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1、 ICS 65.020.01 CCS B05 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 25402022 羊肚菌菌种制作技术规程 Regulation of strain manufacture for morehella esculenta BDB15/T 25402022 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（SAM/TC 25）归口。本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、赤峰市克什克腾旗农牧局、内蒙古瑞福杨种植专业合作社。本文件主要起草人：于传宗、孙国琴、王海燕、庞杰、李亚
2、娇、慕宗杰、于凤玲、刘瑞、田永雷、韩凤英、云伏雨、田文龙。DB15/T 25402022 羊肚菌菌种制作技术规程 1 范围 本文件规定了羊肚菌菌种生产技术要求。本文件适用于羊肚菌母种、原种和栽培种菌种生产技术。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 4806.7 食品安全国家标准 食品接触用塑料材料及制品 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1731 食用菌菌种良好作业规范 3 术语和定义 3.13.23.33
3、.4DB15/T 25402022 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以菌种瓶（玻璃菌种瓶或塑料菌种瓶）或（1217）cm（2228）cm（0.040.05）mm聚丙烯塑料袋为容器。也称为二级种。栽培种 spawn 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以菌种瓶（玻璃瓶或塑料瓶）或（1517）cm（3335）cm（0.040.05）mm聚丙烯塑料袋为容器。栽培种只能用于扩大到栽培出菇袋或直接出菇，不可以再次扩大繁殖菌种。也称为三级种。4 菌种生产要求 人员 生产所需要的技术人员和检验人员经过专业培训、掌握基础知识及菌种生产技术规程要求的相应专业技术人员。场地、厂房要求 菌种生产
4、应选择地势高，通风良好，空气清新，水源近，排水通畅，交通便利的场所。菌种生产厂房要求有各自隔离的摊晒场、原材料库、配料分装库。配套有配料室、搅拌室、装袋（瓶）室、灭菌室、冷却室、接种室、培养室（通风好，有纱窗）、菌种检测室及菌种冷藏库等各环节的设施。冷却室、接种室，培养室都要有离子净化设施。3.54.14.24.35.15.25.3DB15/T 25402022 降温至（655）时取出试管，在空气清洁的室内摆斜面，要求斜面长度不超过试管长度的2/3，自然降温凝固后成斜面。从摆好的试管中抽取3%5%的试管，在28 下培养48 h，无微生物长出为灭菌合格。5.3.2 平板培养基分装和灭菌 培养基装
5、入300 ml500 ml三角瓶至刻度的2/3处，用带滤膜的封口膜封口后放入灭菌锅；玻璃培养皿用报纸包好，放入灭菌锅。在温度升至 102 105 排净冷空气后升压，升至121 122 （0.11 MPa0.12 MPa）恒温灭菌25 min。降温至（655）时，在超净工作台内将三角瓶中的培养基分装至无菌培养皿中，培养基占培养皿高度的1/31/2。接种 在超净工作台或接种箱内接种，接种前用紫外灭菌灯照射30 min，之后用75%酒精进行表面消毒。接菌过程严格执行无菌操作，接种后及时贴好标签并做好记录。接种的菌块3 mm5 mm，接种在培养皿或试管的中部。培养皿需用石腊封口膜密封。菌丝长满试管斜面
6、或培养皿表面即可使用。培养 温度控制在18 26，空气湿度在75%以下，通风避光培养。接种后第3 d、第5 d和长满培养基后分别进行检验，挑出未活、污染和生长不良的不合格培养器皿。检查方式符合NY/T 1731规定。5.45.56.16.26.3DB15/T 25402022 灭菌 可采用高压灭菌和常压灭菌。高压灭菌：组合培养料在121 122 （0.11 MPa0.12 MPa）下灭菌2 h；粮食培养基在 121 122（0.11 MPa0.12 MPa）下灭菌 2.5 h。常压灭菌：在3 h之内使温度升至100，恒温保持10 h12 h。接种 高压灭菌：组合培养料在121 122 （0.1
7、1 MPa0.12 MPa）下灭菌2 h；粮食培养基在121 122（0.11 MPa0.12 MPa）下灭菌2.5 h。常压灭菌：在3 h之内使温度升至100，恒温保持10 h12 h。培养 通风避光、21 26 下培养。贮存 原种和栽培种在0 4 下贮存，贮存期不超过50 d。7 检验 母种感官要求见表 1。6.46.56.66.7DB15/T 25402022 原种感官要求见表 2。表2 羊肚菌原种感官要求 项目 要求 容器 完整、无破损、洁净 棉塞或无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距瓶（袋）口的距离（505）mm 菌种外观 菌丝生长量 长满容器 菌丝体特征 菌丝体白、生长旺健、整齐 培养物表面菌丝体 生长均匀、无高温抑制线 培养基及菌丝体 紧贴瓶壁、无干缩 菌丝分泌物 无、允许少量无色至棕黄色水珠 杂菌菌落 无 子实体原基 无 栽培种感官要求见表 3。表3 羊肚菌栽培种感官要求 项目 要求 7.27.3