条带；3、引物与模板存在多个结合位点；建议：进行克隆测序或是重新提供模板引物进行尝试。1、测序模板浓度较低，无法达到测序要求；2、模板或引物已经降解；3、引物Tm值太低不适合于测序(测序反应的退火温度为52,延伸温度60)；4、测序引物不是PCR产物的扩增引物，引物和模板本身没有结合位点。