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1、抗生素效价微生物检定法抗生素效价微生物检定法赵永成 生工1001 41041001391.概述一、抗生素的概念及一、抗生素的概念及抗生素的生物检定抗生素的生物检定 抗抗生生素素是是由由微微生生物物所所产产生生的的极极微微量量便便具具有有选选择择性性地地杀杀死死或或抑抑制制其其他他病病原原微微生生物物生生长长的一的一类类天然有机化合物。天然有机化合物。抗抗生生素素的的生生物物检检定定是是以以抗抗生生素素对对微微生生物的抗菌效力物的抗菌效力作为效价的衡量标准。作为效价的衡量标准。一、抗生素的效价和单位一、抗生素的效价和单位 抗抗生生素素的的含含量量用用效效价价和和单单位位表表示示。该该词有时不加区
2、别统称为效价单位。词有时不加区别统称为效价单位。效效价价（otency），指指检检品品的的实实际际单单位位数数与与其其标标示示量量的的比比值值。常常表表示示为为效效价价的百分数。的百分数。单单位位（unit,u）单单位位是是衡衡量量抗抗生生素素有有效成分的具体尺度。效成分的具体尺度。、重量单位、重量单位 以抗生素的生物活性部分重量作单以抗生素的生物活性部分重量作单位位微克（）单位，毫克单微克（）单位，毫克单位。位。、类似重量单位、类似重量单位 以特定的纯粹抗生素盐类的重量以特定的纯粹抗生素盐类的重量作为单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四环素盐酸作为单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四环素盐酸盐（包括无生物活
3、性的盐酸根在内）微克（盐（包括无生物活性的盐酸根在内）微克（）单位，毫克个单位。这是）单位，毫克个单位。这是根据国际使用习惯而来的。根据国际使用习惯而来的。、质量折算单位、质量折算单位 以特定的纯抗生素盐的质量为单以特定的纯抗生素盐的质量为单位而加以折算。青霉素为位而加以折算。青霉素为1单位单位、特定单位、特定单位 以特定的抗生素标准品的某一质量以特定的抗生素标准品的某一质量定为一单位。定为一单位。微生物发的分类稀释法浊度法双碟法2 2、浊度法浊度法系利用抗生素在液体培养基中对系利用抗生素在液体培养基中对试验菌生长的抑制作用，通过试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后测定培养后细菌浊度值的大小细
4、菌浊度值的大小，比较标准品与供试品，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品效价的种方法。效价的种方法。3 3、管管碟碟法法：是是利利用用抗抗生生素素在在含含敏敏感感试试验验菌菌的的琼琼脂脂培培养养基基中中的的球球面面扩扩散散渗渗透透作作用用，从从而而形成一定的抑菌圈。形成一定的抑菌圈。通通过过琼琼脂脂培培养养基基，可可观观察察并并测测量量出出抑抑菌菌圈圈的的大小。大小。管碟法测定抗生素效价管碟法测定抗生素效价原理和方法原理和方法一一 原理原理 在在一一定定的的抗抗生生素素浓浓度度范范围围内内，对对数数剂剂量量(浓浓度度)与与抑抑菌菌圈圈的的表
5、表面面积积或或直直径径成成正正比比，可可以以得得出出一条曲线。一条曲线。抗抗生生素素浓浓度度换换算算成成对对数数，则则抑抑菌菌圈圈直直径径与与抗抗生素对数成直线关系生素对数成直线关系管碟法的材料管碟法的材料一，仪器菌种 培养基 培养皿 牛角杯 陶瓦圆盖二，试剂无菌生理盐水 的磷酸缓冲液 青霉素标准品储备液 青霉素标准品使用液管碟法测定操作管碟法测定操作1.1.试验用菌液试验用菌液金黄色葡萄球菌悬液：取金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌悬液：取金黄色葡萄球菌的营养斜面培养物，接种于营养琼脂斜面的营养斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在上，在35373537培养培养20h20h到到22h22h，；临用前
6、用，；临用前用水或者灭菌生理盐水溶液将菌苔洗下，备水或者灭菌生理盐水溶液将菌苔洗下，备用用2 供试品及标准品的配制标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。供标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。供试品应放于干燥器内至少试品应放于干燥器内至少30min方可称取。称量方可称取。称量最好为最好为一次取样称量一次取样称量，动作迅速，不得反复称取，动作迅速，不得反复称取，取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免吸水。取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免吸水。标准品的称量最好用标准品的称量最好用1/100,000克的分析天平，克的分析天平，样品称量不得低于样品称量不得低于1/10,000克的分析天平。天平克的分析天
7、平。天平中的干燥加入剂应保持经常注意更换。中的干燥加入剂应保持经常注意更换。称量结束后，超声波处理后的磷酸缓冲液，定称量结束后，超声波处理后的磷酸缓冲液，定容至刻度，过滤并稀释。容至刻度，过滤并稀释。双碟的制备：双碟的制备：取内径取内径90mm、高、高1617mm的平底双碟；的平底双碟；注入加热融化的培养基注入加热融化的培养基20ml，使在碟底内均，使在碟底内均匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。另取培养基适量加热融化后，放冷至另取培养基适量加热融化后，放冷至4850（芽孢可至（芽孢可至60），加入规定的试验菌悬液），加入规定的试验菌悬液适量（能得清晰的
8、抑菌圈为度。）适量（能得清晰的抑菌圈为度。）二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在在 1824 mm。（二）抑菌圈的形成（二）抑菌圈的形成在平板底部四边，分别在平板底部四边，分别对角注明对角注明“SH”、“SL”和和“UH”、“UL”标记标记将不锈钢小管将不锈钢小管(俗称为牛俗称为牛津杯津杯)放置在含敏感试验放置在含敏感试验菌的琼脂培养基上。菌的琼脂培养基上。thsluh以无菌滴管分别在每个以无菌滴管分别在每个牛津杯内加入相应的抗牛津杯内加入相应的抗生素溶液至满但不溢出生素溶液至满但不溢出管外管外且四杯内液面高度相同，且四杯内液面高度相同，盖上平
9、皿盖，静置盖上平皿盖，静置30分分钟。钟。将培养基置入适宜试将培养基置入适宜试验菌生长的培养箱中，验菌生长的培养箱中，琼脂培养基中的试验琼脂培养基中的试验菌开始生长。菌开始生长。抑菌圈直径大小与抗生素浓度相关；抑菌圈直径大小与抗生素浓度相关；比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。可计算出抗生素的效价。计算检品的效价求出求出W和和VW=（SH+TH）-（SL+TL）V=（TH+TL）-（SH+SL）TH供试品高剂量的抑菌圈供试品高剂量的抑菌圈TL供试品低剂量的抑菌圈供试品低剂量的抑菌圈SH标准品高剂量的抑菌圈标准品高剂量的抑菌圈SL标准品低剂量的抑菌圈标准品低剂量的抑菌圈求出求出=D log（IV/W）供试品和标准品的效价比供试品和标准品的效价比D标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为为1I 高低剂量之比的对数，即高低剂量之比的对数，即log2或或log4 Pr=ArPr供试品实际单位数供试品实际单位数Ar供试品标示量或估计单位供试品标示量或估计单位