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1、丁ICS 67.050 B23 电DB64月1718-2020(a 有戚JHHHJ 踊酣hn品咱也vsd也咱也飞24Determination of Solanine(Q田Solanineand-Chaconine)in potato High performance liquid chromatography 2020一05-18发布2020一08-18实施宁夏回族自治区市场监督管理厅发布目IJ吕本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由宁夏农林科学院提出。本标准由宁夏回族自治区农业农村厅归口并实施。本标准起草单位:宁夏农产品质量标准与检测技术研究所。D864/T 1718一
2、-2020本标准主要起草人:赵丹青、张锋锋、王晓菁、姜瑞、牛艳、路洁、石欣、开建荣、夏文莉、吴燕、陈翔、杨静、张艳、苟春林。I D864/T 1718一-2020马铃薯中龙葵素(Q一茄碱及q一卡茄碱的测定高效;夜相色谱法1 范围本标准规定了高效液相色谱法测定鲜食马铃薯样品中龙葵素(一茄碱及一卡茄碱)的测定方法，其中包括原理、试剂和材料、仪器与设备、分析步骤、结果计算及精密度。本标准适用于马铃薯中龙葵素(一茄碱及一卡茄碱的测定。本标准的方法检出限为2.0rng/100go 2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的时用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注目期的引用
3、文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 5009.3-2016食品中水分的测定GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3 原理马铃薯样品中的龙葵素(-茄碱及任卡茄碱)用亚硫酸氢锅、乙酸的混合水溶液提取，经C18固相萃取柱净化，用高效液相色谱紫外检测器测定，外标法定量。4 试剂和材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的一级水04.1 试剂4.1.1 乙腊(C3N)色谱纯04.1.2 乙酸(C40)。4.1.3 亚硫酸氢铀(NaHS03)0 4.1.4 磷酸氢二饵(KP04)。4.1.5 磷酸二氢饵(KH2P04)0 4.2 试剂自己制4.2.1 提取液
4、:称取0.5g(精确至0.01g)亚硫酸氢纳，加入到100rnL水中完全溶解后，再加入5.00rnL乙酸，混匀。4.2.2 磷酸氢二饵溶液(0.1rnol/L)准确称取磷酸氢二饵8.7 g(精确至0.01g)，用水溶解，移入500rnL容量瓶中，加水定容，混匀。4.2.3 磷酸二氢锦溶液(0.1rnol/L):准确称取磷酸二氢饵6.8g,(精确至0.01g)，用水溶解，移入500rnL容量瓶中，加水定容，混匀。1 D864/T 1718一-20204.2.4 磷酸缓冲液:取100mL磷酸氢二饵溶液(0.1mol/L)至烧杯中，用磷酸二氢饵溶液(0.1mol/L),调节溶液pH值为7.6，将溶液
5、过0.45阳水相滤膜。4.2.5 液相色谱流动相:取600mL乙脂，向其中加入100mL磷酸缓冲液及300mL水，混匀，将溶液过0.45阳有机相滤膜。4.2.6 15%乙腊(15+屿，V/V)量取15mL乙腊，与85mL水混合均匀o4.3标准品4.3.1 一茄碱(-Solanin)分子式C4sH73NO山纯度二三98%。4.3.2 一卡茄碱(-Chaconin分子式C45H73N014纯度二三98%。4.4标准溶液配制4.4.1 一茄碱、一卡茄碱标准储备液分别准确称取一茄碱、一卡茄碱标准品5mg(精确至0.00019)，磷酸二氢饵溶液(0.1mol/L)溶解并分别定容至5mL容量瓶中，即为10
6、00mg/L的标准储备液，于-180C下，贮存于密闭的棕色玻璃瓶中，保存有效期为6个月。4.4.2 一茄碱、一卡茄碱标准工作液在使用中将单一标准储备液进行混合，用磷酸二氢饵溶液(0.1mol/L)作为溶剂，逐级稀释成5.0mg/L、10.0mg/L、15.0mg/L、20.0 mg/L、25.0mg/L、30.0mg/L、40.0mg/L的龙葵素标准系列液。在40C条件下保存，有效期为1个月。5 仪器与设备5.1 高效;夜相色谱仪:配紫外检测器。5.2 食物料理机。5.3 超纯水机。5.4 离心机。5.5 分析天平，感量0.01g和O.1 mg。5.6超声波清洗机50kHz、120W。5.7
7、pH 十。5.8 C18固相萃取柱500mg,6 mL(使用前用5mL乙腊、5mL提取试剂进行活化，使柱子保持湿润状态)。6 分析步骤6.1 试样的制备将马铃薯样品切碎，充分混匀，用食物料理机粉碎至匀浆。6.2 试样的提取与净化2 0864/T 1718一-2020准确称取5g-10 g均匀试样，精确至0.01g，置于50mL离心管中，加入20mL提取试剂。置于超声波清洗机中，超声30min，每5min充分振摇一次。将离心管放置于离心机中，4000 r/min离心3min,取上层清液5.00此，加入活化后的C18固相萃取柱中，用5mL 15%的乙脂淋洗，弃去淋洗液:最后用5mL 流动相进行洗脱
8、，收集洗脱液，定容5mL，过0.45有机相滤膜，待上机。6.3 测定6.3.1 色谱参考条件:a)色谱柱C18色谱柱(4.6mmX250 mm,5m)b)流动相:见4.2.5;c)柱温400C;d)检测波长202nm;e)流速1.2mL/min;f)进样体积10L。6.3.2 标准曲线将一茄碱、一卡茄碱混合标准工作液依次由低浓度到高浓度进行检测，分别以质量浓度X(mg/L)为横坐标，响应值y(峰面积)为纵坐标，进行线性回归，得到一茄碱及一卡茄碱标准曲线回归方程。用标准工作曲线对试样进行定量。6.3.3 色谱测定将标准工作液和待测溶液分别注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，龙葵素(一茄碱及一卡
9、茄碱)的色谱峰参见附录A。待测液峰面积代入标准曲线中定量，样品中龙葵素(一茄碱及一卡茄碱)质量浓度应在标准工作曲线质量浓度范围内。6.3.4 水份的测定马铃薯水份的测定按照GB5009.3-2016食品中水分的测定方法。7 结果计算马铃薯样品中龙葵素含量为一茄碱和一卡茄碱含量之和，以马铃薯干物质质量分数w计，按式。)计算;一茄碱含量Wl按式。)计算:一卡茄碱含量W2按式(3)计算:具体公式如下:W=W1十W2(1)式中:W1工W,.,2 lXV1XV2 m X(1-C w)X V 3 X 10 2XVIXV2 m X(1-C w)X V 3 X 10 W一样品中龙葵素含量，单位为毫克每100g
10、马铃薯干物质(mg/100g);用一样品中一茄碱含量，单位为毫克每100g马铃薯干物质(mg/100g);的一样品中一卡茄碱含量，单位为毫克每100g马铃薯物质(mg/100g);.(2).(3)3 DB64/T 1718一-2020G一样品含水率，以百分率表示;1一样品中一茄碱的质量浓度，单位为毫克每千克(mg/L)2一样品中一卡茄碱的质量浓度，单位为毫克每千克(mg/L)只一提取液体积，单位为毫升(mL);民一定容体积，单位为毫升(mL);民一分取液体积，单位为毫升(mL);m一称取样品质量，单位为克(g)10 一每Kg换算为每100g所产生的换算系数。8 精密度在重复条件下获得的2次独立
11、测试结果的绝对差值不得超过算数平均值的10%。4 0864/丁1718一-2020附录A(资料性附录q一茄碱和-卡茄碱混合标准溶液色谱图一茄碱和一卡茄碱混合标准溶液色谱图Cl0.0mg/l00g)见图A.1。.1 c:tO。而hoF飞时海运半ep呻哈哈?翠远6主岱岱40M1&.00 16.00 14.00 12.10.四毡，由.1tt斗一茄碱和一卡茄碱混合标准溶液色谱图(10.0mg/100g)图.1。.105 拍叩槐U、咐w俨俨旷耐吁俨俨呐啪、叫叩咐叮丁呱也、山w.叫d叫叮品吁two晶拙叩叫w叮守帕叫呐啄帕俨圳叮飞川时!W咕鸭叫wTm由叮r俨叩?确叩叫阳恻咛丁丁叫唰T0.00 之4.8毡.0o8.1怆O仇.00O坦f悦生1始6.皿1旭8古董4i马铃薯空白样品液相色谱图图.2D864/T 1718一一2020 1￥丁丁切由了-，.1 飞一丁量t l-Tr-j 0.00立46.00 8.00 10.00 12:性1(t18怠。分统:图A.3 添加量为1mg/100g龙葵素液相色谱图6