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1、设计性实验初步判断l1天前食用新鲜蚕豆 l据家长反映，患者的姐姐也曾发生过类似情况遗传性恶心、呕吐、排尿呈酱油样色，面色苍白脉搏150次/分，血压80/60mmHg，血压下降，呼吸40次/分，呼吸急促，神清，萎靡，面色苍白，皮肤及巩膜黄染，尿蛋白（+）。G6PD缺乏症临床表现正常正常.红细胞数红细胞数 4.0 4.05.55.510121012/L/L，血红蛋，血红蛋白白 120 120160g/L 160g/L 患者患者.红细胞红细胞 1.981.9810121012/L/L，血红蛋白，血红蛋白53g/L53g/L正常正常.血清总胆红素血清总胆红素1.7117.71.7117.7mol/L
2、mol/L 结合胆结合胆红素红素1.76.81.76.8mol/Lmol/L，未结合胆红素，未结合胆红素10.2610.266.846.84mol/Lmol/L患者患者.溶血清总胆红素溶血清总胆红素85.5mol/L 85.5mol/L 结合胆红结合胆红素素13.7mol/L13.7mol/L，未结合胆红素，未结合胆红素71.8mol/L71.8mol/L，皮皮肤及巩膜黄染肤及巩膜黄染(溶血性黄疸）溶血性黄疸）急性溶血的证据半个月内有食新鲜蚕豆史急性溶血的证据G6PD缺乏症临床表现遗传性：患者姐姐曾有此情况 诊断依据明确诊断.G6PD缺乏之检测实验.G6PD检测实验l实验方法:G6PD比值法l
3、主要试剂：抗凝全血、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGD）、终止液、试管、移液器l主要仪器：752分光光度计、水浴箱终止液：是一种阻止（生化试剂）化学反应继续进行的一种试剂，例如ELISA酶联免疫实验结果出来后由于显色剂和残留酶标液作用，反应还在继续进行中，会影响实验结果数值，就需要终止液的作用了。终止液一般用强酸或者强碱做主要配方，常用的终止液一般为2m HCl和2m H2SO4。.实验原理.人红细胞戊糖代谢的关健酶G6PD催化G6P转化成6PG时，伴有NADP转化成还原型辅酶II（NADPH）。因此测试NADPH的量反映了G6PD活性。但单测G6PD活性不能
4、排出其他原因引起的G6PD活性升高或降低（如红细胞增多症，标本吸量不准确，贫血，标本溶血，凝血，陈旧，污染等）。测试红细胞戊糖代谢的另一同功酶6PGD，有将NADP转化成NADPH的作用，通过两酶活性比值计算G6PD/6PGD，可判断G6PD是否缺乏。l实验操作流程1、取抗凝全血15l，加入双蒸水200l制成溶血液。分别取溶血液50l加入1,2号试管中2、取G6PD和6PGD反应试剂各50l，分别加入1,2号试管中，混匀，立即置37水浴箱准确保温20min3、取出试管，立即加入终止液2ml，以蒸馏水作为空白对照，于650nm波长读取1，2管的光密度值（S1和S2）4、比值计算：G6PD/6PG
5、D=S1/S25、正常参考值：1.02.3l注意事项：准确设置水浴箱温度，温度过高会破坏酶的活性，影响实验结果 取出试管后要立即加入终止液，否则反应继续会影响实验数据l结果分析：G6PD/6PGD=S1/S2，正常参考值：1.02.3，比值1.0判为G6PD缺乏。从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果：u蚕豆病患者在食用蚕豆后会出现中毒症状，出现恶心、呕吐 u由于红细胞破裂，运氧供养障碍，导致呼吸急促，脉搏微弱而快速；血压降低从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果：临床表现：面色苍白，血尿,恶心呕吐，排尿呈酱油样色，呼吸急促，神清，萎靡，皮肤及巩膜黄染 实验室检查：红细胞 1.98
6、1012/L，血红蛋白53g/L，血清总胆红素85.5mol/L，结合胆红素13.7mol/L，未结合胆红素71.8mol/L，尿蛋白（+），潜血(+)，尿胆红素()，尿胆素原(+)，尿液镜下未见红细胞。利用多聚酶链式反应方法(PCR)扩增人葡萄糖6磷酸脱氢酶突变热点基因片段，采用单链构象多态性(SSCP)技术对扩增片段进行分析，用PCR直接测序以确定突变的基因位点。u正常参值：红细胞数 4.05.5 1012/L，血红蛋白 110160g/L，而此时红细胞破裂产生全身溶血性反应，红细胞大量破裂释放出血红蛋白，因此患者红细胞 为1.981012/L，有明显下降；由于红细胞破裂，血浆游离血红蛋白
7、显著增高，超过结合珠蛋白的量和肾小管再吸收功能，出现酱油色的血红蛋白尿，而血红蛋白53g/L，降低 u红细胞大量破坏，在单核-吞噬细胞系统产生胆红素过多，超过了肝细胞摄取、转化和排泄胆红素的能力，造成血液中未结合胆红素浓度明显增高，发生溶血性黄疸,皮肤及巩膜黄染，尿胆红素()。肝对胆红素的摄取、转化、排泄增多，过多胆红素进入胆道系统，肠肝循环增多，使得尿中尿胆原和尿胆素含量增多，故尿胆素原(+)要想探讨该病发生的分子基础，可以用哪些技术检测什么目的基因？可以利用多聚酶链式反应方法(PCR)扩增人葡萄糖6磷酸脱氢酶突变热点基因片段，采用单链构象多态性(SSCP)技术对扩增片段进行分析，用PCR直接测序以确定突变的基因位点。由于G-6PD 基因位点缺乏的多态性,逐个基因位点测序,工作量大,有一定盲目性,选择疑有突变位点基因测序显得尤为重要,采用PCR-SSCP 技术筛选带有突变的基因位点测序为一较好的研究方法。通过基因测序了解G-6PD 缺乏症发生的分子基础,对于遗传性酶缺陷的基因研究及治疗提供理论依据具有重要意义。患者体型瘦小与该病症是否有关，为什么？蚕豆病患者体型瘦小与多种因素有关，如营养的摄取因素、遗传因素等，但考虑最重要的是红细胞载氧能力的下降导致机体细胞组织和器官等不能有效摄氧进行发育。但蚕豆病患者不一定都体型瘦小。