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1、第十八章遗传病的诊断遗传病诊断断是一项复复杂的工作作，需要多多学科的密密切配合。遗传病的诊断包括常规诊断和特殊诊断。常规诊断指与一般疾病相同的诊断方法，特殊诊断是指采用遗传学方法，包括染色体检查，家系分析等，是遗传病确诊的关键。目前，临床上遗传病诊断包括：临症诊断、症状前诊断（presymptomatic diagnosis）、出生前诊断和植入前诊断。第一节 临临症诊断临症诊断（ssympttomattic ddiagnnosiss）是根据据患者的各各种临床表表现进行分分析，确诊诊并判断遗遗传方式，是是遗传病诊诊断的主要要内容。一、病史、症症状和体征征（一）病史史遗传病大多多有家族聚聚集倾向，
2、因因此病史的的采集非常常重要。在在采集病史史时要准确确、详尽。另另外还要收收集病人的的家族史、婚婚姻史和生生育史等相相关信息。遗传病史的采集比其他疾病更重要，因为遗传病的家族聚集性和其传递的规律性决定了病史采集可能会获得更有用的信息，对后续的分析工作可能会有很大的帮助。病史采集的关键是材料的真实性和完整性。病史采集，主要是通过采集对象的描述和有关个体的病案查询工作来完成。实践中还应注意不同个体描述是否可以相互印证，以确定资料的可信度。对于发病原因、过程、时间、地点、治疗情况等也应详细记录。（二）症状状与体症遗传病除了了具有其他他疾病相同同的体征外外，还有特特异性征候群，这些些都为初步步诊断提供
3、供线索。大大多遗传病病在婴儿和和儿童期有有相应的体体征和症状状，如Doown综合合征患儿的的特殊面容容和智力低低下等，当然还需需要通过染染色体检查查进一步确确诊。二、家系分分析根据对患者者及家族成成员发病情情况的调查查结果绘制制系谱，确确定单基因因病或多基基因病，遗遗传方式等等。系谱分分析时应注意：系谱谱的完整性性和准确性性；单基因因遗传病的的分析非常常有用，常常染色体显显性遗传病病、常染色色体隐性遗遗传病，XX连锁显性性遗传病，XX连锁隐性性遗传病，YY连锁遗传传病。单基基因遗传分分析中要注注意外显不不全，延迟迟显性，显显、隐性的相对对性，新的的突变产生生，遗传印印记，动态态突变，以以及遗传
4、异异质性等问问题，避免免判断上的的错误和发发病风险的的错误估计计。线粒体遗传传病通过母母系遗传，主主要特点是是晚发，进进行性。多多基因病是是一大类常常见的疾病病，有家族族聚集倾向向，但不遵遵循孟德尔尔分离规律律。以往被认为为是多基因因病的一些些疾病，一一部分被证证明是遗传传异质性所所致，即受受单个主基基因决定，如如癫痫，先先天性心脏脏病和先天天性巨结肠肠等。三、细胞遗遗传学检查查细胞遗传学学检查染色色体检查或或核型分析析，是辅助助诊断和对对染色体病病确诊的主主要方法。随随着显带技技术的应用用，特别是是高分辨染染色体显带带技术的发发展，能够够更准确地地发现和确确定更多的的染色体数数目和结构构异常
5、，并并发现新的的微小畸变变综合征。利用染色体显带技术，可以对许多疾病在染色体水平找到原发性改变，如肿瘤，发育缺陷、心血管疾病等，把疾病相关基因确定在一个较小的范围内。染色体原位位杂交是应应用标记的的DNA片片段（探针针）与玻片片标本上的的细胞、染染色体，以以及间期的的DNA或或RNA杂杂交，研究究核酸片段段的位置、相相互关系的的技术。一一般用生物物素、地高高辛等标记记探针，原原位杂交后后，用荧光光染料标记记的生物素素亲和蛋白白、抗亲和和蛋白的抗抗体进行免免疫检测和和杂交信号号放大，使使探针杂交交的区域发发出荧光，这这种原位杂杂交称荧光光原位杂交交（FISSH），灵灵敏度高，特特异性强，可可以检
6、测染染色体微小小结构异常常，也可应应用在基因因定位和基基因制图等等领域。另另外还有双双色FISSH、多色色FISHH和染色体体涂染等方法，大大大提高了了染色体畸畸变的检出出率和准确确性。染色体检查查标本主要要有外周血血，羊水中中胎儿脱落落细胞和胎胎儿的脐带带血，病人人的骨髓、胸胸腹水、手手术切除的的病理组织织，培养细胞等等。染色体检查查适应症包括括：明显智智力发育不不全者；生长迟缓缓或伴有其他先先天畸形者者；夫妻之之一有染色色体异常，如如平衡异位位，嵌合体体等；家族族中已有染染色体异常常或先天畸畸形的个体体；多发性性流产妇女女及其丈夫夫；原发性闭闭经和女性性不育症；无精子症症和不育的的男性；两
7、两性畸形者者；疑为先先天愚型的的患儿及其其父母；原原因不明的的智力低下下并伴有大大耳、大睾睾丸和多动动症者；335岁以上上的高龄孕孕妇。四、生化检检查生化检查是是遗传病诊诊断的重要要辅助手段段，主要是是对由于基基因突变所所引起的酶酶和蛋白质质的定量和和定性分析析，对单基基因病和先先天性代谢谢病进行诊诊断，包括括一般的临临床生化检检验和针对对遗传病的的特异检查查。目前已知的的多种遗传传性代谢病病中，大多多数为酶缺缺陷。可由由于基因突突变、基因因缺失、基基因表达异异常或翻译译后加工修修饰缺陷所所致。目前前临床主要要对酶活性性和代谢产产物进行检检测，以血血液和尿液液为主要检检材，有的的可以制成成滤纸
8、片和和通过显色色反应进行行检测，随随着对遗传传病发病机机理认识的的深入和检检测方法的的改进，检检测将更加加简便、快快捷。第二节 出生前诊断断出生前诊断断或称产前诊断断（preenataal diiagnoosis）是采用羊膜穿刺术或绒毛取样等技术，对羊水、羊水细胞和绒毛进行遗传学检验，对胎儿的染色体、基因进行分析诊断，是预防遗传病患儿出生的有效手段，越来越广泛的被应用。一、出生前前诊断对象象根据遗传病病的危害程度和和发病率，可可将出生前前诊断的对对象排列如如下：夫妇之一一有染色体体畸变，特特别是平衡衡易位携带带者，或者者夫妇染色色体正常，但但生育过染色色体病患儿的孕妇妇；35岁以以上的孕妇妇；
9、夫妇之一一有开放性性神经管畸畸形，或生生育过这种种畸形患儿儿的孕妇；夫妇之一一有先天性性代谢缺陷陷，或生育育过这种患患儿的孕妇妇；X连锁遗遗传病致病病基因携带带者孕妇；有习惯性流流产史的孕妇；羊水过多多的孕妇；夫妇之一一有致畸因因素接触史史的孕妇；有遗传病病家族史，又又系近亲结结婚的孕妇妇。但应当当注意，已出现先兆兆流产、妊妊娠时间过过长、有出出血倾向者者的孕妇不宜宜做产前诊诊断。二、出生前前诊断的方方法（一）B超超 B超是一种种安全无创创的检测方方法，能够够详细检查查胎儿的外外部形态和和内部结构构，使许多多遗传性疾疾病得到早早期诊断。可可以诊断的的疾病有，神神经管缺陷陷、脑积水水、无脑畸畸形
10、；唇裂、腭腭裂，颈部部淋巴管肿肿瘤；先天天性心脏病病，支气管管、肺发育育异常、胸腔积液液；其他的的异常，如如先天性单单侧肾缺如如，先天性性幽门狭窄窄、先天性性巨结肠等等。（二）羊膜膜穿刺羊膜穿刺是是在B超的的监视下，用用消毒的注射射器抽取胎胎儿羊水（图18-1）。可以对抽取的羊水及其中的胎儿脱落细胞进行细胞培养，分析染色体，以及生化和基因的检测。如羊水中甲胎蛋白浓度过高时，提示胎儿可能有无脑、开放性脊柱裂、脊髓脊膜膨出和脑积水等异常。羊膜穿刺一般在妊娠1620周进行，流产的风险相对较小。图18-11 羊膜膜穿刺示意意图（三）绒毛毛取样法绒毛取样一一般在妊娠娠79周周进行，是是妊娠早期期诊断方法
11、法。也是在B超监监视下，用用特制的取取样器，从从阴道经宫颈进入入子宫，沿沿子宫壁到到达取样部部位，用内内管吸取绒绒毛（图18-2）。绒绒毛取样的的优点是检检查时间早早，需要作作出选择性性流产时，给给孕妇带来来的损伤和和痛苦较小小。缺点是是经子宫颈颈取样标本本容易被污污染，胎儿儿和母体感感染和操作作不便，引引起流产的的风险是羊羊膜穿刺的的两倍。羊膜穿刺法法和绒毛取取样可用来来诊断染色色体病，遗遗传代谢病病，胎儿性性别鉴定，所所有可用胚胚胎或胎儿儿DNA检检测的疾病病，另外，开开放性神经经管缺陷只只能采用羊羊膜穿刺术术诊断。图18-22 绒毛取取样法示意意图（四）脐带带穿刺术脐带穿刺术术是在B超超
12、的监视下下，用细针针经腹壁、子子宫进入胎胎儿脐带抽抽取胎儿血血液。本方方法取样最最好在妊娠娠18周，常用于因错过绒毛取样或羊膜穿刺最佳时机或羊水检查失败的补救措施，还可以检测胎儿的血液系统疾病，先天性免疫缺陷，某些单基因病。（五）胎儿儿镜检查又称羊膜腔腔镜或宫腔腔镜检查，它可在进入入羊膜腔后后，直接观观察胎儿的的外形、性别和发发育状况，是否有畸形，还可以同时抽取羊水或胎血进行检查，或进行宫内治疗。因此，理论上这是一种最理想的方法。但由于操作困难，容易引起多种并发症，目前还不能被广泛采用。胎儿镜检查的最佳时间是妊娠1820周，可以诊断大疱性表皮松懈症及某些皮肤病。（六）分离离孕妇外周周血中的胎胎
13、儿细胞目前用于出出生前诊断断材料的获获得对于胎胎儿和母体体都是创伤伤性的，存存在流产和和感染等风风险。从220世纪990年代末末，开始探探索一种无无创伤性的的出生前诊诊断方法。利利用妊娠期期少量胎儿儿细胞可以以通过胎盘盘进入母体体血液中，采采用流式细细胞仪分离离技术，磁磁激活细胞胞分选技术术，免疫磁磁珠法，显显微操作分分选法，分分离胎儿细细胞。用这这些方法富富集的胎儿儿细胞很少少，需要用用高灵敏的的技术方法法进行下一一步分析检检测，目前前常用的方方法是PCCR。（七）植入入前诊断随着人工受受精，试管管婴儿和胚胚胎移植技技术的开展展，以及单单个细胞基基因诊断技技术的应用用，目前正正探索在胚胚胎植
14、入前前诊断（pre-impllantaationn diaagnossisi）。在受精后后6天胚胎胎着床前，通过显微操作技术取出一个细胞，应用PCR，FISH等技术进行特定基因和染色体畸变的检测，将人类的遗传缺陷掌控在最早阶段，这是遗传病产前诊断的重大突破。Indiccatioons ffor PPrenaatal Diaggnosiis1.Advvanceed maaternnal age (oftten aat leeast 35 yyearss at the expeectedd datte off connfineementt): IIf thhere is nno prrevioou
15、s hhistoory oof a chroomosoome aabnorrmaliity, it iis onnly iin thhe addvancced mmaterrnal age rangge thhat tthe rrisk of aa chrromossomallly aabnorrmal fetuus exxceedds thhe riisk oof miiscarrriagge duue too thee prooceduure iitsellf. TThe aage ccutofff ussed vvariees soomewhhat aamongg difffereent
16、 pprenaatal geneeticss cennterss butt is usuaally at lleastt 31 to 332 yeears of aage.2.Preeviouus chhild withh a dde noovo cchrommosomme abbnormmalitty: IIf thhe paarentts off a cchildd witth a chroomosoome aabnorrmaliity hhave normmal cchrommosommes tthemsselvees, ttheree mayy nevverthhelesss bee
17、a rrisk of tthe ssame abnoormallity in aa subbsequuent chilld. FFor eexampple, if aa womman uunderr 30 yearrs off agee hass a cchildd witth Doown ssyndrrome, thee reccurreence riskk is abouut 1/100, in compparisson wwith a geeneraal poopulaationn rissk off aboout 11/8000. Prrenattal mmosaiicismm is
18、posssiblee expplanaationn of the incrreaseed riisk.3.Preesencce off strructuural chroomosoome aabnorrmaliity iin onne off thee parrentss: Heere tthe rrisk of aan abbnormmal cchildd is usuaally 20% or lless, butt it may be hhigheer. 4.Fammily histtory of ssome geneetic defeect tthat may be ddiagnnose
19、dd or ruleed ouut byy bioochemmicall or DNA anallysiss: Moost oof thhese disoorderrs arre caausedd by singgle-ggene defeects and havee rissks oof 255% orr 50% in sibss of affeectedd chiildreen. CCasess in whicch thhe paarentts haave bbeen diaggnoseed ass carrrierrs affter a poopulaationn scrreeniing
20、 ttest rather thann aftter tthe bbirthh of an aaffeccted chilld arre allso iin thhis ccateggory. Eveen beeforee DNAA anaalysis enteered the pictture, nummerouus biiocheemicaal diisordders coulld bee ideentiffied prennatallly, and DNA anallysiss hass greeatlyy inccreassed tthe nnumbeer.5.Fammily hist
21、tory of aan X-linkked ddisorrder for whicch thhere is nno sppeciffic pprenaatal diaggnosttic ttest: Wheen thhere is nno allternnativve meethodd, thhe paarentts maay usse feetal sex deteerminnatioon too hellp thhem ddecidde whhetheer too conntinuue orr terrminaate tthe ppregnnancyy. Wiith tthe ddevel
22、lopmeent oof DNNA annalyssis ffor pprenaatal diaggnosiis off X-llinkeed diisordders suchh as Duchhennee mussculaar dyystroophy and hemoophillia AA andd B, firsst thhe feetal sex is ddeterrmineed, aand tthen DNA anallysiss is perfformeed iff thee fettus iis maale.6.Rissk off a nneuraal tuube ddefecct
23、 (NNTD): Onlly fiirst-and secoond-ddegreee reelatiives of NNTD ppatieents are eliggiblee forr amnnioceentessis bbecauuse oof a signnificcantlly inncreaased riskk of haviing aa chiild wwith an NNTD, but manyy fettusess witth oppen NNTDs can now be ddeteccted by ootherr tessts.第三节 基基因诊断利用分子生生物学的技技术，检测
24、测体内DNNA或RNNA结构或或表达水平平变化，从从而对疾病病做出诊断的方法法，称为基因诊诊断（geene ddiagnnosiss），通常又称为为分子诊断断（mollecullar ddiagnnosiss）。基因诊断断始于19978年，应用限制性酶切长度多态性（RFLP）技术检测胎儿镰状细胞贫血症。 基因诊断技技术已逐步步从实验研研究进入临临床应用，不不仅适用于于遗传性疾疾病，而且且已扩展到到一些感染染性疾病、肿肿瘤的诊断断。基因诊断具具有如下特特点：以特特定基因为为目标，检检测基因的的变化，特特异性性强强；采用分分子杂交技技术和PCCR技术具具有信号放放大作用，用用微量样品品即可进行行诊
25、断，灵灵敏度高；在疾病尚尚无出现临临床表现前前，胎儿出生前前的产前诊诊断，以及及特定人群群的筛查等，应应用广泛；检测样品品获得便利利，不受个个体发育阶阶段性和基基因表达组组织特异性性的限制。 需要说明的的是，由于于基因突变变的类型多多种多样，除除了缺失、倒倒位、点突突变、动态态突变可以以进行基因因的检测外，大多数数基因突变变的分析复复杂而繁琐琐，有一定定的难度。一、基因诊诊断的主要要技术方法基因诊断主主要采用核核酸分子杂杂交、PCCR和DNA序列列测定等技技术。（一）核酸酸分子杂交交核酸杂交技技术是在基因诊诊断中，用用于检测样样品中是否否存在相应应的基因以以及相应基基因表达状状态等等。其其中S
26、ouutherrn印迹法主要要用于基因因组DNAA的分析，Nortthernn印迹法用用于检测样样品中RNNA的种类类和含量。1. 斑点点印迹杂交交 把把待检测的的核酸样品品点在NCC膜上，变变性后与标标记的探针针进行结合合反应，经过过显色和显显影后检测测杂交信号号的强度，与与对照样品品比较后确确定所测核核酸量的高高低。根据据NC膜上上所点核酸酸样品的种种类不同，分分为DNAA dott bloottinng和 RRNA ddot bblottting。点点样方式如如采用狭缝点点样器点样样，得到的的线状杂交交信号，称称狭线印迹迹法。2. 原位位杂交 把组织织或细胞样样品经过适适当处理，用用探针
27、与核核酸进行杂杂交。这种种方法不需需要提取核核酸，可以以确定被检检核酸在组组织或细胞胞，以及中中期染色体体中的定位位，具有重重要的生物物学和病理理学意义。3. PCCR-ASSO ASO为为等位基因因特异性寡寡核苷酸杂杂交法（allelle-sppeciffic ooligoonuclleotiide，AASO）的的简称，是基于核核酸杂交的的一种方法法。根据已已知基因突突变位点的的碱基序列列，设计和和制备与野野生型或突突变型基因因序列互补补的两种探探针，分别别与被检测测者样品中中的DNAA分子进行行杂交，根根据样品与与两种探针针杂交信号号的强弱，确确定是否存存在基因突突变，判断断被检者是是突变
28、基因因的纯合体体或杂合体体（图188-3）。图18-33ASOO探针杂交交原理示意意图4基因芯芯片技术基因芯片片技术是近近年来发展展十分迅速速的大规模模、高通量量分子检测测技术。基基本过程是是将许多特特定的寡核核苷酸片段段或基因片片段作为探探针，有规规律地排列列固定于支支持物上，如如玻片、硅硅片或尼龙龙膜等，形形成矩阵点点。现在的的技术可以以做到在11cm2上排列成成千上万个个“点”。样品DNNA/RNNA通过PCRR扩增、体体外转录等等技术掺入入荧光标记记分子，然然后与待测测样本进行行杂交反应应，再通过过激光共聚聚焦荧光显显微镜对芯芯片进行扫扫描，获取取信息，电电脑系统分分析处理所所得资料，
29、对上千种甚至更多基因的表达水平、突变和多态性进行快速、准确的检测。基因芯片可可以进行微微量化、大大规模、并并行化、高高度自动化化地处理有有价值的生生物样品，精精细地研究究各种状态态下分子结结构变异，了了解组织细细胞基因表表达情况。既可检测基因的多态性，又能检测基因突变，特别适用于多个基因、多个位点的同时检测。这一技术目前处于发展和优化阶段，已经有多种针对遗传性疾病、肿瘤检测的基因芯片用于临床诊断。（二）其它它常用的技技术1. PCCR-RFFLP 将聚合合酶链反应应（PCRR）与RFFLP方法法结合的一一种检测技技术。由于于DNA序序列的差异异，造成了了内切酶位位点的变化化，或是新新酶切位点点
30、的产生；或是原酶酶切位点的的消失等。通通过酶切后后电泳图谱谱的判断，确定检测结果。该方法包括PCR：利用一对或数对特异性引物，将目标DNA扩增；酶切：利用某些限制性内切酶消化PCR产物，如PCR产物中含有相应的酶切位点序列，DNA链则被切开；利用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶分离酶切后的PCR产物，根据电泳图谱判断结果。如果某DNNA序列已已经全部确确定，则可可以通过计计算机辅助助设计特异异性PCRR引物；扩扩增DNAA片段和进行行酶切位点点分析，该该方法简便便易行，精精确度也很很高。但是是该方法也也有一定的的局限性，如如果多态性性位点的DDNA序列列没有相应应的内切酶酶，则该方方法不适用用。2.
31、 PCCR-SSSCP 单链构象象多态性（singgle-sstrannd coonforrmatiion ppolymmorphhism，SSCP），是一种检测核酸序列中点突变的技术。当双链DNA变性为两条单链后，会在中性条件下形成各自特定的空间构象，因而在电泳时将在不同的位置上出现不同的电泳条带。如果DNA序列发生改变，甚至仅有一个碱基变化时，空间构象有可能发生改变，电泳时表现出不同的迁移率，被检DNA电泳条带与已知序列的对照DNA电泳条带不一致，出现新生条带时，表明有突变存在（图18-4）。该方法与PCR联合应用，因此称PCR-SSCP，主要用于突变分子的初步筛查。图18-44 SSSC
32、P原理理示意图 33. RTT-PCRR 逆转转录PCR以mRNNA为模板板合成cDDNA，再再进行PCCR，用于于基因表达达水平的检测测和分析。 44. Wessternn 印迹技技术 Westtern 印迹技术术是检测特特定蛋白质质的方法，可可用于某种种与遗传病病相关的蛋蛋白质定性性定量分析析。如假肥肥大型肌营营养不良（DDMD）患患者基因缺缺陷使肌细细胞的增强强蛋白（ddystrrophiin）合成成异常，采采用Wessternn 印迹法法检测患者者增强蛋白白，进行诊诊断。二、基因诊诊断技术的的应用（一）基因因诊断在遗遗传病中的的应用1镰状细细胞贫血的的基因诊断断镰状细细胞贫血症症的基因
33、突变变发生在b珠珠蛋白基因因内部，可以用限限制性内切切酶Mstt进行检测测。基于编码b珠蛋白白链的第6位位密码子由由GAG变为GTG，改变了了限制性内内切酶Msst的酶切位点。当酶切正常人人DNA和和患者DNNA后再用用标记的b珠珠蛋白基因因为探针作作Soutthernn杂交时，就就会出现不不同的DNNA条带。限限制性内切切酶Mstt切割的序序列是CCCTNAGGG（其中中N是任何何一种核苷苷酸），切切割正常DDNA产生生1.15kb DNA片片段；若切切割患者DDNA时，形形成1.335kb b珠蛋白的的DNA片片段，杂合合体则形成成1.155，1.335两个片片段（图111-7）。2血友病
34、病A的基因因诊断血血友病A是是X连锁隐隐性遗传病病，由于遗遗传性凝血血障碍所致致的出血性性疾病。该该病是凝血血因子（Facctor，F）基因的的缺陷，其其中大范围围的基因重重排（如缺缺失、插入入和重复）只只占5，主主要突变类类型为碱基基取代或少少数碱基的的缺失和插插入，这些些突变产物物可能是不不完整的、无无活性的或或不稳定的的因子肽链，导导致临床症症状轻重不不一。采用用基因诊断断方法可以以检出有部部分基因缺缺失的患者者和女性携携带者，可可进行产前前检查。对对该基因的的产前诊断断可以通过过RFLPP连锁分析析进行，在基因的内侧及旁旁侧有多组组RFLPP位点可供供基因诊断断。目前多多采用PCCR技
35、术与与RFLPP相结合的的方法，先先用PCRR技术将包包含突变DDNA的片片段扩增出出来，然后后用识别该该位点的限限制酶来酶酶切，电泳泳后直接检检测多态性性位点的状状态。3. a地地中海贫血血的基因诊诊断 aa地中海贫贫血是由于于a基因的缺缺失造成的的。a链是由两两对基因控控制的，如如果在一条条16号染染色体上的的2个a基因都缺缺失，称为为a0地贫；如如果一条116号染色色体上的22个基因缺缺失一个，称称为a+地贫，这两种a地贫基因因可以组合合引起不同同的综合征征。在基因的的两端设计计引物，扩扩增后的片片段电泳，可可以检测缺缺失突变，确确定被检测测者的基因因型，对可可疑的胎儿儿进行产前前诊断。
36、（二）基因因诊断在肿肿瘤中的应应用肿瘤发生和和发展是一一个多因素素、多步骤骤过程，涉涉及多个癌癌基因的结结构改变和和表达异常常，如抑癌基因的缺缺失和突变等。基因诊断断除了用于于肿瘤的早早期诊断外外，还可以以对肿瘤进进行肿瘤的的临床分类类、预后，对对肿瘤高危危人群的筛筛选，指导导个体化治治疗和预防防。1. 肺癌癌 近年来对肺肺癌的细胞遗传传学研究表表明，肺癌癌发生时常常涉及1，22，3，55，6，99，11，113，177号染色体体的缺失，易易位，raas 、myc、 erbb和 srcc癌基因的的扩增、突突变，以及及抑癌基因因Rb 、pp53的突突变或缺失失，应用PPCR-AASO，PPCR-
37、SSSCP，测测序，以及及FISHH，可以检检测其基因因突变或缺缺失。肺癌癌患者常存存在rass 、myc、 erbb和 srcc癌基因的的过表达，因因此可采用用Nortthernn印迹方法法进行RNNA检测与与分析，在在基因水平平诊断肺癌癌。2. 乳腺腺癌 乳腺癌癌是女性最最常见肿瘤瘤之一，癌癌基因nuue与乳腺腺癌的发生生和预后密密切相关，表表达产物为为表皮生长长因子（EEGF）样样受体，属属于受体型型酪氨酸蛋蛋白激酶（TTPK）家家族成员。有有Nue基因因扩增的患患者复发和和转移率高高，可作为为乳腺癌预预后的一项项重要指标标。采用Souutherrn印迹法法，可以检测测Nue基因因的拷贝
38、数数；Norrtherrn印迹方方法检测Nuee基因表达达水平，进进行定量分分析。 3. 大肠肠癌 在肠癌癌癌变的过过程中存在在抑癌基因FAAP（faamilyy adeenomaatouss pollyposiss）、DCCC、p53基因因的丢失，p53基因因的突变；癌基因K-ras的的点突变、C-myc的过量表达等现象。ras基因因突变的检检测可采用用PCR-ASO方方法进行，已知rass基因突变变的热点在在12、113及611密码子，可可人工合成成位于待测测点两侧的的引物，分分别扩增含含12、113及611位点的基基因片段，将将扩增产物物结合在NNC膜上分分别与相应应的碱基突突变特异性性寡核苷酸酸探针杂交交，检测突变变类型。还还可以采用用PCR-SSCPP方法，对对ras基因因突变进行行初筛，再再通过DNNA测序检检测点突变变，简便、准准确。p53基因因的缺失、突突变、失活活是许多肿肿瘤发生的的原因，这这些肿瘤包包括成骨肉肉瘤、肺癌癌、结（直直）肠癌、神神经纤维肉肉瘤。脑瘤瘤、乳腺癌癌等。该基基因的突变变可引起蛋蛋白质功能能的突变，导导致细胞转转化或癌变变。PCRR法进行检检测p533突变热点点外显子55-8，先先扩增外显子子5-8，再再进行突变变位点的详详尽分析，甚甚至测序；或采用PPCR-SSSCP方方法，然后后测序。检检测p533基因的突变。（邹向阳阳）16