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1、第十次实验第十次实验 抗生素抗菌谱及微生物的耐药性抗生素抗菌谱及微生物的耐药性的测定的测定实验实验(一一)抗生素抗菌谱的测定抗生素抗菌谱的测定实验目的：实验目的：学习抗生素抗菌谱的测定方法，了解常见抗学习抗生素抗菌谱的测定方法，了解常见抗生素的抗菌谱。生素的抗菌谱。抗生素抗生素是一类由微生物或其它生物生命活动中是一类由微生物或其它生物生命活动中合成的次级代谢产物或其人工衍生物，在低浓度时合成的次级代谢产物或其人工衍生物，在低浓度时就能抑制或干扰它种生物（包括病原菌、病毒、癌就能抑制或干扰它种生物（包括病原菌、病毒、癌细胞等）的生命活动，可作为优良的化学治疗剂。细胞等）的生命活动，可作为优良的化
2、学治疗剂。各种抗生素有其不同的制菌范围，即抗菌谱。如青霉素一般各种抗生素有其不同的制菌范围，即抗菌谱。如青霉素一般对对G+细菌有抗性；链霉素以抗细菌有抗性；链霉素以抗G-为主；庆大霉素、头孢霉为主；庆大霉素、头孢霉素兼抗素兼抗G+、G-细菌；氯霉素、四环素能同时抗细菌；氯霉素、四环素能同时抗G+、G-细菌及细菌及立克次氏体和衣原体，称为广谱抗生素。立克次氏体和衣原体，称为广谱抗生素。实验原理实验原理抗菌谱不同抗生素抑制细菌生长的机制不同，不同抗生素抑制细菌生长的机制不同，如青霉素抑制细菌细胞壁的合成，如青霉素抑制细菌细胞壁的合成，四环素抑制细菌蛋白质的合成。四环素抑制细菌蛋白质的合成。抗生素抗
3、生素作用机制作用机制作用后果作用后果杆菌肽氨苄青霉素头孢霉素抑制细胞壁的合成阻止肽聚糖的合成短杆菌肽干扰细胞膜功能细胞内物质外漏卡拉霉素四环素壮观霉素庆大霉素链霉素抑制蛋白质合成，与30s核糖体结合促进错译，抑制肽链延伸灰黄霉素抑制DNA的合成抑制有丝分裂中的纺锤体功能丝裂霉素抑制DNA的复制抑制复制后的分离放线菌素D抑制RNA的转录阻止DNA依赖的RNA合成利福霉素抑制RNA的合成，RNA聚合酶结合阻止RNA的合成实验材料实验材料菌种：菌种：各种不同来源的细菌。各种不同来源的细菌。各种不同来源的细菌。各种不同来源的细菌。培养基：培养基：牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基牛
4、肉膏蛋白胨培养基供试抗生素：供试抗生素：卡那霉素卡那霉素卡那霉素卡那霉素（母液浓度母液浓度母液浓度母液浓度50mg/mL，溶于水溶于水)设备与用具：设备与用具：恒温培养箱、接种环、培养皿。恒温培养箱、接种环、培养皿。恒温培养箱、接种环、培养皿。恒温培养箱、接种环、培养皿。实验步骤实验步骤1 1 倒（牛肉膏蛋白胨倒（牛肉膏蛋白胨倒（牛肉膏蛋白胨倒（牛肉膏蛋白胨卡那霉素卡那霉素卡那霉素卡那霉素(终浓度终浓度终浓度终浓度5050 g/mL)g/mL)）平板平板平板平板2 2 将平板将平板将平板将平板(皿底）划分为皿底）划分为皿底）划分为皿底）划分为6 6等份，每一等份内标明一种细等份，每一等份内标明
5、一种细等份，每一等份内标明一种细等份，每一等份内标明一种细菌的名称；菌的名称；菌的名称；菌的名称；3 3 用接种环分别接种不用来源的细菌至相应的区域用接种环分别接种不用来源的细菌至相应的区域用接种环分别接种不用来源的细菌至相应的区域用接种环分别接种不用来源的细菌至相应的区域4 4 将划好线的细菌平板，置将划好线的细菌平板，置将划好线的细菌平板，置将划好线的细菌平板，置3737倒置培养倒置培养倒置培养倒置培养24h-48h24h-48h。5 5 记录细菌的生长情况，根据细菌的生长情况，可初步记录细菌的生长情况，根据细菌的生长情况，可初步记录细菌的生长情况，根据细菌的生长情况，可初步记录细菌的生长
6、情况，根据细菌的生长情况，可初步确定确定确定确定卡那霉素卡那霉素卡那霉素卡那霉素的抗菌谱。的抗菌谱。的抗菌谱。的抗菌谱。实验结果实验结果 记录各种不同来源的细菌的生长情况记录各种不同来源的细菌的生长情况记录各种不同来源的细菌的生长情况记录各种不同来源的细菌的生长情况实验目的：实验目的：学习微生物耐药性的测定方法，了解微生学习微生物耐药性的测定方法，了解微生物对抗生素耐药性产生的原因及对策物对抗生素耐药性产生的原因及对策实验实验(二二)微生物耐药性的测定微生物耐药性的测定耐药性耐药性(antibiotic resistance)即抗药性即抗药性,指微指微生物、寄生虫或肿瘤细胞对于化学治疗药物作用
7、的生物、寄生虫或肿瘤细胞对于化学治疗药物作用的耐受性。耐药性一旦产生，药物的化疗作用就明显耐受性。耐药性一旦产生，药物的化疗作用就明显下降。下降。实验原理实验原理耐药性产生的原因耐药性产生的原因1、产生一种使药物失去活性的酶；、产生一种使药物失去活性的酶；2、把药物作用的靶位加以修饰和改变；、把药物作用的靶位加以修饰和改变；3、形成、形成“救护救护”途径途径4、使药物不能透过细胞膜；、使药物不能透过细胞膜；5、通过主动外排系统把进入细胞内的药、通过主动外排系统把进入细胞内的药物泵物泵出细胞外；出细胞外；实验材料实验材料菌种：菌种：金黄色葡萄球菌。金黄色葡萄球菌。培养基：培养基：牛肉膏蛋白胨培养
8、基牛肉膏蛋白胨培养基供试抗生素：供试抗生素：庆大霉素、卡那霉素、四环素、氨苄青霉庆大霉素、卡那霉素、四环素、氨苄青霉素、壮观霉素和链霉素、无菌水素、壮观霉素和链霉素、无菌水设备与用具：设备与用具：恒温培养箱、镊子、圆滤纸片、培养皿。恒温培养箱、镊子、圆滤纸片、培养皿。滤纸片法测定微生物的耐药性滤纸片法测定微生物的耐药性所需浓度抗生素溶液配制所需浓度抗生素溶液配制A A A A 氨苄青霉素（氨苄青霉素（氨苄青霉素（氨苄青霉素（50g/mL)，B B 卡那霉素（卡那霉素（卡那霉素（卡那霉素（50g/mL)，C C 四环素（四环素（四环素（四环素（50g/mL)，D D 庆大霉素（庆大霉素（庆大霉素
9、（庆大霉素（50g/mL)，E E 链霉素（链霉素（链霉素（链霉素（50g/mL)，F F 壮观霉素壮观霉素壮观霉素壮观霉素(50g/mL)，实验步骤实验步骤1 1 1 1 倒牛肉膏蛋白胨平板倒牛肉膏蛋白胨平板倒牛肉膏蛋白胨平板倒牛肉膏蛋白胨平板2 2 2 2 取取取取0.2ml0.2ml0.2ml0.2ml菌液加入平板中，涂布均匀。菌液加入平板中，涂布均匀。菌液加入平板中，涂布均匀。菌液加入平板中，涂布均匀。3 3 3 3 将平板将平板将平板将平板(皿底）划分为皿底）划分为皿底）划分为皿底）划分为6 6 6 6等份，每一等份内标明一种抗等份，每一等份内标明一种抗等份，每一等份内标明一种抗等份
10、，每一等份内标明一种抗生素的名称；分别将浸有各种抗生素的小圆滤纸片贴生素的名称；分别将浸有各种抗生素的小圆滤纸片贴生素的名称；分别将浸有各种抗生素的小圆滤纸片贴生素的名称；分别将浸有各种抗生素的小圆滤纸片贴在平板的每一等份中。在平板的每一等份中。在平板的每一等份中。在平板的每一等份中。4 4 4 4 将贴好滤纸片的含菌平板，置将贴好滤纸片的含菌平板，置将贴好滤纸片的含菌平板，置将贴好滤纸片的含菌平板，置37373737倒置培养倒置培养倒置培养倒置培养24-48h24-48h24-48h24-48h。5 5 5 5 测量并记录抑菌圈的直径，抑测量并记录抑菌圈的直径，抑测量并记录抑菌圈的直径，抑测
11、量并记录抑菌圈的直径，抑(杀杀杀杀)菌圈的大小，能够菌圈的大小，能够菌圈的大小，能够菌圈的大小，能够反映抗生素抑反映抗生素抑反映抗生素抑反映抗生素抑(杀杀杀杀)菌能力的大小；根据其直径的大小，菌能力的大小；根据其直径的大小，菌能力的大小；根据其直径的大小，菌能力的大小；根据其直径的大小，可初步确定细菌对各种抗生素的耐药性情况可初步确定细菌对各种抗生素的耐药性情况可初步确定细菌对各种抗生素的耐药性情况可初步确定细菌对各种抗生素的耐药性情况(或敏感或敏感或敏感或敏感性情况性情况性情况性情况)()()()(自带尺子）自带尺子）自带尺子）自带尺子）氨苄青霉素氨苄青霉素卡那霉素卡那霉素四环素四环素庆大霉素庆大霉素链霉素链霉素 壮观霉素壮观霉素无菌无菌水水抗生素抗生素抑（杀）菌圈直抑（杀）菌圈直径径/mm抗生素抗生素抑（杀）菌圈直抑（杀）菌圈直径径/mm氨苄青霉素氨苄青霉素庆大霉素庆大霉素庆大霉素庆大霉素卡那霉素卡那霉素链霉素链霉素链霉素链霉素四环素四环素四环素四环素壮观霉素壮观霉素壮观霉素壮观霉素实验结果实验结果思思 考考 题题1 1、什么叫抗生素？、什么叫抗生素？什么是耐药性？什么是耐药性？2、微生物产生耐药性的原因有哪些？、微生物产生耐药性的原因有哪些？