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1、关于血脂及血浆脂蛋白检验关于血脂及血浆脂蛋白检验1第一页，本课件共有80页2n血脂、血浆脂蛋白及载脂蛋白检验的重要性血脂、血浆脂蛋白及载脂蛋白检验的重要性 动脉粥样硬化动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)(atherosclerosis,AS)冠心病（冠心病（CHDCHD）等心、脑血管疾病）等心、脑血管疾病 血脂代谢异常血脂代谢异常 第二页，本课件共有80页3第三页，本课件共有80页4n临床常规血脂和脂蛋白测定项目临床常规血脂和脂蛋白测定项目:总胆固醇（总胆固醇（totalcholesteroltotalcholesterol，TCTC，包括，包括FCFC和和CECE）甘油三酯
2、甘油三酯(TG)(TG)高密度脂蛋白胆固醇高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)(HDL-C)低密度脂蛋白胆固醇低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(LDL-C)载脂蛋白等。载脂蛋白等。第四页，本课件共有80页5第一节第一节 概述概述第二节第二节 血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定n本章内容概要本章内容概要第五页，本课件共有80页6一、血脂及血浆脂蛋白一、血脂及血浆脂蛋白 血脂：是血浆中脂类（脂质）物质的总称。包括中血脂：是血浆中脂类（脂质）物质的总称。包括中性脂肪（甘油三酯性脂肪（甘油三酯TGTG）和类脂（胆固醇）和类脂（胆固醇ChCh、胆固醇酯、胆固醇酯CECE、磷脂、糖脂、游离脂
3、肪酸）。、磷脂、糖脂、游离脂肪酸）。n定义：定义：脂蛋白：脂类难溶于水，正常血浆脂类物质脂蛋白：脂类难溶于水，正常血浆脂类物质与蛋白质结合成脂蛋白的形式运输和代谢与蛋白质结合成脂蛋白的形式运输和代谢 。第一节第一节 概概 述述第六页，本课件共有80页7（一）血浆脂蛋白的分类（一）血浆脂蛋白的分类n 超速离心法：超速离心法：乳糜微粒乳糜微粒 CM极低密度脂蛋白极低密度脂蛋白 VLDL低密度脂蛋白低密度脂蛋白 LDL高密度脂蛋白高密度脂蛋白 HDL电泳法电泳法:密密度度从从低低到到高高脂蛋白脂蛋白前前脂蛋白脂蛋白-脂蛋白脂蛋白乳糜微粒（乳糜微粒（CM）电电泳泳速速度度由由慢慢到到快快中间密度脂蛋白
4、中间密度脂蛋白 IDL脂蛋白脂蛋白(a)Lp(a)第七页，本课件共有80页8原点原点 2 1 清蛋白清蛋白血血浆浆蛋蛋白白电电泳泳 原点原点 前前（CM）血血浆浆脂脂蛋蛋白白电电泳泳第八页，本课件共有80页9（二）血浆脂蛋白的组成与结构（二）血浆脂蛋白的组成与结构血浆脂蛋白血浆脂蛋白脂类：脂类：蛋白质：蛋白质：甘油三酯、甘油三酯、磷脂、胆固醇、胆固醇酯磷脂、胆固醇、胆固醇酯载脂蛋白载脂蛋白第九页，本课件共有80页10 CM 乳糜微粒 VLDL 前脂蛋白 LDL 脂蛋白 HDL 脂蛋白密度0.950.951.0061.0061.0631.0631.210组成脂类蛋白质主要生理功能9899%最少最
5、少,1%9095%510%含胆固醇及其酯含胆固醇及其酯最多最多含脂类含脂类50%2025%最多最多，约，约50%转运外源性转运外源性TG转运内源性转运内源性TG转运胆固醇到转运胆固醇到肝外组织肝外组织逆向转运肝外胆固逆向转运肝外胆固醇回肝醇回肝含含TG最多最多 TG多多 （次于（次于CM）7580%各种血浆脂蛋白的组成及功能各种血浆脂蛋白的组成及功能第十页，本课件共有80页11（三）载脂蛋白（三）载脂蛋白脂蛋白的蛋白部分称为载脂蛋白脂蛋白的蛋白部分称为载脂蛋白(apolipoprotein(apolipoprotein，Apo)Apo)u定义：定义：u种类：种类：第十一页，本课件共有80页12
6、apoA apo B apoC apo D apoE B48 B100 C-,E B100A-,CM VLDLLDLHDL第十二页，本课件共有80页13u功能：功能：与脂质的亲和作用而使脂质溶于水性介质中。与脂质的亲和作用而使脂质溶于水性介质中。运转胆固醇和甘油三酯。运转胆固醇和甘油三酯。作为脂蛋白外壳的结构成分，与脂蛋白外生物信息相联系。作为脂蛋白外壳的结构成分，与脂蛋白外生物信息相联系。以配体的形式作为脂蛋白与特异受体的连接物。以配体的形式作为脂蛋白与特异受体的连接物。（如：apoB100和apoE参与LDL受体的识别；apoE能被CM受体识别）激活某些与血浆脂蛋白代谢有关的酶类激活某些与
7、血浆脂蛋白代谢有关的酶类（如：ApoAI和CI能激活卵磷脂-胆固醇酰基转移酶LCAT，ApoC激活LPL）第十三页，本课件共有80页14u分布及特点：分布及特点：第十四页，本课件共有80页15（四四）脂蛋白受体）脂蛋白受体u定义：定义：脂蛋白受体是一类位于细胞膜上的糖蛋白。它能以高脂蛋白受体是一类位于细胞膜上的糖蛋白。它能以高度的亲和方式与相应的脂蛋白配体作用，从而介导细胞对度的亲和方式与相应的脂蛋白配体作用，从而介导细胞对脂蛋白的摄取与代谢，进一步调节细胞外脂蛋白的水平。脂蛋白的摄取与代谢，进一步调节细胞外脂蛋白的水平。第十五页，本课件共有80页16u脂蛋白受体的作用：脂蛋白受体的作用：位于
8、各种细胞的膜上，脂蛋白转化分解后的残基主要通过脂蛋白受体位于各种细胞的膜上，脂蛋白转化分解后的残基主要通过脂蛋白受体位于各种细胞的膜上，脂蛋白转化分解后的残基主要通过脂蛋白受体位于各种细胞的膜上，脂蛋白转化分解后的残基主要通过脂蛋白受体被摄入细胞。被摄入细胞。被摄入细胞。被摄入细胞。不仅是运送脂蛋白至细胞所必需，也是从血和外周组织中不仅是运送脂蛋白至细胞所必需，也是从血和外周组织中有效清除具有潜在致动脉粥样硬化的脂蛋白所必需的。有效清除具有潜在致动脉粥样硬化的脂蛋白所必需的。u种类：种类：已有很多种，主要有已有很多种，主要有LDLLDL受体、残粒受体（受体、残粒受体（remnant recep
9、torremnant receptor）及清道）及清道夫受体夫受体（scavenger receptorscavenger receptor）其它有）其它有ApoEApoE受体（受体（受体（受体（CMCM）HDLHDL受体和受体和受体和受体和-VLDL-VLDL受体等受体等受体等受体等。第十六页，本课件共有80页17LDLLDL受体受体：分布于分布于肝细胞、动脉壁平滑肌细胞等细胞膜表面肝细胞、动脉壁平滑肌细胞等细胞膜表面识别结合识别结合ApoBApoB100100、E E的脂蛋白如的脂蛋白如LDLLDL、VLDLVLDL等。等。合成受体内胆固醇的负反馈调节合成受体内胆固醇的负反馈调节各种脂蛋白
10、受体功能各种脂蛋白受体功能残粒残粒受体受体：分布在分布在代谢活跃的心肌、骨骼肌、脂肪等组织细胞代谢活跃的心肌、骨骼肌、脂肪等组织细胞。识别、结合含识别、结合含ApoEApoE的脂蛋白的脂蛋白如如CMCM残粒和残粒和-VLDL-VLDL残粒残粒清道夫受体：清道夫受体：存在于存在于巨噬细胞表面巨噬细胞表面 识别、结合识别、结合修饰的修饰的LDLLDL（氧化型（氧化型LDLLDL和和-VLDL）第十七页，本课件共有80页18（五）脂代谢有关的酶类与特殊蛋白质（五）脂代谢有关的酶类与特殊蛋白质u酶酶：LPLLPL、肝脂肪酶（、肝脂肪酶（HLHL或或HTGLHTGL）、）、LCATLCAT、HMG-Co
11、AHMG-CoA还原酶还原酶 参与参与TGTG分解、分解、FCFC合成和酯化合成和酯化第十八页，本课件共有80页19脂质转运蛋白脂质转运蛋白p定义：定义：血浆中脂蛋白部分含有一种特殊的转运蛋白，能促进血浆各脂蛋白间胆固醇酯、血浆中脂蛋白部分含有一种特殊的转运蛋白，能促进血浆各脂蛋白间胆固醇酯、甘油三酯和磷脂的单向或双向转运和交换，这类特殊转运蛋白称脂质转运蛋白甘油三酯和磷脂的单向或双向转运和交换，这类特殊转运蛋白称脂质转运蛋白（lipid transfer protein,LTPlipid transfer protein,LTP）。）。p组成：组成：胆固醇酯转运蛋白（胆固醇酯转运蛋白（CET
12、PCETP）：）：可将可将LCATLCAT催化生成的胆固醇酯由催化生成的胆固醇酯由HDLHDL转移至转移至VLDLVLDL、IDLIDL和和LDLLDL中，在胆固醇的逆向转运中起关键作用中，在胆固醇的逆向转运中起关键作用 磷脂转运蛋白（磷脂转运蛋白（PTPPTP）：）：可促进磷脂由可促进磷脂由CMCM、VLDLVLDL转移至转移至HDLHDL 甘油三酯转运蛋白（甘油三酯转运蛋白（TTPTTP）：）：在富含在富含TGTG的的VLDLVLDL和和CMCM组装和分泌中起主要作用组装和分泌中起主要作用u蛋白质蛋白质：第十九页，本课件共有80页20（一）（一）CM的代谢的代谢来源：由来源：由小肠小肠粘膜
13、细胞合成，经淋巴入血。粘膜细胞合成，经淋巴入血。代谢过程：代谢过程：二、二、血浆脂蛋白代谢血浆脂蛋白代谢第二十页，本课件共有80页21 功能：转运外源性功能：转运外源性TGTG。正常人正常人CMCM在血浆中代谢在血浆中代谢迅速，半衰期为迅速，半衰期为5-155-15分钟，故分钟，故正常人空正常人空腹腹12-14h12-14h后血浆中后血浆中不含不含CMCM。第二十一页，本课件共有80页22（二）（二）VLDL VLDL 及及LDLLDL的代谢的代谢来源：来源：VLDL主要由肝细胞合成，分泌入血，少量来自小肠；主要由肝细胞合成，分泌入血，少量来自小肠；LDL是在血浆中由是在血浆中由VLDL转变而
14、来转变而来代谢过程：代谢过程：第二十二页，本课件共有80页23功能：功能：VLDLVLDL转运内源性转运内源性TG TG；LDLLDL转运胆固醇到肝外组织转运胆固醇到肝外组织第二十三页，本课件共有80页24（三）（三）HDLHDL的代谢的代谢来源：主要由来源：主要由肝细胞肝细胞合成，此外，合成，此外，小肠小肠也可合成也可合成少量，还有少量，还有血浆血浆中中CM、VLDL 脂解过程中所释脂解过程中所释放的磷脂、胆固醇及放的磷脂、胆固醇及apo也可产生新生的也可产生新生的HDL。代谢过程：代谢过程：第二十四页，本课件共有80页25功能：将胆固醇从肝外组织转运到肝进行代谢（逆向转运）。功能：将胆固醇
15、从肝外组织转运到肝进行代谢（逆向转运）。第二十五页，本课件共有80页26三、脂蛋白代谢紊乱三、脂蛋白代谢紊乱（一）高脂蛋白血症（一）高脂蛋白血症（多见）（多见）u定义：定义：高脂血症（高脂血症（hyperlipidemiahyperlipidemia，HLPHLP）是指血浆中）是指血浆中胆固醇胆固醇和和（或或）甘油三酯甘油三酯浓度异常浓度异常升高。血浆脂类以血浆脂蛋白形式存在，因此，升高。血浆脂类以血浆脂蛋白形式存在，因此，高脂血症一般指高脂蛋白血症（高脂血症一般指高脂蛋白血症（hyperlipoproteinemiahyperlipoproteinemia）。）。近年来，已逐渐认识到血浆中近
16、年来，已逐渐认识到血浆中HDLHDL降低也是一种脂代谢紊乱。降低也是一种脂代谢紊乱。成人空腹成人空腹1214h血清（浆）血清（浆）TG2.26mmol/L(200mg/dl)，胆固醇胆固醇6.21mmol/L(240mg/dl)，儿童胆固醇，儿童胆固醇4.14mmol/L(160mg/dl)LDLLDL：与动脉粥样硬化和冠心病呈正相关与动脉粥样硬化和冠心病呈正相关HDLHDL：与动脉粥样硬化和冠心病呈负相关与动脉粥样硬化和冠心病呈负相关VLDLVLDL：与动脉粥样硬化和冠心病呈正相关与动脉粥样硬化和冠心病呈正相关第二十六页，本课件共有80页271.1.按表型分类按表型分类 主要是基于各种血浆脂
17、蛋白升高的程度不同而进行分型。主要是基于各种血浆脂蛋白升高的程度不同而进行分型。该分类法不包括病因学，故称表型分类。该分类法不包括病因学，故称表型分类。u 分型分型：第二十七页，本课件共有80页28（罕见）（罕见）（罕见）（罕见）（常见）（常见）（常见）（常见）（极常见）（极常见）（罕见）（罕见）CMCM带明显带明显脂蛋白明显增高脂蛋白明显增高前前及及脂蛋白均增高脂蛋白均增高前前及及脂蛋白带融合，宽而脂蛋白带融合，宽而浓染的浓染的“宽宽带带”前前脂蛋白明显增高脂蛋白明显增高CMCM带明显，前带明显，前脂蛋白增高脂蛋白增高或透明或透明CMCM残粒及残粒及VLDLVLDL残粒残粒（IDLIDL）第
18、二十八页，本课件共有80页292.2.按是否继发于全身性疾病分类按是否继发于全身性疾病分类 继发性高脂血症：继发性高脂血症：原发性：原发性：继发性者由一些全身性疾病引起血脂异常，如糖尿病、肾病综合征、继发性者由一些全身性疾病引起血脂异常，如糖尿病、肾病综合征、肾功能衰竭、甲状腺功能减退症、肝胆疾病、系统性红斑狼疮、肥胖症、肾功能衰竭、甲状腺功能减退症、肝胆疾病、系统性红斑狼疮、肥胖症、饮酒等。此外，某些药物如饮酒等。此外，某些药物如-受体阻断剂、降压药等也可引起血脂异受体阻断剂、降压药等也可引起血脂异常。常。在排除继发性高脂血症后，可诊断为原发性。已知部分原发性高脂血在排除继发性高脂血症后，可
19、诊断为原发性。已知部分原发性高脂血症由先天性基因缺陷所致症由先天性基因缺陷所致 第二十九页，本课件共有80页303.3.高脂血症的基因分型法高脂血症的基因分型法 表表10-5 10-5 家族性高脂血症的临床特征家族性高脂血症的临床特征常 用 名基因缺陷临床特征表型分类家族性高胆固醇血症L LDL受体缺陷以胆固醇升高为主，可伴轻度甘油三酯升高，LDL明显增加，可有肌腱黄色瘤，多有冠心病和高脂血症家族史。ab家族性Apo B100缺陷症 ApoB100缺陷同上同上家族性混合型高脂血症不清楚胆固醇和甘油三酯均升高，VLDL和LDL都增加，无黄色瘤，家族成员中有不同型高脂蛋白血症，有冠心病家族史。b家
20、族性异常脂蛋白血症ApoE异常胆固醇和甘油三酯均升高，乳糜微粒和VLDL残粒以及IDL明显增加，可有掌皱黄色瘤，多为Apo E2（2/2）表型。家族性高甘油三酯血症不清楚以甘油三酯升高为主，可有轻度胆固醇升高，VLDL明显增加。第三十页，本课件共有80页31（二）低脂蛋白血症（二）低脂蛋白血症 一般将血清一般将血清TC3.3mmol/L，或，或TG0.45mmol/L，或，或LDL-C2.1mmol/L者，称为低脂蛋白血症者，称为低脂蛋白血症。脂质如。脂质如TC和和TG同时降低或脂蛋白同时降低或脂蛋白如如HDL、LDL和和VLDL同时降低多见。同时降低多见。u定义：定义：u原因原因：因某种原因
21、使脂蛋白合成减少，另外分解代谢旺盛也可导致。因某种原因使脂蛋白合成减少，另外分解代谢旺盛也可导致。u分类分类：原发性和继发性原发性和继发性第三十一页，本课件共有80页32第二节第二节 血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定l lTCTC测定测定l lTGTG测定测定l lHDL-CHDL-C测定测定测定测定l lLDL-C测定测定测定测定l lLp（a a）测定）测定l lApoAApoAI I测定测定l lApoB测定测定测定测定l l脂蛋白电泳分析脂蛋白电泳分析脂蛋白电泳分析脂蛋白电泳分析l l其他测定：其他测定：其他测定：其他测定：有关的蛋白质、酶和受有关的蛋白质、酶和受有
22、关的蛋白质、酶和受有关的蛋白质、酶和受体测定体测定体测定体测定l l血清或血浆外观血清或血浆外观（血清（血清/浆静置试验）浆静置试验）血清脂质和脂蛋白检测的分析程序及项目选择血清脂质和脂蛋白检测的分析程序及项目选择第三十二页，本课件共有80页33n血脂测定标准化：血脂测定标准化：血脂分析前变异来源于：血脂分析前变异来源于：生物因素，如年龄、性别、种族等因素的个体差异。生物因素，如年龄、性别、种族等因素的个体差异。生活方式，包括饮食习惯、吸烟、运动及应激等。生活方式，包括饮食习惯、吸烟、运动及应激等。临床方面包括疾病或药物引起的脂代谢改变。临床方面包括疾病或药物引起的脂代谢改变。血标本采集与处理
23、方面血标本采集与处理方面 准确测定应从分析前的准备开始，包括受试者的准备，标本准确测定应从分析前的准备开始，包括受试者的准备，标本采集，合格的试剂、校准物的选用，检测方法选择。采集，合格的试剂、校准物的选用，检测方法选择。方法学上应该采用美国疾病控制中心（方法学上应该采用美国疾病控制中心（CDCCDC）或中华医学会检验）或中华医学会检验分会推荐的操作方法。分会推荐的操作方法。第三十三页，本课件共有80页34抽血前应有两周时间保持平常的生活习惯，近期内体重稳抽血前应有两周时间保持平常的生活习惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、手术等意外情况，定，无急性病、外伤、手术等意外情况，2424小时内不饮
24、酒，小时内不饮酒，禁食禁食12-1412-14小时，早上空腹、安静状态下采血。小时，早上空腹、安静状态下采血。注意事项：注意事项：（1 1）检验前，应根据药物的特性，尽可能停止用药数天或数周。）检验前，应根据药物的特性，尽可能停止用药数天或数周。（2 2）妊娠前、后期各项血脂都会增高，产后、终止哺乳）妊娠前、后期各项血脂都会增高，产后、终止哺乳3 3个月后，才能个月后，才能反映其基本血脂水平。反映其基本血脂水平。（3 3）血脂水平有季节性变动，对于体检者建议应在每年同一季节检查。）血脂水平有季节性变动，对于体检者建议应在每年同一季节检查。（4 4）结合生理和临床情况，综合、动态分析检验结果。）
25、结合生理和临床情况，综合、动态分析检验结果。1.1.受检者的准备受检者的准备标本采集与处理标本采集与处理第三十四页，本课件共有80页352.2.静脉采血静脉采血3.3.抗凝剂抗凝剂4.4.标本处理标本处理除非是卧床的患者，一般在采血时取坐位。止血带的除非是卧床的患者，一般在采血时取坐位。止血带的使用不可超过使用不可超过1 min 1 min，穿刺成功后应立即松开止血，穿刺成功后应立即松开止血带，然后抽血。带，然后抽血。我国多用血清作血脂分析。如果用血浆，多主张我国多用血清作血脂分析。如果用血浆，多主张用用EDTA 2Na EDTA 2Na 抗凝抗凝标本应尽快送往实验室，室温下放置标本应尽快送往
26、实验室，室温下放置30-45 min 30-45 min 后离后离心，分离血清。心，分离血清。第三十五页，本课件共有80页36l l血清或血浆外观血清或血浆外观（血清（血清/浆静置试验）浆静置试验）第三十六页，本课件共有80页37TCTC、TGTG均正常均正常（正常人）（正常人）TCTC,TG,TG正常正常（IIa型）型）TCTC,TG,TG（IIb型）型）TC N/,TGTC N/,TG（I型）型）TCTC,TG,TG（III型型/V/V型）型）TCTC,TG,TG（IIb型型/III型）型）TC N/TC N/,TG,TG（IV型）型）TGTGCMCMVLDLVLDLCMCM及及VLDLV
27、LDL血清（浆）静置试验血清（浆）静置试验 将患者空腹将患者空腹12h12h后采集静脉血分离出血清置后采集静脉血分离出血清置44冰箱中过夜，然后观察其分冰箱中过夜，然后观察其分层现象及清澈度。层现象及清澈度。第三十七页，本课件共有80页38第三十八页，本课件共有80页39第三十九页，本课件共有80页40l lTCTC测定测定测定测定l lTG测定测定测定测定l lHDL-CHDL-C测定测定l lLDL-CLDL-C测定测定测定测定第四十页，本课件共有80页41血清（浆）总胆固醇（血清（浆）总胆固醇（TCTC）测定）测定化学法化学法酶法酶法 血清中血清中TCTC包括包括CECE和和FCFC，其
28、中其中CECE占占7070，FCFC占占3030。第四十一页，本课件共有80页42（一）化学测定法（一）化学测定法（直接法和间接法）（直接法和间接法）1.1.胆固醇与醋酐胆固醇与醋酐 硫酸试剂产生蓝绿色硫酸试剂产生蓝绿色L BL B反应：反应：LibermanLiberman发现胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色，发现胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色，BurchardBurchard用此反应测用此反应测定胆固醇称为定胆固醇称为L-BL-B反应。（条件要求严格、反应。（条件要求严格、试剂腐蚀性强试剂腐蚀性强、对对FCFC与与CECE的显色强的显色强度不一致、呈色不稳定度不一致、呈色不稳定 ）AbellAb
29、ell法法（ALBKALBK法）法）：公认的参考方法公认的参考方法皂化（皂化（KOHKOH乙醇溶液水解乙醇溶液水解CECE成为成为FCFC）、抽提（正己烷或石油醚提取）、抽提（正己烷或石油醚提取FCFC）、显色）、显色（L-BL-B反应）。反应）。2.2.胆固醇与高铁胆固醇与高铁 硫酸试剂产生稳定的紫红色硫酸试剂产生稳定的紫红色ZakZak反应：反应：ZakZak提出用硫酸、醋酸和提出用硫酸、醋酸和Fe3+Fe3+等与胆固醇作用生成紫红色化合物来测定胆固醇，等与胆固醇作用生成紫红色化合物来测定胆固醇，称为称为ZakZak反应。反应。（比比L-BL-B反应的灵敏度高，呈色稳定不需要皂化反应的灵敏
30、度高，呈色稳定不需要皂化，反应特异性差反应特异性差）3.3.胆固醇与邻苯二甲醛胆固醇与邻苯二甲醛 硫酸试剂生成稳定的紫红色硫酸试剂生成稳定的紫红色 第四十二页，本课件共有80页43CEH-COD-PAPCEH-COD-PAP法法 原理：原理：CE CEH H2 2O FCO FCFFAFFA FC FCO O2 2 4-4-胆甾烯酮胆甾烯酮H H2 2O O2 2 H H2 2O O2 24-AAP4-AAP苯苯酚酚 醌亚胺醌亚胺H H2 2O O 试剂：试剂：胆固醇酶测定法的试剂中，除了上述三种酶、酚和胆固醇酶测定法的试剂中，除了上述三种酶、酚和4-4-氨基安氨基安替比林外，还有替比林外，还
31、有维持维持pHpH恒定的缓冲液、胆酸钠、表面活性剂以及稳定剂恒定的缓冲液、胆酸钠、表面活性剂以及稳定剂等。胆等。胆酸钠是为了提高胆固醇酯酶的活性，表面活性剂的作用是促进胆固醇从脂蛋白酸钠是为了提高胆固醇酯酶的活性，表面活性剂的作用是促进胆固醇从脂蛋白中释放出来中释放出来 500nm(二二)酶测定法酶测定法(常规方法）常规方法）第四十三页，本课件共有80页44n评价：评价：优点优点：特异性好，精密度和灵敏度都能很好地满足临床实验室的要特异性好，精密度和灵敏度都能很好地满足临床实验室的要求，求，操作简便，试剂无腐蚀性操作简便，试剂无腐蚀性，手工手工和和自动分析自动分析皆可，终点法与速率皆可，终点法
32、与速率法皆可。法皆可。缺点缺点：某些胆固醇酯酶对胆固醇酯的水解不完全，不能用纯胆固醇结晶以有机某些胆固醇酯酶对胆固醇酯的水解不完全，不能用纯胆固醇结晶以有机溶剂配制的溶液作为溶剂配制的溶液作为TCTC分析的校准液，而分析的校准液，而应以准确定值的血清作为标准应以准确定值的血清作为标准。表面活性剂表面活性剂，如吐温，如吐温-40-40可以干扰胆固醇酯酶的作用，而聚乙烯醇可以干扰胆固醇酯酶的作用，而聚乙烯醇60006000可使结果提高可使结果提高1 12 2；本法具有本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷氧化酶反应途径的共同缺陷，易受到一些还原性物质如尿酸、胆红素、维，易受到一些还原性物质如尿酸、胆红素
33、、维生素生素C C和谷胱甘肽等的干扰。和谷胱甘肽等的干扰。第四十四页，本课件共有80页45 血清总胆固醇合适范围：血清总胆固醇合适范围：5.20mmol/L(200mg/dl)5.20mmol/L(200mg/dl)，边缘升高：边缘升高：5.235.235.69mmol/L(2015.69mmol/L(201219mg/dl)219mg/dl)，升高：升高：5.72mmol/L(220mg/dl)5.72mmol/L(220mg/dl)。n参考参考范围：范围：第四十五页，本课件共有80页46 TCTC除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外，不能作为其它任何疾病的诊断指标，对除了作为高胆固醇血症的诊
34、断指标之外，不能作为其它任何疾病的诊断指标，对于动脉粥样硬化和冠心病而言，于动脉粥样硬化和冠心病而言，TCTC是一个明确的危险因子，与冠心病的发病率呈是一个明确的危险因子，与冠心病的发病率呈正相关。正相关。n临床意义临床意义：u高高TCTC血症：血症：原发和继发原发和继发（了解）u低低TCTC血症：血症：原发和继发原发和继发（了解）第四十六页，本课件共有80页47l lTCTC测定测定测定测定l lTGTG测定测定l lHDL-C测定测定l lLDL-CLDL-C测定测定第四十七页，本课件共有80页48血清（浆）甘油三酯（血清（浆）甘油三酯（TGTG）测定）测定化学法化学法酶法酶法第四十八页，
35、本课件共有80页49n基本操作：基本操作：（一）化学测定法（一）化学测定法1 1、抽提抽提：用有机溶剂抽提标本中的用有机溶剂抽提标本中的TGTG，并去除磷脂等干扰物质，并去除磷脂等干扰物质2 2、皂化皂化：用碱（用碱（KOHKOH）水解（皂化）水解（皂化）TGTG生成甘油生成甘油3 3、氧化氧化：以过碘酸氧化甘油生成甲醛以过碘酸氧化甘油生成甲醛4 4、显色显色：用显色反应对甲醛定量（变色酸、乙酰丙酮）用显色反应对甲醛定量（变色酸、乙酰丙酮）Van Handel法法（参考方法）（参考方法）氯仿抽提氯仿抽提TG、硅酸吸附掉磷脂、硅酸吸附掉磷脂、KOH皂化、过碘酸氧化、变色酸显紫红色皂化、过碘酸氧化
36、、变色酸显紫红色第四十九页，本课件共有80页50(二二)酶测定法酶测定法1 1、磷酸甘油氧化酶法（、磷酸甘油氧化酶法（GPO-PAPGPO-PAP法）法）常规方法常规方法n原理：原理：第五十页，本课件共有80页51去除去除FGFG干扰可用下列方法：干扰可用下列方法：1 1、外空白法：同时用不含、外空白法：同时用不含LPLLPL的酶试剂测定的酶试剂测定FG FG 作空白。作空白。2 2、内空白法：又称两步法或双试剂法、内空白法：又称两步法或双试剂法将将LPLLPL和和4-AAP4-AAP组组成试剂成试剂2 2，其余部分为试剂，其余部分为试剂1 1。此两步法目前为中华医学。此两步法目前为中华医学会
37、检验分会会检验分会推荐方法推荐方法。特异性和准确性好，主要缺点是测定结果包括特异性和准确性好，主要缺点是测定结果包括血清中的游离甘油（血清中的游离甘油（FGFG）n特点：特点：第五十一页，本课件共有80页52 2 2乳酸脱氢酶法乳酸脱氢酶法 原理：原理：TG+3H2O LPL Glycerol+3RCOOH Glycerol+ATP GK+Mg2+G-3-P+ADP ADP+磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸激酶丙酮酸激酶 丙酮酸丙酮酸 +ATP丙酮酸丙酮酸+NADH LDH NAD+乳酸乳酸 由于反应消耗由于反应消耗NADHNADH，故可利用，故可利用NADHNADH在在340nm34
38、0nm吸光度降低来吸光度降低来测定甘油三脂的浓度测定甘油三脂的浓度。第五十二页，本课件共有80页53n评价：评价：本法结果准确，但灵敏度较低，试剂也不本法结果准确，但灵敏度较低，试剂也不太稳定。由于血清本身存在游离甘油和丙酮酸太稳定。由于血清本身存在游离甘油和丙酮酸等干扰物质，所以测定时除了要做试剂空白外，等干扰物质，所以测定时除了要做试剂空白外，还要做标本空白（外空白）还要做标本空白（外空白）第五十三页，本课件共有80页543 3甘油氧化酶法甘油氧化酶法 第一步：第一步：FG+OFG+O2 2 甘油氧化酶甘油氧化酶 甘油醛甘油醛+H+H2 2O O2 2 H H2 2O O2 2+EMAE
39、+EMAE PODPOD 无色物质无色物质消除游离甘油的影响，消除游离甘油的影响，3-5min3-5min后进行第二步反应：后进行第二步反应：TG+3HTG+3H2 2O O LPLLPL Glycerol+3RCOOH Glycerol+3RCOOHFG+OFG+O2 2 甘油氧化酶甘油氧化酶 甘油醛甘油醛+H+H2 2O O2 2H H2 2O O2 2+4-AAP+EMAE +4-AAP+EMAE PODPOD 有色化合物有色化合物注：注：EMAEEMAE作用与酚相似，是还原剂，但灵敏度比酚高。作用与酚相似，是还原剂，但灵敏度比酚高。n原理原理：该法分两步完成。该法分两步完成。第五十四页
40、，本课件共有80页55 参考值参考值 血清甘油三酯一般随年龄增加而升高，体重超过标准者往往血清甘油三酯一般随年龄增加而升高，体重超过标准者往往偏高。偏高。合适范围：合适范围：1.70mmol/L(150mg/dl)1.70mmol/L(150mg/dl)，升高：升高：1.70mmol/L(150mg/dl)1.70mmol/L(150mg/dl)。第五十五页，本课件共有80页56临床意义临床意义 原发性高原发性高TGTG血症多有遗传因素，包括家族性高血症多有遗传因素，包括家族性高TGTG血症与家血症与家族性型高脂（蛋白）血症等。继发性高族性型高脂（蛋白）血症等。继发性高TGTG血症见于糖尿病、
41、糖血症见于糖尿病、糖原累积病、甲状腺机能减退、肾病综合征、妊娠、口服避孕药、原累积病、甲状腺机能减退、肾病综合征、妊娠、口服避孕药、酗酒等。酗酒等。大量前瞻性的研究证实，大量前瞻性的研究证实，富含富含TGTG的脂蛋白是的脂蛋白是CHDCHD的独立的的独立的危险因子危险因子，TGTG增加表明患者存在代谢综合症，需进行治疗。增加表明患者存在代谢综合症，需进行治疗。甘油三酯降低比较少见，甘油三酯降低比较少见，甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能减退和肝功能严重损伤时可以见到甘油三酯降低能减退和肝功能严重损伤时可以见到甘油三酯降低 第五十六页，本课件共有80页57l lTCTC测
42、定测定l lTGTG测定测定l lHDL-CHDL-C测定测定测定测定l lLDL-C测定测定第五十七页，本课件共有80页58HDL-CHDL-C测定测定 常以测定常以测定HDL-CHDL-C含量代表含量代表HDLHDL水平。水平。HDLHDL分离（超速离心、分离（超速离心、沉淀沉淀、层析等）、层析等）HDL-CHDL-C测定（化学法、酶法）测定（化学法、酶法）第五十八页，本课件共有80页59n常规方法常规方法:1磷钨酸磷钨酸-镁法镁法 2HDL直接测定法直接测定法（匀相法）（匀相法）n参考方法参考方法:超速离心除去超速离心除去VLDLVLDL，然后用肝素，然后用肝素-Mn-Mn沉淀沉淀LDL
43、LDL，上清，上清液中的液中的HDL-CHDL-C用用ALBKALBK法测定。法测定。第五十九页，本课件共有80页60磷钨酸磷钨酸-镁法镁法此法曾为中华医学会检验分会的推荐方法，目前基层单此法曾为中华医学会检验分会的推荐方法，目前基层单位还在应用，虽不能完全自动化，但测定结果尚能满足位还在应用，虽不能完全自动化，但测定结果尚能满足临床要求。临床要求。原理：原理：第六十页，本课件共有80页61HDL直接测定法直接测定法（匀相法）（匀相法）HDLHDL直接测定法大致分三类，分别是直接测定法大致分三类，分别是:聚乙二醇聚乙二醇/抗体包裹法抗体包裹法酶修饰法酶修饰法选择性抑制法，又称掩蔽法，目前国内应
44、用最多。选择性抑制法，又称掩蔽法，目前国内应用最多。最近中华医学会检验学会血脂专题委员会推荐匀相法作为临床最近中华医学会检验学会血脂专题委员会推荐匀相法作为临床实验室测定实验室测定HDL CHDL C的常规方法的常规方法第六十一页，本课件共有80页62成人：男性成人：男性1.161.42mmol/L(4555mg/dl)女性女性1.291.55mmol/L(5060mg/dl)理想范围：理想范围：1.04mmol/L(40mg/dl),降低：降低：0.91mmol/L(35mg/dl)【参考【参考范围范围】【临床意义临床意义】流行病学与临床研究证明，流行病学与临床研究证明，HDL-CHDL-C
45、与冠心病发病呈负相关，与冠心病发病呈负相关，HDL-CHDL-C低于低于0.9 mmol/L 0.9 mmol/L 是冠心病危险因素。是冠心病危险因素。HDL-CHDL-C大于大于1.55mmol/L1.55mmol/L被认为是被认为是冠心病的冠心病的“负负”危险因素危险因素。HDL-C HDL-C下降还多见于脑血管病、糖尿病、下降还多见于脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。肝炎、肝硬化病人。高高TGTG血症往往伴以低血症往往伴以低HDL-CHDL-C，肥胖者的，肥胖者的HDL-CHDL-C也多也多偏低。吸烟可使偏低。吸烟可使HDL-CHDL-C下降，适量饮酒、长期体力劳动和运动会使下降，适量
46、饮酒、长期体力劳动和运动会使HDL-CHDL-C升高。升高。第六十二页，本课件共有80页63l lTCTC测定测定测定测定l lTGTG测定测定l lHDL-CHDL-C测定测定l lLDL-CLDL-C测定测定测定测定第六十三页，本课件共有80页641 1FriedewaldFriedewald公式法公式法 LDL-CLDL-CTCTCHDL-CHDL-CTG/5TG/5（以（以mg/dlmg/dl为单为单位时），或位时），或LDL-CLDL-CTCTCHDL-CHDL-CTG/2.2TG/2.2（以（以mmol/Lmmol/L为单位时）。为单位时）。2 2聚乙烯硫酸盐沉淀法聚乙烯硫酸盐沉淀
47、法 本法并非对本法并非对LDL-CLDL-C作直接测定，而是用作直接测定，而是用聚乙烯硫酸（聚乙烯硫酸（PVSPVS）选择性沉淀血清中）选择性沉淀血清中LDLLDL，再以血清，再以血清TCTC减去上清液减去上清液（含（含HDLHDL与与VLDLVLDL）胆固醇即得）胆固醇即得LDL-CLDL-C值。值。3 3直接测定法直接测定法:两类两类目前各类方法测定的目前各类方法测定的LDL-CLDL-C值都包括值都包括IDLIDL和和LP(a)LP(a)的的cholchol在内在内 LDL-CLDL-C测定测定 常以测定常以测定LDL-CLDL-C含量代表含量代表LDLLDL水平。水平。第六十四页，本课
48、件共有80页65 LDL-CLDL-C合适范围：合适范围：3.12mmol/L(120mg/dl)3.12mmol/L(120mg/dl)，边缘升高：边缘升高：3.153.153.61mmol/L(1213.61mmol/L(121139mg/dl)139mg/dl)升高：升高：3.64mmol/L(140mg/dl)3.64mmol/L(140mg/dl)。【参考值参考值】【临床意义临床意义】LDL-CLDL-C增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因素。增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因素。由于由于TCTC水平同时也受水平同时也受HDL-CHDL-C水平的影响，所以最好以水平的影
49、响，所以最好以LDL-CLDL-C代替代替TCTC作为冠心病危险因素指标。美国国家胆固醇教育计划成人治作为冠心病危险因素指标。美国国家胆固醇教育计划成人治疗专业组规定以疗专业组规定以LDL-CLDL-C水平作高脂蛋白血症的治疗决策及其需水平作高脂蛋白血症的治疗决策及其需要达到的治疗目标。要达到的治疗目标。第六十五页，本课件共有80页66l lLp（a a）测定）测定）测定）测定l lApoAI测定测定测定测定l lApoB测定测定第六十六页，本课件共有80页67脂蛋白脂蛋白(a)(a)测定测定 脂蛋白（脂蛋白（脂蛋白（脂蛋白（a a a a）是由特异的载脂蛋白是由特异的载脂蛋白是由特异的载脂蛋
50、白是由特异的载脂蛋白apo(a)apo(a)apo(a)apo(a)与与与与LDLLDLLDLLDL的的的的apoB-100apoB-100apoB-100apoB-100以二硫键相连而成以二硫键相连而成以二硫键相连而成以二硫键相连而成,因而脂质组成与因而脂质组成与因而脂质组成与因而脂质组成与LDLLDLLDLLDL相似。相似。相似。相似。apo(a)apo(a)apo(a)apo(a)决定决定决定决定 Lp(a)Lp(a)Lp(a)Lp(a)的特异性的特异性的特异性的特异性,是是是是Lp(a)Lp(a)Lp(a)Lp(a)的特异性抗原的特异性抗原的特异性抗原的特异性抗原,apo(a)apo(