北工大微生物学 第4章.ppt

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1、北工大微生物学 第4章 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望第四章第四章 微生物的营养微生物的营养o第一节 微生物细胞的化学组成o第二节 营养物及其功能o第三节 微生物吸收营养的方式o第四节 微生物的营养类型o第五节 微生物的培养基第一节第一节 微生物细胞的化学组成微生物细胞的化学组成o（一）化学元素（一）化学元素(chemical element):o大量元素(macroelement):碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、镁、钙、铁（其中前六种占细菌细胞干重

2、的97%）。o微量元素(trace element):锌、锰、钠、氯、钼、硒、钴、铜、钨、镍、硼。元素元素 细菌细菌 酵母菌酵母菌 霉菌霉菌 碳碳 50 49.8 47.9 50 49.8 47.9氮氮 15 12.4 5.2 15 12.4 5.2氢氢 8 6.7 6.7 8 6.7 6.7氧氧 20 31.1 40.2 20 31.1 40.2磷磷 3 3 硫硫 1 1 （二）微生物细胞的化学成分及分析（二）微生物细胞的化学成分及分析o微生物细胞中的各种元素的存在形式：主要以 水、有机物、无机物的形式存在于细胞中o有机物：蛋白质、核酸、维生素及降解产物和中间代谢产物o无机物：细胞中与有机物

3、质结合或单独存在的无机盐o水o微生物细胞的化学组成的影响因素：微生物种类、菌龄、培养条件（三）元素在细胞内存在形式：（三）元素在细胞内存在形式：上述元素主要以水、有机物、无机盐的形式存在于细胞中：1有机物：蛋白质、糖、脂类、核酸、维生素及其降解产物.2无机物：1)参与有机物组成，2)单独存在于细胞质内以无机盐的形式存在.3、水：约占细胞总重70%90%，以游离水和结合水两种 形式存在 游离水：干重法可测得；结合水：不易蒸发、不冻结、也不能渗透,占水总量的17%28%。一般生物能利用的，微生物能利用；一般生物能利用的，微生物能利用；一般生物不能利用的，微生物也能利用；一般生物不能利用的，微生物也

4、能利用；对一般生物有害的，微生物还能利用对一般生物有害的，微生物还能利用。微生物是杂食性的：微生物是杂食性的：v 参与微生物参与微生物细胞的胞的组成成 v 提供微生物机体提供微生物机体进行各种生理活行各种生理活动所需的能量所需的能量 v 形成微生物代形成微生物代谢产物的来源物的来源 功能功能:营养物养物质是微生物新是微生物新陈代代谢和一切生命活和一切生命活动的物的物质基基础，失，失去去这个基个基础，生命也就停止。，生命也就停止。第二节第二节 、营养物质及其生理功能、营养物质及其生理功能第二节第二节 、营养物质及其生理功能、营养物质及其生理功能o碳源（carbon source）o氮源（nitr

5、ogen source）o无机盐（mineral salts）o生长因子（growth factor）o水（wahtor）营养物质及其生理功能微生物与动植物营养要素的比较一、碳源（一、碳源（Carbon sourceCarbon source）定义：凡可被用来构成细胞物质或代谢产物中碳素来源的营养物质。功能：提供合成细胞物质及代谢物的原料;并为整个生理活动提供所需要能源（异养微生物）。种类:无机含碳化合物：如CO2和碳酸盐等。有机含碳化合物：糖与糖的衍生物（多糖：如淀粉、麸皮、米糠等；饴糖；单糖）,脂类、醇类。有机酸、烃类、芳香族化合物 以及各种含碳的化合物。微生物的碳源谱类型元素水平 化合物

6、水平 培养基原料水平有机碳CHONX复杂蛋白质、核酸等牛肉膏、蛋白胨、花生饼粉等CHON多数氨基酸、简单蛋白质等一般氨基酸、明胶等CHO糖、有机酸、醇、脂类等葡萄糖、蔗糖、各种淀粉、糖蜜等CH烃类天然气、石油及其不同馏份、石蜡油等无机碳C(?)COCO2CO2COXNaHCO3NaHCO3、CaCO3、等碳源功能 C素构成细胞及代谢产物的骨架 C素是大多数微生物代谢所需的能量来源碳源种类 无机C源：CO2、碳酸盐，只能被自养微 生物利用 有机C源：各种糖类，其次是有机酸、醇类、脂类和烃类化合物二二.氮源氮源（Nitrogen source ）：凡用来构成微生物细胞物质或代谢产物中氮素来源的营养

7、源。种类：无机氮：铵盐、硝酸盐、亚硝酸盐、尿素、氨、N2等；有机氮：蛋白质及其降解产物（如胨、肽、氨基酸等）、牛肉膏、鱼粉、花生饼粉、黄豆饼粉、玉米浆等 功能：1）提供合成细胞中含氮物，如蛋白质、核酸，以及含氮代谢物等的原料。2）少数细菌可以铵盐、硝酸盐等氮源为能源。微生物的氮源谱类型 元素水平化合物水平培养基原料水平有机氮NCHOX复杂蛋白质、核酸等牛肉膏、酵母膏、饼粕粉、蚕蛹粉等NCHO尿素、一般氨基酸、简单蛋白质等尿素、蛋白胨、明胶等无机氮NHNH3、铵盐等(NH4)2SO4等NO硝酸盐等KNO3等NN2空气氮源种类分子态氮：固氮微生物以分子氮为唯一氮源 无机态氮：硝酸盐、铵盐几乎所有微

8、生物能利用 有机态氮：蛋白质及其降解产物 a速效氮源：实验室常用牛肉膏、蛋白 质、酵母膏做氮源 b迟效氮源：生产用玉米浆、豆 饼、葵花饼、花生饼等。实验室常用的无机氮源有碳酸铵、硝酸盐、硫酸铵、尿素、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏等。生产上常用的氮源有硝酸盐、铵盐、尿素、氨以及蛋白含量较高的鱼粉、蚕蛹粉、黄豆饼粉、花生饼份、玉米浆等。蛋白氮必须通过水解之后降解成胨、肽、氨基酸等才能被机体利用，这种氮源叫迟效氮源。无机氮源或以蛋白质降解产物形式存在的有机氮源可以直接被菌体吸收利用，这种氮源叫做速效氮源。速效氮源，通常有利于机体的生长，迟效氮源，有利于代谢产物的形成。三.能源o凡是能够提供微生物生命活动过

9、程中需要的能量来源的物质能源.o异养微生物能源碳源o自养微生物光能自养菌-日光-能源o 化能自养菌-氧化无机物-能源能能为为微微生生物物的的生生命命活活动动提提供供最最初初能能量量来来源源的的化化学学物物质质或或辐射能。辐射能。（三）能源（三）能源(energy source)异养微生物的碳源同时也是能源异养微生物的碳源同时也是能源无机物：化能自养微生物的能源无机物：化能自养微生物的能源能源谱能源谱化学物质化学物质辐射能：光能自养和光能异养微生物的能源辐射能：光能自养和光能异养微生物的能源有机物：化能异养微生物的能源有机物：化能异养微生物的能源四四.无机盐（无机盐（inorganic salt

10、inorganic salt）定义：为微生物细胞生长提供碳、氮源以外的多种重要元素（包括大量元素和微量元素）的物质，多以无机盐的形式共给。大量元素：P、S、K、Mg、Ca、Na、Fe（微生物生长所需浓度在10-310-4mol/L）微量元素：Cu、Zn、Mn、Mo、Co（微生物生长所需浓度在10-610-8mol/L）一般微生物生长所需要的无机盐有：硫酸盐、磷酸盐、氯化物以及含有钠、钾、镁、铁等金属元素的化合物。无机盐生理功能无机盐生理功能构成微生物细胞的组成成分调解微生物细胞的渗透压，PH值和氧化还原电位。有些无机盐如S、Fe还可做为自养微生物的能源。构成酶活性基的组成成分，维持E活性。Mg

11、、Ca、K是多种E的激活剂。无机元素的来源和功能元素人为提供形式生 理 功 能PKH2PO4、K2HPO4核酸、磷酸和辅酶的成分SMgSO4 含硫氨基酸、含硫维生素成分KKH2PO4、K2HPO4酶的辅因子、维持电位差和渗透压NaNaCl 维持渗透压、某些细菌和蓝细菌需要CaCa(NO3)2、CaCl2胞外酶稳定剂、蛋白酶辅因子、细菌芽孢和 真菌孢子形成MgMgSO4 固氮酶辅因子、叶绿素成分FeFeSO4Cyt成分；合成叶绿素、白喉毒素和氯高铁血红素所需MnMnSO4超氧化物歧化酶、氨肽酶、L-阿拉伯糖异构酶等的辅因子CuCuSO4 氧化酶、酪氨酸酶的辅因子ZnZnSO4 碱性磷酸酶、脱氢酶

12、、肽酶、脱羧酶辅因子Mo(NH4)6Mo7O24 固氮酶和同化型及异化型硝酸盐还原酶的成分无机盐的生理功能无机盐的生理功能无机盐无机盐大量元素大量元素微量元素微量元素一般功能一般功能特殊功能特殊功能细胞内一般分子成分细胞内一般分子成分(P、S、Ca、Mg、Fe等等)生理调节物质生理调节物质渗透压的维持渗透压的维持(Na+等等)酶的激活剂酶的激活剂(Mg等等)pH的稳定的稳定化能自养菌的能源化能自养菌的能源(S、Fe2+、NH4+、MO2-等等)无氧呼吸时的氢受体无氧呼吸时的氢受体(NO3-、SO42-等等)酶的激活剂酶的激活剂(Cu2+、Mn2+、Zn2+等等)特殊分子结构成分特殊分子结构成分

13、(Co、Mo等等)五五.生长因素（生长因素（growth factorgrowth factor）定义:它是一类对微生物正常生活所不可缺少而需要量又不大，但微生物自身不能用简单的碳源或氮源合成，或合成量不足以满足机体生长需要的有机营养物质。不同微生物需求的生长因子的种类和数量不同。数量不同。缺乏合成生长因子能力的微生物称为营养缺陷型微生物主要包括：维生素 氨基酸 碱基维生素有的微生物自己不能合成维生素，需要外加，主要是B族维生素、硫胺素、叶酸、泛酸、核黄素等，如生产味精需加生物素（是B族中的一种即VH）。五五.生长因素（生长因素（growth factor）氨基酸有些微生物自己不能合成某种AA

14、，必须给予补充，如赖AA发酵所用的黄色短杆菌不能合成环丝AA，为环丝AA缺陷型菌株，在培养基中必须添加含环丝AA的氮源。如豆饼水解液或毛发水解液等。各种菌合成AA的能力有很大差别，一般G菌强于G，大肠杆菌自己能合成全部AA，沙门氏菌能合成大部分AA，有的菌合成AA能力极弱，如肠道串珠菌需从外界补充19种AA。碱基 嘧啶和嘌呤是核酸和辅E的重要组分，是许多微生物必须的生长因素。有些微生物不仅不能合成嘧啶和嘌呤，而且不能将补充的嘧啶和嘌呤结合在核苷酸上，还必须供给核苷酸，有的菌需补充卟啉或其衍生物，还有的菌需供给（低碳）脂肪酸等。最早发现的生长因子是维生素，目前已经发现许多维生素都能起生长因子的作

15、用。维生素大部分是构成酶的辅基或辅酶，需要量很少，但是缺少维生素微生物不能正常生长。有些微生物缺乏或丧失合成某种或某些氨基酸的酶，所以不能合成生长所必需的氨基酸，这类微生物被称为“氨基酸缺陷型”。例如：肠膜明串珠菌（leuconostoc mesenteroides）常常需要由外源供给多种氨基酸才能生长。另外有些微生物生长还需要其它特殊的成分，例如某些乳酸杆菌生长需要核苷；某些酵母菌和真菌生长需要肌醇；某些肺炎球菌生长需要胆碱等。根据微生物对生长因子的需要存在差异，可分为：1.野生型(wild type)又称原养型 不需要生长因子而能在基础培养基上生长的菌株2.营养缺陷型(auxotroph)

16、由于自发或诱发突变等原因从野生型菌株产生的需要提供特定生长素物质才能生长的菌株六六.水（水（water）微生物细胞含水约占细胞鲜重的7090，水作用是多方面的。水活度的表示方法水活度的表示方法 微生物可利用的水，用水活度来表示（Qw），Qw是指在相同的温度和压力下，溶液中水的蒸气压和纯水的蒸气压的比即an=P溶液/P纯水，微生物生长所需的水活度通常在0.630.99之间，细菌水活度较高为0.8，酵母菌次之，耐旱的微生物水活度为0.6，水中溶质越高水活度越低。微生物对水的需要程度（水对微生物生长的影响）常用环境（或基质）中的水活度值（water activity,w）表示。所谓w就是水的有效浓度

17、。定义：水活度为在一定的温度条件下，溶液的蒸汽压（材料上部蒸气相中水浓度）与纯水的蒸汽压（即纯水上部蒸气相中水浓度）之比，即：w=/o 表示溶液的蒸汽压 o表示纯水的蒸汽压在w为0.600.99的环境条件均有微生物生长，但对某种微生物而言，它对w的要求是一定的，微生物对水的需求有相当的变化程度。即微生物不同，其生长的最适w亦不同。几类微生物生长最适w 微生物 w一般细菌 0.91 酵母菌 0.88霉菌 0.80 噬盐细菌 0.70 噬盐真菌 0.65 嗜高渗酵母 0.60 为了表示微生物生长与水的关系，有时也常用相对湿度（RH)的概念（w 100=RH）；通常也用测定蒸气相中相对湿度的方法得知

18、溶液或物质的水活度。水的功能 1.水是细胞中生化反应的良好介质；营养物质和代谢产物都必须溶解在水里，才能被吸收或排出体（细胞）外。2.参与细胞的一系列化学反应 3.维持蛋白质、核酸等生物大分子稳定的天然的构象。4.水的比热高，能有效的吸收代谢过程中放出的热量，不致使细胞的温度骤然上升。5.水能维持细胞的膨压（控制细胞形态）6.水合与脱水控制多亚基组成的细胞结构，如酶、微管、鞭毛及病毒颗粒的组装与解离。第三节第三节微生物吸收营养物质的方式微生物吸收营养物质的方式营营养养物物质质的的吸吸收收与与代代谢谢产产物物的的分分泌泌，涉涉及及到到物物质质的的运运输输、营营养养物物吸吸收收至至胞胞内内被被利利

19、用用、代代谢谢物物分分泌泌到到胞胞外外以以免免积积累累，这这就就是是物物质质运运输输过程。过程。第三节第三节 微生物吸收营养物质的方式微生物吸收营养物质的方式 一一.微生物吸收营养的机制微生物吸收营养的机制:在营养物质运送方面，细胞壁仅简单地排阻分子量过大在营养物质运送方面，细胞壁仅简单地排阻分子量过大(600Da)的溶质进入的溶质进入,而具有磷脂双分子层和嵌而具有磷脂双分子层和嵌合蛋白分子的细胞膜则是控制营养物质进入和排除的合蛋白分子的细胞膜则是控制营养物质进入和排除的主要屏障。主要屏障。v通透性与吸收是不同概念通透性与吸收是不同概念v一般大分子先水解为小分子，再吸收一般大分子先水解为小分子

20、，再吸收v脂溶性物质：易透过脂溶性物质：易透过v离子化合物：弱快强慢（极性）离子化合物：弱快强慢（极性）第三节第三节微生物吸收营养物质的方式微生物吸收营养物质的方式单纯扩散（simple diffusion）促进扩散（facilitated diffusion）主动运输(active transport)基团移位(group translocation)二二.微生物吸收营养的方式微生物吸收营养的方式1 1、单纯扩散单纯扩散(simple diffusion or passive diffusion)特点：v扩散是非特异性的营养物质吸收方式：如营养物质通过细胞膜中的含水小孔，由高浓度的胞外环境向

21、低浓度的胞内扩散；v 在扩散过程中营养物质的结构不发生变化：即既不与膜上的分子发生反应，本身的分子结构也不发生变化；1、单纯扩散、单纯扩散(simple diffusion or passive diffusion)o物质运输的速率较慢：速率与胞内外营养物质的浓度差有关，即随细胞膜内外该物质浓度差的降低而减小，直到胞内外物质浓度相同；o不需要载体参与；扩散是一个不需要代谢能的运输方式：因此，物质不能进行逆浓度运输。o可运送的养料有限：限于水、溶于水的气体，及分子量小，脂溶性、极性小的营养物质。2 2、促进扩散促进扩散(facilitated diffusion)特点：在促进扩散过程中营养物质本

22、身在分子结构上也不会发生变化.不消耗代谢能量，故不能进行逆浓度运输，运输的速率由胞内外该物质的浓度差决定，被运输需要细胞膜上的载体蛋白（透过酶）参与，运输的物质与载体蛋白有高度的特异性，养料浓度过高时,与载体蛋白出现饱和效应 注：促进扩散的运输方式多见于真核微生物中，例如通常在厌氧生活的酵母菌中，某些物质的吸收和代谢产物的分泌是通过这种方式完成的。促进扩散示意图促进扩散示意图胞外胞外细胞膜细胞膜胞内胞内单纯扩散单纯扩散促进扩散促进扩散浓度梯度浓度梯度运输速率运输速率单纯扩散和促进扩散的比较单纯扩散和促进扩散的比较单纯扩散随浓度增加而线性增加，而促进扩散在一定浓度后出现平台单纯扩散随浓度增加而线

23、性增加，而促进扩散在一定浓度后出现平台3、主动运输主动运输(Active transport)特点：物质在主动运输的过程中v 需要消耗代谢能v 可以进行逆浓度运输的运输方式v 需要载体蛋白参与v 对被运输的物质有高度的立体专一性v 被运输的物质在转移的过程中不发生任何化学变化注：不同的微生物在主动运输过程中所需的能量的来源不同，好氧微生物中直接来自呼吸能，厌氧微生物主要来自化学能，光合微生物中则主要来自光能。主动运输是微生物吸收营养物质的主要方式。单单纯纯扩扩散散、促促进进扩扩散散、主主动动运运输输：被被运运输输的的溶溶质质分分子子不不发发生改变。生改变。3、主动运输、主动运输(active

24、transport)特点：特点：运输运输有机离子、无机离子、氨基酸、乳糖等糖类有机离子、无机离子、氨基酸、乳糖等糖类 需要特异性载体蛋白，需要能量来改变载体蛋白的构象需要特异性载体蛋白，需要能量来改变载体蛋白的构象 亲和力改变亲和力改变蛋白构象改变蛋白构象改变耗能耗能 细胞内细胞内细胞外细胞外(或细菌周质空间或细菌周质空间)电电子子转转运运1.电子转移能被用来将质子泵出膜外电子转移能被用来将质子泵出膜外2.质子梯度通过反运输机制将钠离子逐质子梯度通过反运输机制将钠离子逐出膜外出膜外 3.钠离子与载体蛋白复合物相结合钠离子与载体蛋白复合物相结合4.溶质结合位点的形状发生改变，而与溶溶质结合位点的

25、形状发生改变，而与溶质质(如糖和氨基酸如糖和氨基酸)结合结合5.载体蛋白的构象发生改变，钠离子在膜载体蛋白的构象发生改变，钠离子在膜内释放，随后溶质从载体蛋白解离内释放，随后溶质从载体蛋白解离 主动运输的机制：使用质子主动运输的机制：使用质子(H+)和钠离子和钠离子(Na+)梯度梯度。4、基团转位基团转位(Group translocation)基团转位是一种特殊的主动运输，与普通的主动运输相比，营养物质在运输的过程中发生了化学变化（糖在运输的过程中发生了磷酸化）。其余特点与主动运输相同。基团转位主要存在于厌氧和兼性厌氧型细菌中，也主要是用于单（或双）糖与糖的衍生物，以及核苷与脂肪酸的运输。运

26、送机制:是依靠磷酸转移酶系统,即磷酸烯醇式丙酮酸-己糖磷酸转移酶系统.运送步骤:热稳载体蛋白(HPr)的激活 细胞内高能化合物磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）的磷酸基团把HPr激活。酶1 PEP+HPr 丙酮酸+P-HPrHPr是一种低分子量的可溶性蛋白，结合在细胞膜上，具有高能磷酸载体的作用。糖被磷酸化后运入膜内 膜外环境中的糖先与外膜表面的酶2结合，再被转运到内膜表面。这时，糖被P-HPr上的磷酸激活，并通过酶2的作用将糖-磷酸释放到细胞内。酶2 P-HPr+糖 糖-P+HPr酶2是一种结合于细胞膜上的蛋白，它对底物具有特异性选择作用，因此细胞膜上可诱导出一系列与底物分子相应的酶2。特点：特点：

27、v 属主动运输类型属主动运输类型v 溶质分子发生化学修饰溶质分子发生化学修饰 定向磷酸化定向磷酸化v 需复杂的运输酶系参与需复杂的运输酶系参与 v 运输葡萄糖、果糖、甘露糖、嘌呤、核苷、脂肪酸等运输葡萄糖、果糖、甘露糖、嘌呤、核苷、脂肪酸等 4、基团转位、基团转位(group translocation)膜对大多数磷酸化合物具有高度的不渗透性。膜对大多数磷酸化合物具有高度的不渗透性。每输入一个葡萄糖分子，就要消耗一个每输入一个葡萄糖分子，就要消耗一个ATP 的能量。的能量。v主要依赖磷酸烯醇式丙酮酸主要依赖磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)和磷酸转移酶系统和磷酸转移酶系统(PTS)。PEP+HPrEI

28、丙酮酸丙酮酸+P-HPrP-HPr+糖糖EII糖糖-P+HPr1.1.热稳定性载体蛋白热稳定性载体蛋白(heat stable carrier protein,HPr)的激活的激活 2.糖磷酸化后运入膜内糖磷酸化后运入膜内 四种运输营养物质方式的比较比较项目单纯扩散促进扩散主动运输基团转位特异载体蛋白运输速度物质运输方向胞内外浓度运输分子能量消耗运输后物质的结构无慢由浓至稀相等无特异性不需要不变有快由浓至稀相等特异性不需要不变有快由稀至浓胞内浓度高特异性需要不变有快由稀至浓胞内浓度高特异性需要改变三.影响微生物吸收营养的因素o1.细胞内外营养物质的浓度差.o2.营养物质的特征.o (1).分子

29、量的大小o (2).脂溶性与水溶性o (3).化合物是否容易电离o3.细胞膜的通透性.o4.微生物所处的环境.第四节、微生物的营养类型第四节、微生物的营养类型异养型生物自养型生物光能营养型化能营养型生长所需要的营养物质生物生长过程中能量的来源光能自养型：以光为能源，不依赖任何有机物即可正常生长光能异养型：以光为能源，但生长需要一定的有机营养化能自养型：以无机物的氧化获得能量，生长不依赖有机营物化能异养型：以有机物的氧化获得能量，生长依赖于有机营养 物质能以CO2为主要唯一或主要碳源；进行光合作用获取生长所需要的能量；以无机物如H2、H2S、S等作为供氢体或电子供体，使CO2还原为细胞物质；含有

30、光合色素 例如，藻类及蓝细菌等和植物一样，以水为电子供体（供氢体），进行产氧型的光合作用，合成细胞物质。而红硫细菌，以H2S为电子供体，产生细胞物质，并伴随硫元素的产生。一一、光能无机自养型（光能自养型）、光能无机自养型（光能自养型）不能以CO2为主要或唯一的碳源；以有机物作为供氢体，利用光能将CO2还原为细胞物质；在生长时大多数需要外源的生长因子；CHOH+CO2H3CH3C2光能光合色素2 CH3C0CH3+CH2O+H2O二二、光能有机异养型（光能异养型）、光能有机异养型（光能异养型）例如，红螺菌属中的一些细菌能利用异丙醇作为供氢体，将CO2还原成细胞物质，同时积累丙酮。三三、化能有机异

31、养型（化能自养型）、化能有机异养型（化能自养型）以CO2或碳酸盐作为唯一或主要碳源，以无机物氧化释放的化学能为能源,，利用电子供体如氢气、硫化氢、二价铁离子或亚硝酸盐等使CO2还原成细胞物质。这类微生物主要有硫化细菌、硝化细菌、氢细菌与铁细菌。它们在自然界物质转换过程中起着重要的作用。生长所需要的能量均来自有机物氧化过程中放出的化学能；生长所需要的碳源主要是一些有机化合物，如淀粉、糖类、纤维素、有机酸等。大多数细菌、真菌、原生动物都是化能有机异养型微生物；所有致病微生物均为化能有机异养型微生物；四四、化能有机异养型（化能异养型）、化能有机异养型（化能异养型）有机物通常既是碳源也是能源；这类细菌

32、包括硫细菌、硝化细菌、H细菌、铁细菌等，硫细菌和硝化细菌与生产密切相关。可利用无生命的有机物(如动植物尸体和残体)作为碳源；寄生在活的寄主机体内吸取营养物质,离开寄主就不能生存；化能有机异养型（化能异养型）化能有机异养型（化能异养型）腐生型(metatrophy)：寄生型(paratrophy)：在腐生型和寄生型之间还存在中间类型：兼性腐生型(facultive metatrophy)；兼性寄生型(facultive paratrophy)；o异养型微生物并非绝对不能利用CO2；o自养型微生物也并非不能利用有机物进行生长；o有些微生物在不同生长条件下生长时,其营养类型也会发生改变不同营养类型之

33、间的界限并非绝对不同营养类型之间的界限并非绝对：例如紫色非硫细菌(purple nonsulphur bacteria)：没有有机物时，同化CO2，为自养型微生物；有机物存在时，利用有机物进行生长，为异养型微生物；光照和厌氧条件下，利用光能生长，为光能营养型微生物；黑暗与好氧条件下，依靠有机物氧化产生的化学能生长，为化能营养型微生物；o微生物营养类型的可变性无疑有利于提高其对环境条件变化的适应能力营养缺陷型营养缺陷型 某些菌株发生突变(自然突变或人工诱变)后，失去合成某种(或某些)对该菌株生长必不可少的物质(通常是生长因子如氨基酸、维生素)的能力，必须从外界环境获得该物质才能生长繁殖，这种突变

34、型菌株称为营养缺陷型(auxotroph)，相应的野生型菌株称为原养型(prototroph)。注：营养缺陷型菌株经常用来进行微生物遗传学方面的研究。第五节第五节.微生物的培养基微生物的培养基根据微生物的种类按培养基的成分按培养的用途 按培养基的物理状态培养基培养基人工配制的适合微生物生长繁殖或积累人工配制的适合微生物生长繁殖或积累 代谢产物的营养物质代谢产物的营养物质.一一.培养基的类型培养基的类型:(一).按培养基组成物质的化学成分划分天然培养基:利用各种动植物或微生物的原料,其成分难以确切知道.肉汤蛋白胨培养基特点:营养丰富.生长旺盛.来源广泛.配制方便.合成培养基:化学成分和数量完全知

35、道的培养基特点:成分精确.重复性强.价格昂贵.生长缓慢.半合成培养基:在合成培养基中加入某种或几种天然成分;或者在天然培养基中加入一种或几种已知成分的化学药品.液体培养基 固体培养基 半固体培养基 (二二).).按培养基的物理状态划分按培养基的物理状态划分液体培养基:不加凝固剂的培养基，营养物质分布均匀，微生物能与营养物质充分接触，利用适合积累代谢产物。多用于生理研究和发酵工业生产中。另外，病毒与立克氏体，衣原体是专性寄生微生物，常用鸡胚培养法和动物培养法进行培养。固体培养基:在液体培养基中加入适量的凝固剂琼脂固体培养基 明胶培养基硅胶固体培养基天然固体基质琼脂固体培养基：琼脂是由红藻门石花菜

36、江蓠等藻类 地区中提取 的胶体多糖。琼脂的化学成分为多聚半乳糖硫酸上下酯，熔点 96，凝固点是4050。琼脂培养基可反复溶化凝固而不改变性质。绝大多数微生物不水解琼脂。o半固体培养基:少量的凝固剂加入到液体培o 养基中.o进行微生物的动力学观察.(三).按培养基的营养成分是否完全划分培养基的营养成分是否完全划分o基本培养基o完全培养基o补充培养基 增殖培养基 选择菌培养基 鉴别培养基 (四四).).按培养基的用途划分按培养基的用途划分 种子培养基 发酵培养基 (五五).).按培养基用于生产的目的划分按培养基用于生产的目的划分二二.设计培养基的原则设计培养基的原则定义：应科研或生产的需要，由人工

37、配制的、适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物用的营养基质（混合养料）。特点：任何培养基都应具备微生物所需要的五大营养要素，且应比例适当。所以一旦配成必须立即灭菌。用途：促使微生物生长；积累代谢产物；分离微生物菌种；鉴定微生物种类；微生物细胞计数；菌种保藏；制备微生物制品。（一）培养基组分应适合微生物的营养特点（目的明确）（二）营养物的浓度与比例应恰当（营养协调）（三）物理化学条件适宜（条件适宜）（四）根据培养目的选择原料及其来源（经济节约）在微生物学研究和生长实践中，配置合适的培养基是一项最基本的要求。（一）培养基组分应适合微生物的营养特点 即根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。不同营

38、养类型的微生物，其对营养物的需求差异很大。如自养型微生物的培养基完全可以（或应该）由简单的无机物质组成。异养微生物的培养基至少需要含有一种有机物质，但有机物的种类需适应所培养菌的特点。按微生物的主要类群来说，它们所需要的培养基成分也不同：细菌：牛肉膏蛋白胨培养基 LB (Luria-Bertani)放线菌：高氏一号培养基 真菌：查氏合成培养基 PDA(Potato-Dextrose-Agar)酵母菌；麦芽汁 当对试验菌营养需求特点不清楚的时候，可以采用生长谱法进行测定。（二）营养物的浓度与比例应恰当浓度过高微生物的生长起抑制作用，浓度过小不能满足微生物生长的需要。碳氮比（C/N）直接影响微生物

39、生长与繁殖及代谢物的形成与积累，故常作为考察培养基组成时的一个重要指标；碳源中的碳原子的mol数氮源中的氮原子的mol数C/N比值=速效性氮（或碳）源与迟效性氮（或碳）源的比例各种金属离子间的比例（三）物理化学条件适宜（1）pH:各类微生物的最适生长pH值各不相同：细 菌：7.08.0放线菌：7.58.5 酵母菌：3.86.0霉 菌：4.05.8 在微生物的生长和代谢过程中，由于营养物质的利用和代谢产物的形成与积累，培养基的初始pH值会发生改变，为了维持培养基pH值的相对恒定，通常采用下列两种方式：内源调节：在培养基里加一些缓冲剂或不溶性的碳酸盐；调节培养基的碳氮比。外源调节：按实际需要不断向

40、发酵液流加酸或碱液（2）渗透压渗透压等渗溶液适宜微生物生长高渗溶液细胞发生质壁分离低渗溶液细胞吸水膨胀，直至破裂 大多数微生物适合在等渗的环境下生长，而有的菌如Staphylococcus aureus则能在3mol/L NaCl的高渗溶液中生长。能在高盐环境（2.86.2/L NaCl）生长的微生物常被称为嗜盐微生物（Halophiles）。（3）氧化还原电势 各种微生物对培养基的氧化还原电势的要求：好氧微生物：+0.3+0.4V,(在0.1V以上的环境中均能生长)。厌氧微生物：只能在+0.1V以下生长兼性厌氧微生物：+0.1V以上呼吸、+0.1V以下发酵 培养基是多氧化还原偶的复杂电化学系

41、统，测出的Eh值仅代表其综合结果。对微生物影响最大的是：分子氧和分子氢的浓度 培养基中常用的还原剂：巯基乙酸、抗坏血酸、硫化氢、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫苏糖醇等。（四）根据培养基的应用目的选择原料及其来源用于培养菌体种子的培养基营养应丰富，氮源含量宜高（碳氮比低）；用于大量生产代谢产物的培养基其氮源一般应比种子培养基稍低，（但若发酵产物是含氮化合物时，有时还应提高培养基的氮源含量）；若代谢产物是次级代谢产物时要考虑是否加入特殊元素或特定的代谢产物；当所设计的是大规模发酵用的培养基时，应重视培养基中各成份的来源和价格，应选择来源广泛、价格低廉 的原料，提倡以粗代精，以废代好。三、设计培养基的方法三、设计培养基的方法实验比较：不同培养基配方的选择比较 单种成分来源和数量的比较 几种成分浓度比例调配的比较 小型试验放大到大型生产条件的比较 pH和温度试验调查研究调查研究四.配制培养基的步骤o1.计算称量o2.加水溶解o3.调节PHo4.过滤分装o5.放塞包扎o6.加压灭菌培养基的灭菌高压蒸气灭菌：一般培养基:1.05 Kg/cm2,121.3,15-30 min 含糖培养基:0.56 Kg/cm2,112.6,15-30 min 过滤灭菌,分别灭菌,间歇灭菌的应用器皿的灭菌及无菌室的消毒器皿的灭菌：干热空气：160，2 小时无菌室的消毒：紫外光 化学药物熏蒸（苯酚；高锰酸钾+甲醛）