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1、高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)【知识小结知识小结】1、HPLC：高效色谱柱、高压泵、高灵敏检测器：高效色谱柱、高压泵、高灵敏检测器2、现代高效液相色谱法的特点：、现代高效液相色谱法的特点：(1)高效；(2)高压；(3)高速；(4)高灵敏度3、色谱分离的实质：、色谱分离的实质：色谱分离的实质是样品样品分子（即溶质）与溶剂（即流动相流动相或洗脱液）以及固定相固定相分子间的作用，作用作用力的大小力的大小，决定色谱过程的保留行为。4、高效液相色谱仪结构：、高效液相色谱仪结构：输液系统进样系统分离系统检测系统5、高压输液泵、高压输液泵性能：足够的输出压力输出恒定的流量输出流动相的流量范围可调节
2、压力平稳,脉动小6、在线脱气装置、在线脱气装置在线脱气、超声脱气、真空脱气等作用：脱去流动相中的溶解气体脱去流动相中的溶解气体。流动相先经过脱气装置再输送到色谱柱。脱气不好时有气泡，导致流动相流速不稳定，造成基线飘移，噪音增加。7、梯度洗脱装置、梯度洗脱装置以一定速度改变多种溶剂的配比淋洗，目的是分离多组容量因子相差较大的组分。作用作用:缩短分析时间缩短分析时间,提高分离度提高分离度,改善峰形改善峰形,提高监测灵敏度提高监测灵敏度8、影响分离的因素、影响分离的因素影响分离的主要因素有流动相的流量、性质和极性流量、性质和极性。9、选择流动相时应注意的几个问题：、选择流动相时应注意的几个问题：（1
3、）尽量使用高纯度试剂作流动相。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度。（4）流动相同时还应满足检测器的要求。10、提高柱效的方法、提高柱效的方法(降低板高降低板高)：固定相填料要均一，颗粒细，装填均匀。流动相粘度低。低流速。适当升高柱温。11、固定相的选择：、固定相的选择：液相色谱的固定相可以是吸附剂吸附剂、化学键合固定相化学键合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分各组分在固定相固定相及流动相流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离差异进行分离。12、高效液相色谱法的分离机理及分类、高效液相色谱法的分离机理及分类类类型型主要分离机理主要分离机理吸附色谱吸附能，氢键分配色谱疏水分配作用尺寸排斥色谱溶质分子大小离子交换色谱库仑力13、反相色谱的优点、反相色谱的优点易调节 k 或 a易分离非离子化合物，离子化合物和可电离化合物流动相便宜可预言洗脱顺序适宜梯度洗脱14、小结、小结分配色谱是利用样品中的溶质溶质在固定相固定相和流动相流动相之间分配系数分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。