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1、第八章第八章 体液蛋白质检验体液蛋白质检验人人类白蛋白分子类白蛋白分子 n本章内容概要：本章内容概要：第二节第二节 体液蛋白质测定体液蛋白质测定第一节第一节 概述概述第一节第一节 概概 述述p机体蛋白质机体蛋白质：p体液蛋白质的检测：体液蛋白质的检测：机体主要的机体主要的生物大分子生物大分子含量：人体固体成分的含量：人体固体成分的45%种类：种类：10万，万，30005000种种/单细胞单细胞功能：生长，代谢、血凝、运动、免功能：生长，代谢、血凝、运动、免疫、信息传递等疫、信息传递等疾病发生疾病发生体液蛋白质体液蛋白质异常异常一、血浆蛋白质的功能和分类一、血浆蛋白质的功能和分类蛋白质（蛋白质（
2、protein)：是人体内含量和种类最：是人体内含量和种类最多的物质。有多的物质。有10万多种。万多种。血浆蛋白质（血浆蛋白质（plasmaprotein):血浆中含量血浆中含量最多的成分。有最多的成分。有1000多种。多种。目前已研究的不下500种，其中已分离出纯品的有200多种。（一）蛋白质概述：（一）蛋白质概述：研究进展领域：研究进展领域：生物化学家：分离纯化各种组分。研究其物理生物化学家：分离纯化各种组分。研究其物理性质、氨基酸的组成及其顺序，以及某些蛋白质性质、氨基酸的组成及其顺序，以及某些蛋白质中结合的中结合的糖、脂类、金属化合物、活性多肽、类糖、脂类、金属化合物、活性多肽、类固醇
3、激素等，研究其合成、降解、转换更新与代固醇激素等，研究其合成、降解、转换更新与代谢调节的研究。谢调节的研究。生理学家与病理生理学家；注重蛋白质的生理生理学家与病理生理学家；注重蛋白质的生理功能，研究其胶体性质、缓冲性质和生理作用，功能，研究其胶体性质、缓冲性质和生理作用，运输、结合功能等。运输、结合功能等。血浆蛋白质血浆蛋白质具有遗传的变异：如具有遗传的变异：如Hp、TFP等在不等在不同的人群中常见有结构上的差异，以及某些蛋白质同的人群中常见有结构上的差异，以及某些蛋白质的缺乏表现出一定的临床症状，具有临床意义；遗的缺乏表现出一定的临床症状，具有临床意义；遗传学家利用蛋白质结构上的差异作为研究
4、人群与家传学家利用蛋白质结构上的差异作为研究人群与家族遗传特征的标志。族遗传特征的标志。临床生化检验中，微量蛋白质的检测及其技术的临床生化检验中，微量蛋白质的检测及其技术的进展，用于诊断各种恶性肿瘤或各种病理变化过程进展，用于诊断各种恶性肿瘤或各种病理变化过程等。等。在进化与个体发育的生物化学研究中，已发现有在进化与个体发育的生物化学研究中，已发现有不少正常胎儿时期的蛋白质可以在恶性肿瘤病人中不少正常胎儿时期的蛋白质可以在恶性肿瘤病人中重新出现，如甲胎蛋白。血浆蛋白质合成的调控，重新出现，如甲胎蛋白。血浆蛋白质合成的调控，如如APR的表达与释放，在临床医学中长期受注意而的表达与释放，在临床医学
5、中长期受注意而又未完全解决的课题，它与限制炎症过程密切相关。又未完全解决的课题，它与限制炎症过程密切相关。血浆蛋白质广泛应用于组织和细胞的培血浆蛋白质广泛应用于组织和细胞的培养，血浆中含有各总细胞刺激因子和抑制养，血浆中含有各总细胞刺激因子和抑制因子，它们对稀薄啊的活力、增殖、分化、因子，它们对稀薄啊的活力、增殖、分化、胞内酶的合成及细胞特殊功能起者特殊的胞内酶的合成及细胞特殊功能起者特殊的作用。作用。在人类不少疾病，包括两种常见的疾病在人类不少疾病，包括两种常见的疾病动脉粥样硬化及肿瘤的发病学研究，动脉粥样硬化及肿瘤的发病学研究，以及最常见的糖尿病及其并发症的发病机以及最常见的糖尿病及其并发
6、症的发病机制中，血浆蛋白质均有广泛涉及。制中，血浆蛋白质均有广泛涉及。（二）血浆蛋白质的分类（二）血浆蛋白质的分类1.电泳分类法电泳分类法2.功能分类法功能分类法1、电泳法：（醋纤膜电泳）、电泳法：（醋纤膜电泳）正常人血清的区带电泳结果和扫描图像正常人血清的区带电泳结果和扫描图像从左至右的从左至右的5个区带依次为白蛋白及个区带依次为白蛋白及1、2、和和球球蛋白区。有时在慢电泳时蛋白区。有时在慢电泳时球蛋白可分为球蛋白可分为1球蛋白和球蛋白和2球球蛋白。蛋白。白蛋白区的成分包括白蛋白、前白蛋白和部分白蛋白区的成分包括白蛋白、前白蛋白和部分1脂蛋白脂蛋白;1区包括区包括1抗胰酶蛋白、抗胰酶蛋白、1
7、脂蛋白、脂蛋白、c球蛋白球蛋白;2区包括触珠蛋白、铜蓝蛋白、区包括触珠蛋白、铜蓝蛋白、2巨球蛋白等巨球蛋白等;1区包括转铁蛋白、补体区包括转铁蛋白、补体3、C4等等;2区包括区包括3、2微球蛋白、微球蛋白、Fb;区包括区包括IgA、Ig、Ig、CRP等。等。正常血清蛋白电泳（正常血清蛋白电泳（serumproteinelectrophoresis,SPE)正常参考值：正常参考值：Alb:57%-68%1:1.0%-5.7%2:4.9%-11.2%:7%-13%:9.8%-18.2%2.功能分类法功能分类法运输载体类运输载体类补体蛋白类补体蛋白类血清酶类血清酶类血浆蛋白质血浆蛋白质蛋白酶抑制物蛋
8、白酶抑制物免疫球蛋白免疫球蛋白凝血蛋白类凝血蛋白类蛋白类激素蛋白类激素运输载体类运输载体类:血浆脂蛋白血浆脂蛋白前清蛋白和清蛋白前清蛋白和清蛋白甲状腺素结合球蛋白甲状腺素结合球蛋白皮质素结合球蛋白皮质素结合球蛋白视黄醇结合蛋白转铁蛋白视黄醇结合蛋白转铁蛋白结合珠蛋白结合珠蛋白血色素结合蛋白血色素结合蛋白铜蓝蛋白铜蓝蛋白补体蛋白类补体蛋白类补体蛋白补体蛋白CB因子因子D因子因子备解素备解素P因子又称备解素（因子又称备解素（properdin），是替代途径中除），是替代途径中除C3以外以外最先发现的一种血浆蛋白。现已探明，最先发现的一种血浆蛋白。现已探明，P因子以聚合体形式因子以聚合体形式而存在：
9、即三聚体（而存在：即三聚体（54%）、二聚体（）、二聚体（26%）和四聚体）和四聚体（20%）都有，但特异活性的顺序依次为：四聚体）都有，但特异活性的顺序依次为：四聚体三聚体三聚体二聚体。二聚体。P因子为由因子为由4条相同的肽链（分子量各条相同的肽链（分子量各55kDa）组成）组成的四聚体分子，链间以非共价键相连接，分子量为的四聚体分子，链间以非共价键相连接，分子量为220kDa。P因子的生物学活性是以高亲和力与因子的生物学活性是以高亲和力与c3bBb和和C3bnBb相结相结合，结合后通过发生构象改变而加固合，结合后通过发生构象改变而加固C3b与与Bb间的结合力，间的结合力，从而可使其半衰期由
10、从而可使其半衰期由2分钟延长至分钟延长至26分钟。另外，分钟。另外，P因子还因子还可封闭可封闭H因子的抑制作用，更增加了上述两种酶的稳定性及因子的抑制作用，更增加了上述两种酶的稳定性及活性，有利于促进替代途径级联反应的继续进行。因此，活性，有利于促进替代途径级联反应的继续进行。因此，P因子实际上是替代途径中的一个重要的正调节分子。因其常因子实际上是替代途径中的一个重要的正调节分子。因其常成为成为c3bBb和和C3bnBb复合物中的组成成分之一，故将其作复合物中的组成成分之一，故将其作为补体系统的固有成分在此一并描述。此外，在膜增生性肾为补体系统的固有成分在此一并描述。此外，在膜增生性肾小球肾炎
11、病人血清中发现有一种小球肾炎病人血清中发现有一种C3肾炎因子（肾炎因子（C3nephriticfactor,C3NeF）实际为）实际为C3bBb的自身抗体，也可与的自身抗体，也可与C3bBb结合而增加结合而增加c3bnBb的稳定性，使其半衰期处长的稳定性，使其半衰期处长10-30倍。倍。凝血蛋白类凝血蛋白类:14个凝血因子中的个凝血因子中的13个均为蛋白质。个均为蛋白质。免疫球蛋白免疫球蛋白:IgG、IgA、IgM、IgD、IgE蛋白酶抑制物蛋白酶抑制物A1-抗胰蛋白酶（抗胰蛋白酶（a1-AT）A1-抗糜蛋白酶（抗糜蛋白酶（a1-ACT)A2-巨球蛋白（巨球蛋白（a2-MG)血清酶类血清酶类:
12、血浆固有酶血浆固有酶LCAT、脂蛋白酯酶、凝血酶原、脂蛋白酯酶、凝血酶原、纤溶酶等纤溶酶等蛋白类激素蛋白类激素胰岛素、胰高血糖素、生长素等胰岛素、胰高血糖素、生长素等3、血浆蛋白质的功能：、血浆蛋白质的功能：营养：其中的氨基酸营养：其中的氨基酸缓冲与胶体渗透压：维持血液渗透压缓冲与胶体渗透压：维持血液渗透压运输：类固醇、甲状腺激素、维生素运输：类固醇、甲状腺激素、维生素A、D、脂、脂类、金属、微量元素、药物等；类、金属、微量元素、药物等；免疫与防疫功能：免疫球蛋白、补体免疫与防疫功能：免疫球蛋白、补体凝血与纤溶凝血与纤溶酶的特殊功能酶的特殊功能代谢调控代谢调控（三）影响血浆蛋白质浓度的因素（三
13、）影响血浆蛋白质浓度的因素1、关于血浆蛋白质的正常参考值、关于血浆蛋白质的正常参考值A、年龄组的差异、年龄组的差异AFP、AGM、a1AT浓度在新生儿期显著高于成人；浓度在新生儿期显著高于成人；AlbFibIgG与成人接近。其他成分特别是与成人接近。其他成分特别是IgMIgA及及C3、C4补体成分均偏低。补体成分均偏低。对对895岁的年龄组分布调查有以下几个特征岁的年龄组分布调查有以下几个特征Alb在在50岁以前保持恒定，岁以前保持恒定，50岁以后有下降趋势；岁以后有下降趋势；AA天灾男天灾男30岁、女岁、女40后有上升趋势；后有上升趋势；a1脂蛋白、脂蛋白、AAT40后有上升趋势；后有上升趋
14、势；Hp随年龄增加而增加；随年龄增加而增加；AGM在在40岁以前随年龄增加而下降，到年老时岁以前随年龄增加而下降，到年老时由有上升。由有上升。B、关于性别差异、关于性别差异男性成人略高于女性的有：男性成人略高于女性的有：Alb、AAT、IgA等等女性略高于男性成人的有：女性略高于男性成人的有：CER、AGM、a1脂蛋白等；在妊娠期明显增高的有：脂蛋白等；在妊娠期明显增高的有：CER、TRF等。等。C、个体不同时期的差异及个体间的差异、个体不同时期的差异及个体间的差异五种血浆蛋白在个体内与人群间的差异五种血浆蛋白在个体内与人群间的差异血浆蛋白血浆蛋白个体内不同时间的变异（个体内不同时间的变异（C
15、V%）不同个体间的变异不同个体间的变异（CV%）结合珠蛋白结合珠蛋白9.5711-酸性糖蛋白酸性糖蛋白1142转铁蛋白转铁蛋白2.591-抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶3162-巨球蛋白巨球蛋白3172、急性时相反应蛋白（、急性时相反应蛋白（acutephasereactants,APR)概念：在炎症、创伤、心肌梗塞、感染、概念：在炎症、创伤、心肌梗塞、感染、肿瘤等情况下血浆中浓度显著上升或降低肿瘤等情况下血浆中浓度显著上升或降低的蛋白质。的蛋白质。升高的有：升高的有：AAT、AAG、CER、C3、C4、CRP、Flb、hP等等降低的有：降低的有：PA、Alb及及TRF，称为负性，称为负性APR。3、类
16、固醇激素二、血清蛋白质电泳组分的临床分析1、正常血清蛋白电泳（、正常血清蛋白电泳（serumproteinelectrophoresis,SPE)正常参考值：正常参考值：Alb:57%-68%1:1.0%-5.7%2:4.9%-11.2%:7%-13%:9.8%-18.2%方法：琼脂凝胶电泳方法：琼脂凝胶电泳染料：氨基黑染料：氨基黑正常血清蛋白电泳图正常血清蛋白电泳图2、异常血清蛋白电泳（1）双白蛋白血症型：主要特征：在白蛋白部位有两个区带，光密度计扫描出现双峰，呈剪刀状。产生原因：双白蛋白血症分为持久型和暂时型两种。持久型主要是一种家族性血清蛋白异常的疾病，极少见，为常染色体不完全显性遗传；
17、而暂时型主要是指肾功能不全的患者在治疗期间使用大剂量的-内酰胺类抗生素，可形成快泳动性的白蛋白成分，治疗中断即逐渐消失。（2）先天性白蛋白缺陷型：主要特）先天性白蛋白缺陷型：主要特征：由于血清白蛋白的显著降低，征：由于血清白蛋白的显著降低，血清总蛋白也随之降血清总蛋白也随之降低，低，1、2球球蛋白明显增高，蛋白明显增高，球蛋白也增高。球蛋白也增高。严严重无白蛋白血症时，白蛋白有时可重无白蛋白血症时，白蛋白有时可降为零。降为零。产生原因：本病是极少见的先天性产生原因：本病是极少见的先天性疾病，可能由于肝细胞内白疾病，可能由于肝细胞内白蛋白合蛋白合成功能遗传性缺陷或明显低下所致。成功能遗传性缺陷或
18、明显低下所致。该病患该病患者的白蛋白含量尽管只有正者的白蛋白含量尽管只有正常人的常人的0.05%，而其血而其血浆胶渗透压浆胶渗透压仍为正常人水平的仍为正常人水平的1/2左右，左右，这是这是由于球蛋白代偿性增加所致，如传由于球蛋白代偿性增加所致，如传铁蛋白为正常人的铁蛋白为正常人的2-3倍，倍，1巨球巨球蛋白为正常人的倍，蛋白为正常人的倍，脂蛋白为脂蛋白为3倍，倍，IgM为为3倍，这时血清白蛋白的半衰倍，这时血清白蛋白的半衰期也明显延长，期也明显延长，可为正常人的可为正常人的3-4倍，倍，对维持血浆胶体渗透压对维持血浆胶体渗透压均有一定作均有一定作用。用。（3）低白蛋白血症型：）低白蛋白血症型：
19、主要特征：血清总蛋白主要特征：血清总蛋白浓度明显减低，其中以白浓度明显减低，其中以白蛋白减低为主。蛋白减低为主。产生原因：由于合成蛋产生原因：由于合成蛋白质所需的氨基酸长期供白质所需的氨基酸长期供应不足，以致应不足，以致血清中的主血清中的主要成分白蛋白合成减少。要成分白蛋白合成减少。常见于慢性营常见于慢性营养失调、肝养失调、肝硬化、肝炎、肾炎、肾病硬化、肝炎、肾炎、肾病综合症、大面综合症、大面积烧伤或内积烧伤或内分泌紊乱、垂体病等。分泌紊乱、垂体病等。检查结果：Alb44.2%()；14.6%(N)；214.6%()18.3%()；18.3%(N)；慢性肾炎患者。（4）1球蛋白缺陷型：球蛋白缺
20、陷型：主要特征：主要特征：1球蛋白明显降低，有球蛋白明显降低，有时可接近零，血清总蛋白及时可接近零，血清总蛋白及其它各其它各组分的蛋白通常没有明显变化。组分的蛋白通常没有明显变化。产生原因：此病通常认为是先天产生原因：此病通常认为是先天性或家族性的，系由于性或家族性的，系由于1抗胰抗胰蛋白蛋白酶合成低下所致。因为血中酶合成低下所致。因为血中1抗胰抗胰蛋白酶减少蛋白酶减少或缺乏，致使血中或组或缺乏，致使血中或组织中的胰蛋白酶活性相对增织中的胰蛋白酶活性相对增加，肺加，肺结缔组织破坏亢进，对青年可以发结缔组织破坏亢进，对青年可以发生肺气肿生肺气肿，当合并感染时，可见白，当合并感染时，可见白蛋白减低
21、，但由于蛋白减低，但由于1抗胰抗胰蛋白酶减蛋白酶减少，即使有炎性病灶，少，即使有炎性病灶，1区带也不区带也不增加。增加。（5）.2球蛋白缺陷型：主要球蛋白缺陷型：主要特征：特征：2球蛋白带有时可轻度减低，球蛋白带有时可轻度减低，其它组分多正常。其它组分多正常。产生原因：在此区带出现缺产生原因：在此区带出现缺陷的主要有结合珠蛋白、血浆陷的主要有结合珠蛋白、血浆铜蓝蛋白，分别称无结合珠蛋铜蓝蛋白，分别称无结合珠蛋白血症和铜蓝蛋白血症和铜蓝蛋白缺乏症。前白缺乏症。前者极少见，没有特别症状，有者极少见，没有特别症状，有时时可伴有轻度贫血。铜蓝蛋白缺可伴有轻度贫血。铜蓝蛋白缺陷已知有陷已知有Willso
22、n氏病，特别氏病，特别在肝、脑和角膜较多。在肝、脑和角膜较多。3、r球蛋白增多与球蛋白增多与M蛋白蛋白正常正常SPE中中球蛋白区带：球蛋白区带：IgG；IgM；IgA；IgD；IgEM蛋白是浆细胞或蛋白是浆细胞或B淋巴细胞单克隆恶性增淋巴细胞单克隆恶性增殖所产生的一种大量的异常免疫球蛋白，殖所产生的一种大量的异常免疫球蛋白，因其多见于多发性骨髓瘤因其多见于多发性骨髓瘤(multiplemyeloma)、巨球蛋白血症、巨球蛋白血症(macroglobulinemia)及恶性淋巴瘤及恶性淋巴瘤(malignantlymphoma)，都是以，都是以M开头开头的疾病，故称为的疾病，故称为“M蛋白蛋白”
23、。特点是区带窄而浓特点是区带窄而浓,扫描峰高而尖扫描峰高而尖,基底部基底部窄窄,在在区高与宽的比例区高与宽的比例2,区则区则1(正常时正常时小于此比例小于此比例),其他区带明显减少。其他区带明显减少。三、血浆蛋白质种类及其异常三、血浆蛋白质种类及其异常1、前白蛋白（、前白蛋白（prealbumin,PA）：分子量万，由）：分子量万，由肝细胞合成。在电泳中移速比白蛋白快而得名。肝细胞合成。在电泳中移速比白蛋白快而得名。功能：功能：营养营养半衰期半衰期12小时；小时；运载运载结合结合T3、T4、结合维生素、结合维生素A。意义：测定其在血浆中的浓度对于了解蛋白质意义：测定其在血浆中的浓度对于了解蛋白
24、质的营养不良和肝功能不全，比白蛋白和的营养不良和肝功能不全，比白蛋白和TFR具有具有更高的敏感性，在急性炎症、恶性肿瘤、肝硬化更高的敏感性，在急性炎症、恶性肿瘤、肝硬化或肾炎时其浓度下降。或肾炎时其浓度下降。2、白蛋白（、白蛋白（aibumin,Alb)：由肝实质细胞合成，半衰期：由肝实质细胞合成，半衰期1519天，含量最多的蛋白质，占天，含量最多的蛋白质，占40%60%。在肝细胞。在肝细胞中没有贮存。中没有贮存。分子结构分子结构1975年阐明，含年阐明，含585个氨基酸残基的单链多个氨基酸残基的单链多肽，分子量肽，分子量66458，含，含17个二硫键（个二硫键（SS），不含糖），不含糖的组分
25、。的组分。功能功能运载：胆红素、长链脂肪酸、胆汁酸盐、前列腺素、类运载：胆红素、长链脂肪酸、胆汁酸盐、前列腺素、类固醇激素、金属离子（铜、镍、钙等）；固醇激素、金属离子（铜、镍、钙等）；营养：内源性氨基酸营养：内源性氨基酸维持血浆蛋白质胶体渗透压、缓冲酸碱作用。维持血浆蛋白质胶体渗透压、缓冲酸碱作用。血液中血液中80的渗透压是由白蛋白承担的。的渗透压是由白蛋白承担的。临床意义临床意义可以作为个体营养状态的评价指标可以作为个体营养状态的评价指标血浆白蛋白明显减少时，可以影响许多血浆白蛋白明显减少时，可以影响许多配体在循环血液中的存在形式；配体在循环血液中的存在形式；白蛋白增高较少见，在严重失水时
26、，对白蛋白增高较少见，在严重失水时，对监测血浓缩有诊断意义；监测血浓缩有诊断意义；白蛋白减少在不少疾病时常见：白蛋白的合成减少白蛋白减少在不少疾病时常见：白蛋白的合成减少急性或慢性肝炎；营养不连或吸收不良；遗传性缺陷急性或慢性肝炎；营养不连或吸收不良；遗传性缺陷无白蛋白血症是一种极少见的代谢性缺损，血浆白蛋白含无白蛋白血症是一种极少见的代谢性缺损，血浆白蛋白含量常低于量常低于1g/L，但可以没有症状（如水肿等），可能部分，但可以没有症状（如水肿等），可能部分由于血浆中球蛋白含量代偿性升高；组织损伤（外科手术由于血浆中球蛋白含量代偿性升高；组织损伤（外科手术或创伤）或炎症（感染性疾病）引起的白蛋
27、白分解代谢增或创伤）或炎症（感染性疾病）引起的白蛋白分解代谢增加；白蛋白的异常丢失加；白蛋白的异常丢失肾病综合症、慢性肾小球肾炎、肾病综合症、慢性肾小球肾炎、糖尿病、糖尿病、SLE等尿中白蛋白损失，烧伤及渗出性皮炎可以等尿中白蛋白损失，烧伤及渗出性皮炎可以从皮肤丧失大量蛋白质；白蛋白的分布异常从皮肤丧失大量蛋白质；白蛋白的分布异常门静脉高门静脉高压引起腹水中有大量蛋白质。是从血管内渗漏入腹腔。压引起腹水中有大量蛋白质。是从血管内渗漏入腹腔。白蛋白的遗传变异：已发现白蛋白的遗传变异：已发现20多中种。多中种。3、a1酸性糖蛋白（酸性糖蛋白（AAG）：）：分子量近分子量近4万，含糖约万，含糖约45
28、%，pI为，包括等分子的已糖、已为，包括等分子的已糖、已糖胺和唾液酸。糖胺和唾液酸。AAG是主要的急性时相反是主要的急性时相反应蛋白，在急性炎症时增高，应蛋白，在急性炎症时增高，显然与免疫防御功能有关明。显然与免疫防御功能有关明。早期工作认为肝是合成早期工作认为肝是合成1-糖糖蛋白的唯一器官，近年有证据蛋白的唯一器官，近年有证据认为某些肿瘤组织亦可以合成认为某些肿瘤组织亦可以合成。4、a1抗胰蛋白酶（抗胰蛋白酶（AAT）：）：是具有蛋白酶抑制作用的一种急性时相反应蛋白，分子量是具有蛋白酶抑制作用的一种急性时相反应蛋白，分子量为万，为万，P1值，含有值，含有10%-12%糖。在醋酸纤维薄膜或琼脂
29、糖。在醋酸纤维薄膜或琼脂糖电泳中泳动于糖电泳中泳动于1区带，是这一区带的主要组分。区带中区带，是这一区带的主要组分。区带中的另的另2个主要组分；个主要组分；1-酸性糖蛋白含糖量特别高，酸性糖蛋白含糖量特别高，1-脂脂蛋白含脂类特别高，因此蛋白质的染色都很浅。蛋白含脂类特别高，因此蛋白质的染色都很浅。作为蛋白酶的抑制物，它不仅作用于胰蛋白酶，同时也作作为蛋白酶的抑制物，它不仅作用于胰蛋白酶，同时也作用于糜蛋白酶、尿激酶、肾素、胶原酶、弹性蛋白酶、纤用于糜蛋白酶、尿激酶、肾素、胶原酶、弹性蛋白酶、纤溶酶和凝血酶等。溶酶和凝血酶等。AAT占血清中抑制蛋白酶活力的占血清中抑制蛋白酶活力的90%左左右。
30、右。AAT的抑制作用有明显的的抑制作用有明显的pH依赖性，最大活力处于依赖性，最大活力处于中性和弱碱性，当时活性基本丧失，这一特点具有重要的中性和弱碱性，当时活性基本丧失，这一特点具有重要的生理意义。生理意义。AAT具有多种遗传分型，利用不同具有多种遗传分型，利用不同pH的缓冲剂和的缓冲剂和电泳支持物，迄今已分离鉴定有电泳支持物，迄今已分离鉴定有33种等位基因种等位基因（allotypes），其中最多见的是），其中最多见的是PiMM型（为型（为M型蛋白抑制物的纯合子体）占人群的型蛋白抑制物的纯合子体）占人群的90%以上，以上，另外还有两种蛋白称为另外还有两种蛋白称为Z型和型和S型，可表现为以下
31、型，可表现为以下遗传分型：遗传分型：PiZZ、PiSS、PiSZ、PiMZ、PiMS，S型蛋白与型蛋白与M蛋白之间的氨基酸残基仅有一个差异。蛋白之间的氨基酸残基仅有一个差异。对蛋白酶的抑制作用主要限于血循环中对蛋白酶的抑制作用主要限于血循环中M型蛋白型蛋白的浓度。以的浓度。以MM型的蛋白酶抑制能力为型的蛋白酶抑制能力为100%相比，相比，ZZ型的相对活力仅为型的相对活力仅为15%、SS为为60%、MZ为为57%、MS为为80%，其它则无活性。，其它则无活性。5、甲胎蛋白（、甲胎蛋白（-fetoprotein,FP或或AFP）主要在胎儿肝中合成，分子量万，在胎儿主要在胎儿肝中合成，分子量万，在胎
32、儿13周周AFP占血浆蛋白总量的占血浆蛋白总量的1/3。在妊娠。在妊娠30周达最高峰，以后逐渐下降，出生时血浆周达最高峰，以后逐渐下降，出生时血浆中浓度为高峰期的中浓度为高峰期的1%左右，约左右，约40mg/L，在，在周岁时接近成人水平（低于周岁时接近成人水平（低于30mg/L）。）。甲胎蛋白在产妇羊水或母体血浆中甲胎蛋白在产妇羊水或母体血浆中AFP可用于胎儿产前监测。如在可用于胎儿产前监测。如在神经管神经管缺损、缺损、脊柱脊柱裂、无脑儿等时，裂、无脑儿等时，AFP可由开放的神可由开放的神经管进入羊水而导致其在羊水中含量显著经管进入羊水而导致其在羊水中含量显著升高。胎儿在宫腔内死亡、畸胎瘤等先
33、天升高。胎儿在宫腔内死亡、畸胎瘤等先天缺陷亦可有羊水中缺陷亦可有羊水中AFP增高。增高。AFP可经羊可经羊水部分进入母体血循环。在水部分进入母体血循环。在85%脊柱裂及脊柱裂及无脑儿的母体，血浆无脑儿的母体，血浆AFP在妊娠在妊娠16-18周可周可见升高而有诊断价值，但必须与临床经验见升高而有诊断价值，但必须与临床经验结合，以免出现假阳性的错误。结合，以免出现假阳性的错误。6、结合珠蛋白（、结合珠蛋白（haptoglobin，hp）：触）：触珠蛋白珠蛋白是人血清中能与游离血红蛋白（是人血清中能与游离血红蛋白（hb）在血）在血浆中与游离的血红蛋白结合，是一种急性浆中与游离的血红蛋白结合，是一种急
34、性时相反应蛋白。在时相反应蛋白。在CAM电泳及琼脂糖凝胶电泳及琼脂糖凝胶电泳中位于电泳中位于2区带。分子中有两对肽链（区带。分子中有两对肽链（与与链）形成链）形成22四聚体。四聚体。链有链有1及及2两两种。种。7、a2巨球蛋白（巨球蛋白（a2Macroglobulin，a2MG）是溶纤维蛋白酶、凝血酶、胰蛋白酶、糜是溶纤维蛋白酶、凝血酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶和禅性蛋白酶等多种蛋白水解酶的蛋白酶和禅性蛋白酶等多种蛋白水解酶的抑制剂，是存在于血液中的具有重要生物抑制剂，是存在于血液中的具有重要生物活性的大分子的糖蛋白，分子量活性的大分子的糖蛋白，分子量725000，由肝脏的淋巴细胞、单核细胞及纤维母
35、细由肝脏的淋巴细胞、单核细胞及纤维母细胞合成和释放，对血中内源性、外源性蛋胞合成和释放，对血中内源性、外源性蛋白水解酶有清除作用。白水解酶有清除作用。8、铜蓝蛋白（、铜蓝蛋白（ceruloplasmin,CER）是一种含铜的是一种含铜的2糖蛋白，分子量约为糖蛋白，分子量约为12万万-16万，不易纯化。目前所知为一个单链多万，不易纯化。目前所知为一个单链多肽，每分子含肽，每分子含6-7个铜原子，由于含铜而呈个铜原子，由于含铜而呈蓝色，含糖约蓝色，含糖约10%，末端唾液酸与多肽链，末端唾液酸与多肽链连接，具有遗传上的基因多形性。连接，具有遗传上的基因多形性。CER具有氧化酶的活性，对多酚及多具有氧
36、化酶的活性，对多酚及多胺类底物有催化其氧化的能力。最近研究胺类底物有催化其氧化的能力。最近研究认为认为CER可催化可催化Fe2+氧化为氧化为Fe3+。9、转铁蛋白:（transferrin，TRF，siderophilin）是血浆中主要的含铁蛋白质，负责运载由消化管吸收的铁和由红细胞降解释放的铁。以TRF-Fe3+的复合物形式进入骨髓中，供成熟红细胞的生成。TRF分子量约万，为单链糖蛋白，含糖量约6%。TRF可逆地结合多价离子，包括铁、铜、锌、钴等。每一分子TRF可结合两个三价铁原子。TRF主要由肝细胞合成，半寿期为7天。血浆中TRF的浓度受铁供应的调节，在缺铁状态时，血浆TRF浓度上升，经铁
37、有效治疗后恢复到正常水平。10、10、C反应蛋白（反应蛋白（Creactiveprotein,CRP)CRP由由肝细胞肝细胞所合成。所合成。CRP含含5个多肽链个多肽链亚单位亚单位，非共价地结，非共价地结合为盘形合为盘形多聚体多聚体。分子量为万。分子量为万-14万。电泳万。电泳分布在慢分布在慢区带，有时可以延伸到区带，有时可以延伸到区带。区带。其电泳迁移率易受一些因素影响，如钙离其电泳迁移率易受一些因素影响，如钙离子及缓冲液的成分。子及缓冲液的成分。临床意义：临床意义：CRP作为急性时相蛋白在各种急性炎症、组织损伤、作为急性时相蛋白在各种急性炎症、组织损伤、心肌梗塞、手术创伤、放射性损伤等疾病
38、发作后数小时迅速心肌梗塞、手术创伤、放射性损伤等疾病发作后数小时迅速升高，并有成倍增长之势。病变好转时，又迅速降至正常，升高，并有成倍增长之势。病变好转时，又迅速降至正常，其升高幅度与感染的程度呈正相关。其升高幅度与感染的程度呈正相关。CRP与其它炎症因子的相关性：与其它炎症因子的相关性：CRP与其它炎症与其它炎症因子如白细胞总数、红细胞沉降率和多形核白细胞等具有密因子如白细胞总数、红细胞沉降率和多形核白细胞等具有密切相关性。切相关性。CRP与与WBC存在正相关。在炎症反应中起着积存在正相关。在炎症反应中起着积极作用，使人体具有非特异性抵抗力。在患者疾病发作时，极作用，使人体具有非特异性抵抗力
39、。在患者疾病发作时，CRP可早于可早于WBC而上升，回复正常也很快。故具有极高的而上升，回复正常也很快。故具有极高的敏感性。敏感性。CRP可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断：一旦发生炎可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断：一旦发生炎症，症，CRP水平即升高，而病毒性感染水平即升高，而病毒性感染CRP大都正常。脓毒血大都正常。脓毒血症症CRP迅速升高，而依赖血培养则至少需要迅速升高，而依赖血培养则至少需要48小时，且其阳小时，且其阳性率不高。又如性率不高。又如CRP能快速有效地检测细菌性脑膜炎，其阳能快速有效地检测细菌性脑膜炎，其阳性率达性率达99。恶性肿瘤患者恶性肿瘤患者CRP大都升高。如大都升高。如C
40、RP与与AFP的联合的联合检测，可用于肝癌与肝脏良性疾病的鉴别诊断。检测，可用于肝癌与肝脏良性疾病的鉴别诊断。CRP测定用测定用于肿瘤的治疗和预后有积极意义。手术前于肿瘤的治疗和预后有积极意义。手术前CRP上升，手术后上升，手术后则下降，且其反应不受放疗、化疗和皮质激素治疗的影响，则下降，且其反应不受放疗、化疗和皮质激素治疗的影响，有助于临床估价肿瘤的进程。有助于临床估价肿瘤的进程。CRP用于评估急性胰腺炎的严重程度。当用于评估急性胰腺炎的严重程度。当CRP高于高于250 L时，则可提示为广泛坏死性胰腺炎。时，则可提示为广泛坏死性胰腺炎。正常参考值：正常参考值：10 L11、血清淀粉样蛋白、血
41、清淀粉样蛋白A（serumamyloidA，SAA)是一种急性时限反应蛋白，属于载脂蛋白家是一种急性时限反应蛋白，属于载脂蛋白家族中的异质类蛋白质，相对分子量约族中的异质类蛋白质，相对分子量约12000。在。在急性时限反应中，经急性时限反应中，经IL-1、IL-6和和TNF刺激，刺激，SAA在肝脏中由被激活的巨噬细胞和纤维母细胞合成，在肝脏中由被激活的巨噬细胞和纤维母细胞合成，可升高到最初浓度的可升高到最初浓度的100-1000倍，但半衰期极短，倍，但半衰期极短，只有只有50分钟左右。分钟左右。血清淀粉样蛋白血清淀粉样蛋白A与高密度脂蛋白与高密度脂蛋白(HDL)有关，有关，它能在炎症期间调节高
42、密度脂蛋白的代谢。血清它能在炎症期间调节高密度脂蛋白的代谢。血清淀粉样蛋白淀粉样蛋白A一个特别重要的特性是其降解产物一个特别重要的特性是其降解产物能以淀粉样蛋白能以淀粉样蛋白A(AA)原纤维的方式沉积在不同原纤维的方式沉积在不同的器官中，在慢性炎症疾病中这是一种严重的并的器官中，在慢性炎症疾病中这是一种严重的并发症。发症。与与C反应蛋白反应蛋白(CRP)类似，血清淀粉样蛋类似，血清淀粉样蛋白白A的含量浓度是反映感染性疾病早期炎的含量浓度是反映感染性疾病早期炎症的敏感指标，有助于诊断炎症、评估其症的敏感指标，有助于诊断炎症、评估其活性、监控其活动及治疗。活性、监控其活动及治疗。注意：注意：正性正
43、性APRPAPRP：升高：升高 如：如：AATAAT、AAGAAG、HpHp、CpCp、C C4 4、C C3 3、CRPCRP和和纤维蛋白原。纤维蛋白原。负性负性APRPAPRP：降低：降低 如：如：PAPA、ALBALB、TRFTRF。2 2-MG-MG不是不是APRPAPRP。以以%表示：表示：Alb:57%68%1:1.0%5.7%2:4.9%11.2%:7%13%:9.8%18.2%以以g/L表示：表示：Alb:3552 g/L1:1.04.0 g/L 2:4.08.0 g/L :5.010.0 g/L :6.013.0 g/L血清蛋白电泳的正常组分血清蛋白电泳的正常组分四、血清电泳
44、组分分析四、血清电泳组分分析图形分析图形分析直接法：直接法：电泳染色后，直接观察图形的变电泳染色后，直接观察图形的变化，大概判断各区带的增减。如需定量，化，大概判断各区带的增减。如需定量，可进一步脱色、比色。可进一步脱色、比色。光密度扫描法：光密度扫描法：可直接观察各区带的扫描图可直接观察各区带的扫描图形，且可以以数值表示各组分的含量。形，且可以以数值表示各组分的含量。怎样判断蛋白电泳图谱怎样判断蛋白电泳图谱区带的外观：区带的外观：（估算）（估算）区带的浓度：区带的浓度：测定区带测定区带Pr含量（相对值）含量（相对值），洗脱法或直接光密度。，洗脱法或直接光密度。波峰（光密度扫描）：波峰（光密度
45、扫描）：同一浓度下，波同一浓度下，波峰的高度和宽度与峰的高度和宽度与Pr的纯度密切相关。的纯度密切相关。均一均一Pr：形成一个窄、顶尖和峰高的波：形成一个窄、顶尖和峰高的波峰峰数种数种Pr：形成一个宽、顶平和峰低的波：形成一个宽、顶平和峰低的波峰峰异常电泳图谱的临床意义异常电泳图谱的临床意义异常血清蛋白质电泳图谱的分型及其特征异常血清蛋白质电泳图谱的分型及其特征图谱类型图谱类型TPAlb12肾病型肾病型不定不定肝硬化型肝硬化型NNN-融合融合急性炎症急性炎症NNN慢性炎症慢性炎症蛋白质缺乏型蛋白质缺乏型个别区带出现特征性缺乏个别区带出现特征性缺乏M蛋白血症型蛋白血症型在-区带中间出现M蛋白区带
46、(1)(1)急性和慢性炎症急性和慢性炎症主要特征：主要特征：白蛋白减少或正常，白蛋白减少或正常，1 1和和2 2球蛋白增高，球蛋白增高，当有明显的急性炎症病灶时，可显著增高。炎症转为当有明显的急性炎症病灶时，可显著增高。炎症转为慢性时其增加程度减低。慢性时其增加程度减低。球蛋白增高不明显，当炎球蛋白增高不明显，当炎症转为慢性时，可明显增加。症转为慢性时，可明显增加。/N急性炎症型急性炎症型代表疾病代表疾病：慢性胆：慢性胆道感染、慢性泌尿道感染、慢性泌尿系感染、结核病、系感染、结核病、自身免疫性疾病、自身免疫性疾病、过敏性疾病、恶性过敏性疾病、恶性肿瘤等。肿瘤等。慢性炎症型慢性炎症型（2）肾脏疾
47、病）肾脏疾病肾肾脏脏疾疾病病常常有有血血浆浆蛋蛋白白质质的的丢丢失失。蛋蛋白白尿尿包包括括肾小球性、肾小管性和混合性蛋白尿三类。肾小球性、肾小管性和混合性蛋白尿三类。肾肾小小球球性性蛋蛋白白尿尿：以以中中分分子子量量为为主主，如如TRF等等，称称选选择择性性蛋蛋白白尿尿;可可见见于于肾肾小小球球性性肾肾炎炎、糖糖尿尿病、自身免疫性疾病等。病、自身免疫性疾病等。肾肾小小管管性性蛋蛋白白尿尿:主主要要是是相相对对小小分分子子质质量量的的蛋蛋白白质质排排泄泄增增多多，如如:2-微微球球蛋蛋白白（2-M）。可见于肾盂肾炎，肾血管性疾病等。可见于肾盂肾炎，肾血管性疾病等。混混合合性性蛋蛋白白尿尿：兼兼有
48、有肾肾小小球球滤滤过过功功能能与与肾肾小小管管重重吸吸收收功功能能的的障障碍碍。严严重重肾肾病病致致肾肾小小球球失失去去分分子子筛筛作作用用，出出现现非非选选择择性性蛋蛋白白尿尿，可可表表现现为为广广泛的低血浆蛋白质血症。泛的低血浆蛋白质血症。主要特征：此图形的分子此图形的分子筛效应明显，为典型的筛效应明显，为典型的选择性蛋白漏出型图形，选择性蛋白漏出型图形，其特征为白蛋白明显减其特征为白蛋白明显减低，低，1 1球蛋白轻度增球蛋白轻度增,2 2球蛋白明显增加，球蛋白明显增加，球蛋减低、正常或增球蛋减低、正常或增高。成人肾病综合征时高。成人肾病综合征时,球蛋白通常增加，球蛋白通常增加，特别是狼疮
49、性肾炎淀粉特别是狼疮性肾炎淀粉样肾病等，样肾病等，球蛋白则球蛋白则明显增加。明显增加。N病理分析：病理分析：肾肾小球小球损伤损伤 AlbTP Alb1（主要是（主要是1 1-AG-AG）2 2-MG-MG、2（3）肝脏疾病）肝脏疾病+()主要特征：主要特征：清蛋白在所有病清蛋白在所有病例中均有不同程度的减低，例中均有不同程度的减低，1、2和和球蛋白正常或降低，球蛋白正常或降低，球蛋白常明显增高，球蛋白常明显增高，区带区带的宽度也明显增加，可见的宽度也明显增加，可见-桥，为本病的特征。根据桥，为本病的特征。根据-桥的程度可将其分为三型。桥的程度可将其分为三型。Alb带带:PA，Alb明显降低明显
50、降低1-带：带：AAT增高显著增高显著,AAG偏偏低低2-带：带：Cp轻度升高，轻度升高，AMG明显明显增增 高；高；Hp偏低偏低-带：带：TRF明显降低明显降低-带：带：IgG弥散性增高，弥散性增高，IgA明显明显升升 高；高；CRP轻度升高。轻度升高。肝硬化肝硬化第第型：型：和和区带连成一片，难于分开，称为区带连成一片，难于分开，称为-桥。此型除桥。此型除见于极少数结缔组织疾病外，几乎全见于肝硬化，如见见于极少数结缔组织疾病外，几乎全见于肝硬化，如见到到-桥，并伴有桥，并伴有1和和2球蛋白减少时可确诊为肝硬化，球蛋白减少时可确诊为肝硬化，故将此型称为故将此型称为肝硬化型肝硬化型。第第型：型